小鼠肿瘤坏死因子α(TNF-α)试剂盒简述

小鼠肿瘤坏死因子α(TNF-α)试剂盒试验原理：
小鼠肿瘤坏死因子α(TNF-α)试剂盒是固相夹心法酶联免疫吸附实验（ELISA）.已知待测物质浓度的标准品、未知浓度的样品加入微孔酶标板内进行检测。先将待测物质和生物素标记的抗体同时温育。洗涤后，加入亲和素标记过的HRP。再经过温育和洗涤，去除未结合的酶结合物，然后加入底物A、B，和酶结合物同时作用。产生颜色。颜色的深浅和样品中待测物质的浓度呈比例关系。

小鼠肿瘤坏死因子α(TNF-α)试剂盒试剂盒内容及其配制

小鼠肿瘤坏死因子α(TNF-α)试剂盒自备材料
1）蒸馏水。
2）加样器：5ul、10ul、50ul、100ul、200ul、500ul、1000ul。
3）振荡器及磁力搅拌器等。

小鼠肿瘤坏死因子α(TNF-α)试剂盒安全性
1）避免直接接触终止液和底物A、B。一旦接触到这些液体，请尽快用水冲洗。
2）实验中不要吃喝、抽烟或使用化妆品。
3）不要用嘴吸取试剂盒里的任何成份。

小鼠肿瘤坏死因子α(TNF-α)试剂盒操作注意事项
1）试剂应按标签说明书储存，使用前恢复到室温。稀稀过后的标准品应丢弃，不可保存。
2）实验中不用的板条应立即放回包装袋中，密封保存，以免变质。
3）不用的其它试剂应包装好或盖好。不同批号的试剂不要混用。保质前使用。
4）使用一次性的吸头以免交叉污染，吸取终止液和底物A、B液时，避免使用带金属部分的加样器。
5）使用干净的塑料容器配置洗涤液。使用前充分混匀试剂盒里的各种成份及样品。
6）洗涤酶标板时应充分拍干，不要将吸水纸直接放入酶标反应孔中吸水。
7）底物A应挥发，避免长时间打开盖子。底物B对光敏感，避免长时间暴露于光下。避免用手接触，有毒。实验完成后应立即读取OD值。
8）加入试剂的顺序应一致，以保证所有反应板孔温育的时间一样。
9）按照说明书中标明的时间、加液的量及顺序进行温育操作。

小鼠肿瘤坏死因子α(TNF-α)试剂盒样品收集、处理及保存方法
1）血清—–操作过程中避免任何细胞刺激。使用不含热原和内毒素的试管。收集血液后，1000×g离心10分钟将血清和红细胞迅速小心地分离。
2）血浆—–EDTA、柠檬酸盐、肝素血浆可用于检测。1000×g离心30分钟去除颗粒。
3）细胞上清液—1000×g离心10分钟去除颗粒和聚合物。
4）组织匀浆—–将组织加入适量生理盐水捣碎。1000×g离心10分钟，取上清液
5）保存——如果样品不立即使用，应将其分成小部分-70 ℃保存，避免反复冷冻。尽可能的不要使用溶血或高血脂血。如果血清中大量颗粒，检测前先离心或过滤。不要在37℃或更高的温度加热解冻。应在室温下解冻并确保样品均匀地充分解冻。

小鼠肿瘤坏死因子α(TNF-α)试剂盒试剂的准备
1）标准品：标准品的系列稀释应在实验时准备，不能储存。稀释前将标准品振荡混匀。
2）洗涤缓冲液（50×）的稀释：蒸馏水50倍稀释。

