RNAi 研究中的修饰亚磷酰胺的作用

RNAi 研究中的修饰亚磷酰胺的作用

修饰的DNA 亚磷酰胺RNA 亚磷酰胺在研究中发挥着至关重要的作用,因为它们允许将特定的化学修饰引入核酸中,从而能够研究结构功能关系、基因表达调控以及基因编辑和 RNA 干扰 (RNAi) 等治疗应用。

最近,科学家(见下文参考文献)研究了 RNA 干扰作为靶向基因沉默工具的潜力及其在基因技术和治疗开发中的应用。RNAi 是一种自然防御机制,利用短干扰 RNA (siRNA) 来沉默特定基因。这些 siRNA 形成 RNA 诱导的沉默复合物 (RISC),可降解目标 mRNA 序列,从而导致基因沉默,但不会引起非特异性 RNA 降解。这种特异性使得 siRNA 成为研究生物功能的有力工具和多种疾病的潜在治疗剂。

研究人员合成了三种双链体 RNA,其中修饰的核苷取代了 siRNA 3' 突出端区域中未修饰的核苷。修饰的核苷是基于对肝细胞核因子4a (HNF4α)(一种参与肝脏发育和组织特异性特征表达的核激素受体)的研究而设计的,以提高针对该受体的siRNA功效。体外实验表明,与未修饰的 siRNA 相比,修饰核苷的 siRNA 能够更有效地抑制 HNF4α。

修饰 siRNA 的合成涉及修饰核苷的制备以及随后 siRNA 分子的组装(图 1 和 2)。采用亚磷酰胺化学合成修饰的核苷,然后使用自动 DNA/RNA 合成仪将其掺入 siRNA 链中。所得的 siRNA 通过高效液相色谱 (HPLC) 纯化,以确保高纯度。

RNAi 研究中的修饰亚磷酰胺的作用

RNAi 研究中的修饰亚磷酰胺的作用

图 2. 使用 21 个修饰核苷合成的修饰 siRNA 寡核糖核苷酸之一,

细胞RNA分离试剂盒(Cell RNA Isolation Kit)TBS6001


细胞RNA分离试剂盒(Cell RNA Isolation Kit)

简要描述:细胞RNA分离试剂盒(Cell RNA Isolation Kit)Tribo细胞RNA分离试剂盒旨在从多达200个样本的培养细胞中分离总RNA。上海金畔生物科技有限公司专业提供一站式实验产品,欢迎咨询!

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品牌 其他品牌 货号 TBS6001
供货周期 一个月

细胞RNA分离试剂盒(Cell RNA Isolation Kit)

高质量RNA的分离是基因表达研究中重要的第一步,如RT-PCR、qRT-PCR和阵列分析。Tribo细胞RNA分离试剂盒旨在从多达200个样本的培养细胞中分离总RNA。该试剂盒可以显著提高RNA的数量和质量。

应用程序:

直接分析:从培养细胞中分离总RNA。

主要特点:

简单方便:不需要特殊设备。
高产率:该方法比旋转柱法获得更高的RNA产率。
多功能性:多种RNA包括微小RNA。

储存条件:

该套件在室温下运输。将试剂储存在4℃下。
保质期:收货后12个月。

Tribioscience是一家专注于为生命科学研究实验室和公司提供试剂的生物技术公司,是一家私人控股的生物技术公司,由斯坦福大学的一群科学家于2010年创立。公司专注于为分子生物学、生物化学、免疫学、传染病、基因治疗、神经科学、动物实验和药物开发领域的生命科学研究实验室和生物技术公司提供高质量的产品。产品涵盖抗体、生化测试、ELISA试剂盒、PCR及相关试剂等。我们还为生物技术行业和学术界提供CRO(研究合同组织)服务。我们的动物建模服务已被用于动物模型开发和活泼的高排名大学的评估。

细胞RNA分离试剂盒(Cell RNA Isolation Kit)

RNA 定量的最佳技术介绍

RNA 定量的最佳技术介绍

RNA 和 DNA 定量(有时称为核酸定量)可确定给定样品中 RNA 或 DNA 的浓度。定量过程的一部分可能涉及处理混合物样品,可能含有多种污染物,例如蛋白质、其他核酸或有机化合物。

什么是RNA定量?

