使用 Pico488 进行 DNA 定量

使用 Pico488 进行 DNA 定量

Pico488 DNA 定量溶液是一种超灵敏试剂,用于在无法通过测量 260 nm 吸光度来确定双链 DNA 浓度时测量双链 DNA 浓度。 Pico488 选择性地结合双链 DNA,因此核苷酸、单链 DNA、RNA、蛋白质和其他杂质不会妨碍测量。与双链 DNA 结合的染料在 503 nm 处最大吸收光并在 525 nm 处最大发射光。为了检测测定读数,可以使用任何类型的荧光计或荧光板读数器。

Pico488 测量 DNA 浓度的线性范围为 1 pg/μL — 5 ng/μL。为了实现精确、可重复的荧光测量,我们建议在 TE 缓冲液(10 mM Tris-HCl,pH 7.5,1 mM EDTA)中稀释 DNA 和 Pico488。为了计算 DNA 浓度,我们建议首先使用一系列 DNA 标准稀释液建立校准曲线。

Lumprobe 销售各种包装的Pico488 DNA 定量溶液和Pico488 DNA 定量试剂盒。除了 Pico488 溶液之外,该试剂盒还包括缓冲液和 DNA 标准储备溶液。如果测定体积等于 2 ml,则试剂盒提供的染料溶液量足以分析标准荧光比色皿(体积 3.5 ml)中的 200 个实验数据点。如果使用其他类型的设备来检测荧光,则可以重新调整测定范围。下表提供了常用荧光设备的推荐检测体积。

协议

1. Pico488工作液的制备

解冻 Pico488 染料瓶中的内容物,充分混合,并用缓冲液将所需量的 Pico488 染料溶液稀释 200 倍(我们建议使用 10 mM Тris HCl、1 mM EDTA,pH 7.5)。混合并在3小时内使用。每个实验数据点的 Pico488 工作溶液体积应等于测定体积的 50%(查看下表以查找适合您的荧光测定设备类型的推荐体积)。为所有实验数据点(针对您计划分析的所有样品和所有 DNA 标准稀释液)准备足够的 Pico488 工作溶液。还包括额外 10-25% 的 Pico488 工作溶液体积,以排除可能的移液错误。要计算稀释后的 Pico448 的体积,可以使用以下公式:

Pico488 = 5/8 × V测定× (N 个样品+ N 个标准品), 其中 V测定是样品或标准品的测定体积,mL,N 个样品 是您计划分析的样品数量,N 个标准品是您计划分析的标准品数量(包括空白样品)。

2. 样品溶液的制备

在缓冲液中稀释 DNA 样本,使溶液体积等于测定体积的 50%(您可以使用任意量的 DNA)。添加等体积的 Pico488 工作溶液。混合并孵育 5 分钟。同样,制备 DNA 标准品的稀释液。请注意,DNA 标准品的稀释度应在样品中 DNA 浓度的范围内。 DNA 标准储备液仅随Pico488 DNA 定量试剂盒提供Pico488 DNA 定量解决方案的用户 应使用自己的 DNA 标准品。

使用Pico488 DNA 定量溶液进行 DNA 定量的推荐体积

设备类型 测定体积 稀释后的 Pico488 体积 稀释 DNA 体积
标准荧光比色皿(3.5 ml) 2毫升 1毫升 1毫升
其他荧光比色皿 约比色皿体积的 75% 比色皿体积的 37.5% 比色皿体积的 37.5%
96 孔板*,每孔 0.2毫升 0.1毫升 0.1毫升
24 孔板,每孔 1毫升 0.5毫升 0.5毫升
其他板材 约占井容积的75% 井体积的37.5% 井体积的37.5%
NanoDrop™ 3300* 0.1毫升 0.05毫升 0.05毫升

* 为了保持测量的准确性和精密度,我们建议避免移液量低于 2 µL。

3. 荧光测量

使用适当的吸收和发射波长或滤光片测量标准和样品 DNA 溶液的荧光(双链 DNA 结合的 Pico488 染料吸收最大波长为 503 nm 的光,发射最大波长为 525 nm 的光)。

4. DNA浓度的计算

绘制荧光 浓度的关系图,并在任何软件中应用线性回归函数,以获得反映荧光 ( FL ) 与浓度 ( C ) 依赖性的线性方程:
FL = A × C + B。

要计算稀释样品中的 DNA 浓度,请使用以下公式:
C样品= (FL样品 — B)/A,其中FL样品是样品溶液荧光。

要计算未稀释样品中的 DNA 浓度,请使用以下公式:
С init = V Assay × C Sample  / V init,其中 Assay是测定体积(mL),init是初始 DNA 样品的体积(μL)