小鼠肿瘤坏死因子α(TNF-α)试剂盒操作步骤
1）使用前，将所有试剂充分混匀。不要使液体产生大量的泡沫，以免加样时加入大量的气泡，产生加样上的误差。
2）根据待测样品数量加上标准品的数量决定所需的板条数。每个标准品和空白孔建议做复孔。每个样品根据自己的数量来定，能使用复孔的尽量做复孔。标本用标本稀释液1：1稀释后加入50ul于反应孔内。
3）加入稀释好后的标准品50ul于反应孔、加入待测样品50ul于反应孔内。立即加入50ul的生物素标记的抗体。盖上膜板，轻轻振荡混匀，37℃温育1小时。
4）甩去孔内液体，每孔加满洗涤液，振荡30秒，甩去洗涤液，用吸水纸拍干。重复此操作3次。如果用洗板机洗涤，洗涤次数增加一次。
5）每孔加入80ul的亲和链酶素-HRP，轻轻振荡混匀，37℃温育30分钟。
6）甩去孔内液体，每孔加满洗涤液，振荡30秒，甩去洗涤液，用吸水纸拍干。重复此操作3次。如果用洗板机洗涤，洗涤次数增加一次。
7）每孔加入底物A、B各50ul，轻轻振荡混匀，37℃温育10分钟。避免光照。
8）取出酶标板，迅速加入50ul终止液，加入终止液后应立即测定结果。
9）在450nm波长处测定各孔的OD值。

小鼠肿瘤坏死因子α(TNF-α)试剂盒局限
6号标准品以上的结果为非线性的，根据此标准曲线无法得到精确的结果。

小鼠肿瘤坏死因子α(TNF-α)试剂盒试剂盒性能
1. 灵敏度：最小的检测浓度小于1号标准品。稀释度的线性。样品线性回归与预期浓度相关系数R值为0.990。
2. 特异性：不与其它细胞因子反应。
3. 重复性：板内、板间变异系数均小于10%。

小鼠肿瘤坏死因子α(TNF-α)试剂盒结果判断与分析
1、仪器值：于波长450nm的酶标仪上读取各孔的OD值
2、以吸光度OD值为纵坐标（Y），相应的待测物质标准品浓度为横坐标（X），做得相应的曲线，样品的待测物质含量可根据其OD值由标准曲线换算出相应的浓度。

rndsystems 鼠TNF-α定量因子ELISA试剂盒

详细介绍

产品咨询

rndsystems  鼠TNF-α定量因子ELISA试剂盒

TNF-α

肿瘤坏死因子α在炎症、免疫系统发育、细胞凋亡和脂质代谢中起着核心作用。TNF-α首先被鉴定为一种由巨噬细胞产生的细胞毒性因子，能够杀死小鼠肿瘤细胞。它是原型配体，与淋巴毒素α一起被鉴定为TNF超家族的第一个成员。活性TNF-α和TNF超家族的其他成员作为具有高度结构同源性的同源三聚体存在。受体结合发生在两个TNF-α单体的界面上。当所有三个单体界面都与受体结合时，受体就会激活。对于TNF-α，受体结合和激活通过TNF-R1或TNF-RII发生，随后导致NF-kB或MAPK信号通路的激活。TNF-α可以激活的另一种途径利用TNF-RI的死亡结构域来诱导细胞凋亡。TNF-α主要通过NF-kB信号传导促进炎症反应

小鼠TNF-α定量因子ELISA试剂盒

测定时间4.5小时

每孔细胞培养上清液（50μL）、血清（50μl）、EDTA血浆（50μ升）、肝素血浆（50 uL）所需的样品类型和体积

灵敏度7.21 pg/mL

含量测定范围10.9-700 pg/mL（细胞培养上清液、血清、EDTA血浆、肝素血浆）

特异性天然和重组小鼠TNF-α。

交叉反应性<可用相关分子观察到的0.5%交叉反应性。<用测试物种观察到50%的跨物种反应性。

干扰对1个或多个可用的相关分子观察到的干扰。

产品摘要

Quantikine小鼠TNF-α免疫测定是一种4.5小时固相ELISA，旨在测量细胞培养上清液、血清和血浆中的小鼠TNF-a水平。它含有大肠杆菌表达的重组小鼠TNF-α和针对重组因子产生的抗体。这种免疫测定法已被证明可以准确地定量重组小鼠TNF-α。使用天然小鼠TNF-α获得的结果显示出与使用重组试剂盒标准品获得的标准曲线平行的剂量-反应曲线。这些结果表明，该试剂盒可用于测定天然小鼠TNF-α的相对质量值。

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