有多种实验方法可用于 RNA 定量。其中包括用于 RNA 定量、荧光或分光光度测量的 PCR 方法。 

用于RNA 定量的分光光度法和荧光法比 PCR 等方法具有多个优势。使用光学方法进行 RNA 定量不需要任何额外的样品制备,非常经济高效且耗时较少。虽然基于 PCR 的方法可以提供良好的灵敏度,但它们更复杂且执行成本更高,并且只有极低 RNA 浓度的 RNA 定量才需要这种水平的灵敏度。 

分光光度法和荧光分析

分光光度测量提供了一种稳健且直接的 RNA 定量方法。RNA 定量通常在 260 nm 下进行,同时还会收集 UV 范围内的一系列波长。大多数蛋白质、小有机分子和核酸在该区域具有很强的吸收和发射特征,从而可以对 RNA 进行定量并识别潜在污染物。

在已知光程下测量的样品吸光度与该样品的浓度成正比。在特定波长(RNA 为 260 nm)下透过样品的光量可用于 Beer-Lambert 方程来计算感兴趣样品的浓度,在本例中用于 RNA 定量。还必须知道感兴趣物种的摩尔吸收系数。

计算摩尔吸收系数相对简单。由于给定波长下的吸光度和光程之间的关系与浓度成线性比例,因此可以测量参考样品的一系列给定稀释度。通过对这些数据点进行线性拟合,可以计算摩尔吸收系数并用于将来的量化。对于 DNA 和 RNA 等充分表征的样品,系数是已知的并包含在分析软件中。 

RNA 定量也可以通过荧光测量来进行荧光测量比基于吸光度的测量具有更高的灵敏度。已经开发出专为激发感兴趣的分析物而开发的检测试剂盒。即使在复杂混合物或存在污染物的情况下,这些也可用于 RNA 定量。样品的荧光量也与浓度成正比,并且可以通过使用已知浓度的类似样品的标准曲线来定量。 

用于 RNA 定量的分光光度计

DeNovix 是生物技术专家,拥有多种针对 RNA 定量进行优化的仪器,包括 DS-11 系列和 QFX 荧光计,这些仪器在设计时考虑了 RNA 定量的一些复杂性。

QFX 荧光计具有出色的灵敏度和特异性,适用于可能涉及高度复杂的混合物或需要在极低浓度下进行 RNA 定量的挑战性 RNA 定量情况。它配备了四个光源和带有敏感光电二极管的发射通道,所有这些都可以选择用于药理学应用的安全审计跟踪记录。 

DS -11 系列是一款适用于常规样品和珍贵样品的微量仪器。DS-11 可以处理小至一微升的体积,并在最宽的可用动态范围内进行定量。DS-11 还配备了易于使用的软件,可以显示全光谱扫描以及通常用作 RNA 定量和质量控制一部分的 260/280 和 260/230 比率。

使用 RNA 测序对细胞类型进行分类

使用 RNA 测序对细胞类型进行分类

RNA 测序 (RNA-seq) 是一项革命性技术,改变了基因组学领域。它为研究人员揭示细胞和分子水平上发生的许多复杂过程开辟了新途径。与 DNA 测序不同,RNA-seq 通过提供任何给定时间所有活性基因的快照来深入了解基因组的功能元件。那么,这如何帮助用户对不同的细胞类型进行分类呢?请继续阅读以了解更多信息。

RNA 测序在细胞类型分类中的威力

RNA 测序已成为细胞类型分类的强大工具。它使科学家能够识别特定的细胞类型并了解它们在各种生物过程中的作用。这是因为 RNA-seq 能够分析单个细胞中的基因表达水平。许多研究领域都将从这种开创性的方法中受益,但它在研究肺纤维化等疾病方面已经显示出非凡的潜力,在这些疾病中,不同细胞群的作用尚未全了解。

单细胞 RNA 测序:游戏规则改变者

单细胞 RNA 测序 (scRNA-seq) 将 RNA 测序提升到一个新水平。它使科学家能够分析单个细胞的转录组,提供细胞类型和状态的高分辨率视图。与传统的 RNA 测序方法相比,这是一个重大进步,传统的 RNA 测序方法提供大量细胞的平均基因表达谱。

在最近一项题为“单细胞 RNA 测序揭示肺纤维化中不同上皮和间质谱系的促纤维化作用“的研究中,scRNA-seq 被用来揭示肺纤维化的复杂细胞景观。该研究使用 10x Genomics Chromium 平台进行单细胞 RNA 测序,该平台生成乳液中的单细胞凝胶珠 (GEM),用于逆转录过程以创建 cDNA。然后对该 cDNA 进行扩增并用于测序。

DeNovix 在 RNA 测序中的作用

DeNovix DS-11 FX+ 分光光度计/荧光计在这项研究中发挥了至关重要的作用。该仪器用于定量 RNA,这是 RNA 测序过程中的关键步骤。RNA的定量确保了测序过程有足够的材料,并有助于保证样品的质量。这是 10x Genomics 平台单细胞 RNA 测序的准备步骤。