或者,您可以使用我们的dsDNA 定量稀释 计算器完成所有必要的计算。

线性回归示例:荧光与 DNA 浓度 

使用 Pico488 进行 DNA 定量

Multidrop™ Pico 1 和 Pico 8 数字分液器的卡盒(LTR0001)介绍

Multidrop™ Pico 1 和 Pico 8 数字分液器的卡盒(LTR0001)介绍

Thermo Scientific™用于 Multidrop™ Pico 1 和 Pico 8 数字分液器的卡盒

在整个板或仅板的一部分分配皮升至微升体积的一至八种不同类型液体的选择。

货号: LTR0001

  • 通过检测小型化节省成本

  • 提高效率与样品完整性

  • 强大、灵活且易于使用的软件

Multidrop™ Pico 1 和 Pico 8 数字分液器的卡盒(LTR0001)介绍

LTR0001
可高温高压灭菌 不可高温高压灭菌
描述 用于 Multidrop Pico 1 的 1-ch 20 μL 卡盒
设备容纳 用于 Pico 1 的 1-ch 200 μL 卡盒
通道 1
类型 数字分液器卡盒
容积(公制) 11 pL 至 20 μL 或 1 nL 至 200 μL
适用于(应用) 药物组合研究,生化检测,基于细胞的检测,DMPK,二次筛选,合成化学,检测开发,荧光定量 qPCR,酶联免疫,抗体治疗,SAR 和斑点试验
适用于(设备) Mulitdrop Pico 1 数字分液器
界面 USB
板类型 12、24、48、96、384、1536 孔板,板高:6-47 mm
精确度 ≤ 8%
软件 PicoIT 1
速度 几秒内分配 11 pL 至 10 μL
尺寸(长 x 宽 x 高) 8.2 x 6.5 X 2.2 cm
直径(英制) 用于 Pico 8 的 4 通道 200 μL 卡盒
内径直径(英制) 用于 Pico 8 的 8 通道 20 μL 纯化柱
重量(公制) 0.225
电气要求 100 至 240V 50/60Hz
电压 100/240 V
频率 50/60 Hz
Unit Size Case of,30
LTR0002
可高温高压灭菌 不可高温高压灭菌
描述 用于 Multidrop Pico 1 的 1-ch 200 uL 卡盒
通道 1
类型 数字分液器卡盒
容积(公制) 11 pL 至 20 μL 或 1 nL 至 200 μL
适用于(应用) 药物组合研究,生化检测,基于细胞的检测,DMPK,二次筛选,合成化学,检测开发,荧光定量 qPCR,酶联免疫,抗体治疗,SAR 和斑点试验
适用于(设备) Mulitdrop Pico 1 数字分液器
界面 USB
板类型 12、24、48、96、384、1536 孔板,板高:6-47 mm
精确度 ≤ 8%
软件 PicoIT 1
速度 几秒内分配 11 pL 至 10 μL
尺寸(长 x 宽 x 高) 8.2 x 6.5 X 2.2 cm
重量(公制) 0.225
电气要求 100 至 240V 50/60Hz
电压 100/240 V
频率 50/60 Hz
Unit Size Case of 30
LTR0003
可高温高压灭菌 不可高温高压灭菌
描述 用于 Multidrop Pico 8 的 4-ch 200 uL 卡盒
通道 4
类型 数字分液器卡盒
容积(公制) 11 pL 至 20 μL(8 孔卡盒)、1 nL 至 200 μL(4 孔卡盒)
适用于(应用) 药物组合研究,生化检测,基于细胞的检测,DMPK,二次筛选,合成化学,检测开发,荧光定量 qPCR,酶联免疫,抗体治疗,SAR 和斑点试验
适用于(设备) Mulitdrop Pico 8 数字分液器
界面 USB
板类型 12、24、48、96、384、1536 孔板,板高:6-47 mm
精确度 ≤ 8%
软件 PicoIT 8
速度 几秒内分配 11 pL 至 10 μL
尺寸(长 x 宽 x 高) 8 x 10.5 x 2.5 cm
重量(公制) 0.45
电气要求 100 至 240V 50/60Hz
电压 100/240 V
频率 50/60 Hz
Unit Size Case of,20
LTR0004
可高温高压灭菌 不可高温高压灭菌
描述 用于 Multidrop Pico 8 的 8-ch 20 uL 卡盒
通道 8
类型 数字分液器卡盒
容积(公制) 11 pL 至 20 μL(8 孔卡盒)、1 nL 至 200 μL(4 孔卡盒)
适用于(应用) 药物组合研究,生化检测,基于细胞的检测,DMPK,二次筛选,合成化学,检测开发,荧光定量 qPCR,酶联免疫,抗体治疗,SAR 和斑点试验
适用于(设备) Mulitdrop Pico 8 数字分液器
界面 USB
板类型 12、24、48、96、384、1536 孔板,板高:6-47 mm
精确度 ≤ 8%
软件 PicoIT 8
速度 几秒内分配 11 pL 至 10 μL
尺寸(长 x 宽 x 高) 8 x 10.5 x 2.5 cm
重量(公制) 0.45
电气要求 100 至 240V 50/60Hz
电压 100/240 V
频率 50/60 Hz
Unit Size Case of,20