细胞计数是 RNA 测序的另一个重要准备步骤。在一项相关研究“模拟人类肺细胞暴露于野火中发现异常的 lncRNA 特征“中,DeNovix CellDrop™ 系统用于在 0.4% 台盼蓝 1:1 稀释液中对人类永生化支气管气管细胞 (AALE) 进行计数,并在其死亡前 24 小时进行计数。直接烟雾暴露(DSE)。暴露于气液界面 (ALI) 室后,细胞用于 RNA 测序分析,以识别 IncRNA 的变化。结果表明烟雾成分对于野火烟雾的分子效应的重要性。具体来说: 

“我们的结果阐明了化学成分(以及地理来源)在评估野火烟雾暴露可能导致的呼吸系统健康风险方面的重要性。我们使用通过实验生成的 RNA-seq 数据进行公正的分析,旨在识别差异表达的转录本,在这里,通过严格和全局的分析,我们证明不同的野火烟雾会诱导 lncRNA 的异常表达。”

机器学习和 RNA 测序

机器学习是另一种越来越多地与 RNA 测序结合使用的工具。通过训练已知细胞类型的数据,机器学习算法可以根据细胞类型的基因表达谱对细胞类型进行分类。这可以大大提高细胞类型分类的准确性和效率。

RNA测序的应用

RNA-seq 的应用广泛且多样。从了解疾病中细胞群的复杂性到发现选择性剪接变体,RNA-seq 是现代基因组学库中的多功能工具。

RNA 测序的未来

随着新技术和方法的不断开发,RNA测序的未来是光明的。对不同 RNA 分子及其表达水平的研究不断增长,这将与 RNA-seq 的进步契合,并扩大我们可以理解的细胞类型的数量。 

在 DeNovix,我们很自豪能够成为这个令人兴奋的领域的一部分。我们邀请您探索我们的产品和服务范围,并与我们一起突破 RNA 测序的可能界限。使用我们的组合分光光度计/荧光计和开创性的自动细胞计数器,用户可以优化 RNA 测序的准备步骤,以保证最高的质量。我们可以一起继续解开细胞的秘密,并在分子水平上增进我们对生命的理解。

RNA 纯化试剂NucleoZOL740404.200


RNA 纯化试剂NucleoZOL

简要描述:NucleoZOL,一相 RNA 纯化 产品编号: 740404.200
MACHEREY-NAGEL 于 1911 年在迪伦成立,是滤纸的专业制造商。从那时起,我们已发展成为一家从事化学和生物分子分析的创新型国际公司。RNA 纯化试剂NucleoZOL

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品牌 其他品牌 供货周期 一个月
应用领域 医疗卫生,化工,生物产业,制药,综合

RNA 纯化试剂NucleoZOL

MACHEREY-NAGEL 于 1911 年在Düren成立,是滤纸的专业制造商。从那时起,我们已发展成为一家从事化学和生物分子分析的创新型国际公司。

 

• 第四代家族企业
• 超过 700 名员工
• 位于迪伦的 5 个工厂

 

• 在德国、瑞士、法国和美国设有子公司
• 销售遍及全球 150 个国家/地区
• 超过 25,000 种产品 

 

MACHEREY-NAGEL 代表创新和创造性的解决方案,我们热衷于内部开发。除了研究、生产、销售和媒体设计等“传统”部门外,我们还拥有机械工程和设备开发等部门以及我们自己的细木工部门。

我们的产品是可靠的分析系统之一。它们用于工业、医疗保健、生物技术、环境分析和研究等领域。

RNA 纯化试剂NucleoZOL 供应

各类样品总RNA提取

应用 总RNA的分离
目标 核糖核酸
CE认证 不,仅供研究使用
技术 一相萃取
品牌 NucleoZOL
格式 试剂
处理 离心
裂解物澄清 离心
自动化使用
样品材料 动物组织、细菌、细胞、人体组织、植物、病毒液、酵母
样品量 < 2 x 10⁶ 培养细胞、< 2 x 10⁶ 细菌细胞、< 2 x 10⁶ 酵母细胞、< 100 mg 人类/动物/植物组织、< 0.4 mL 病毒液
碎片大小 总RNA > 10 nt(小RNA 10-200 nt,大RNA > 200 nt)
典型产量 1–8 µg 总 RNA/mg 样品
典型纯度 A260/A280 1.8–2.1
典型 RIN > 9
洗脱体积 灵活的
准备时间 <1小时
典型下游应用 阵列技术、Northern 印迹、引物延伸、qRT−PCR、RNA-Seq、RNase 保护测定
保质期(从生产开始) 39 个月
供货范围 NucleoSpin RNA 柱、收集管、缓冲液
危险材料 是的