Alkaline Phosphatase Stain Solution (Coupling azo-dye Method) 碱性磷酸酶染色液（偶氮偶联法）

货号： MP7505-30ML 品牌： Jinpan 标签： 蛋白研究

描述

Alkaline Phosphatase Stain Solution (Coupling azo-dye Method)

碱性磷酸酶染色液（偶氮偶联法）

产品信息

【温馨提示】：见我司金畔生物整理的碱性磷酸酶（Alkaline phosphatase，ALP，AKP）产品专题。

【温馨提示】：见我司金畔生物整理的碱性磷酸酶活性检测试剂盒（定量检测）产品专题。

【温馨提示】：见我司金畔生物整理的碱性磷酸酶染色检测试剂盒（定性，干细胞检测）产品专题。

产品描述

碱性磷酸酶（Alkaline phosphatase，ALP，AKP或AP）是一类磷酸酯酶，碱性条件下能够将核苷酸、蛋白、甾醇等分子去磷酸化，广泛分布于哺乳动物组织内。ALP主要存在于物质交换活跃处（细胞膜），如肠上皮和肾近曲小管的刷状缘、附睾上皮之静纤毛、肝的毛细胆管膜以及微动脉和毛细血管动脉部之内皮。还发现于内质网、高尔基复合体、吞饮小泡、肠上皮之溶酶体、中性粒细胞之中性颗粒以及平滑肌之细胞膜及吞饮小泡。

本碱性磷酸酶染色液（偶氮偶联法）（Alkaline Phosphatase Stain Solution (Coupling azo-dye Mehod)）利用的是偶氮偶联法来定性检测磷酸酶活性。工作原理是在pH 9.2-9.8的碱性条件下，细胞内ALP可使AB-BI磷酸盐水解，释放出磷酸与萘酚，后者与偶联重氮盐生成有色产物，定位于细胞质中。该染液可用于血液、骨髓或细胞涂片、冰冻切片、石蜡切片等的ALP染色，ALP阳性反应部位呈蓝色，位于胞浆，染色结果比金属盐沉淀法相对可靠些。

产品组成

保存与运输方法

保存：按照对应组分的要求来保存，1年有效。

运输：冰袋运输。

注意事项

1）   血液、骨髓细胞涂片或其他样本均应新鲜，薄厚适宜，及时固定，否则会影响酶的活性。

2）   培养细胞染色操作过程中，清洗、染色等步骤都应轻微，以免损伤或丢失细胞。

3）   培养细胞或爬片细胞不建议采用ALP固定液，此ALP固定液适用于血液或骨髓细胞涂片的固定。

4）   为了您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作。

操作步骤

一、 ALP染色液的准备

临用前，取适量的AS-BI染色液（B1）和FBB染色液（B2）按照1：1比例混合，即得到ALP染色液，现配现用。

二、 涂片或切片染色

1.1    血液、骨髓或细胞涂片、冰冻切片、石蜡切片放入ALP固定液固定3min（注：梯度入水的石蜡切片无需固定），水洗。

1.2    滴加新鲜配制的ALP染色液，放入湿盒，避光孵育15-20min，水洗。

1.3    入核固红染色液复染3-5min。

1.4    水洗、镜检或甘油明胶封片后镜检。

三、 贴壁细胞染色

2.1 取6孔板或其他容器培养的细胞，弃培养液，PBS清洗细胞。

2.2 加入4%多聚甲醛固定10-20min，PBS清洗细胞。

2.3 滴加新鲜配制的ALP染色液，放入湿盒，避光孵育15-20min，PBS清洗。

2.4 入核固红染色液复染30s~3min。

2.5    PBS清洗、镜检。

三、染色结果

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规格信息

Alkaline Phosphatase Stain Solution (Modified Gomori’s Method) 碱性磷酸酶染色液（改良钙钴法）

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Alkaline Phosphatase Stain Solution (Modified Gomori’s Method)

碱性磷酸酶染色液（改良钙钴法）

产品信息

【温馨提示】：见我司整理的碱性磷酸酶（Alkaline phosphatase，ALP，AKP）产品专题。

【温馨提示】：见我司整理的碱性磷酸酶活性检测试剂盒（定量检测）产品专题。

【温馨提示】：见我司整理的碱性磷酸酶染色检测试剂盒（定性，干细胞检测）产品专题。

产品描述

碱性磷酸酶（Alkaline phosphatase，ALP，AKP或AP）是一类磷酸酯酶，碱性条件下能够将核苷酸、蛋白、甾醇等分子去磷酸化，广泛分布于哺乳动物组织内。ALP主要存在于物质交换活跃处（细胞膜），如肠上皮和肾近曲小管的刷状缘、附睾上皮之静纤毛、肝的毛细胆管膜以及微动脉和毛细血管动脉部之内皮。还发现于内质网、高尔基复合体、吞饮小泡、肠上皮之溶酶体、中性粒细胞之中性颗粒以及平滑肌之细胞膜及吞饮小泡。

本碱性磷酸酶染色液（改良钙钴法）（Alkaline Phosphatase Stain Solution (Modified Gomori’s Method)）利用的是金属沉淀法来定性检测磷酸酶活性。检测原理是以天然存在的β-甘油磷酸钠为底物，经碱性磷酸酶水解释放出磷酸，磷酸根与钙离子结合为磷酸钙沉淀，再依次被置换为磷酸钴和硫化钴，最终产物为黑色硫化钴沉淀。

产品组成

保存与运输方法

保存：2-8℃保存，6个月稳定。

运输：冰袋运输。

注意事项

1）   ALP染色液、ALP硫化液容易失效，建议开封后根据小份保存，避免重复性开盖使用，影响性能。

2）   ALP硫化液具有腐蚀性和刺激性气味，操作需小心。

3）   样本需新鲜，取材后请立即处理，否则会影响酶活性。

4）   组织固定需在4℃进行，时间不要超过24h，否则酶活性会减弱或消失。

5）   组织在石蜡包埋时，温度不要超过56℃。应使用熔点为52-54℃的石蜡进行浸染，浸蜡时间要短，否则酶活性会减弱或消失。

6）   石蜡切片脱蜡所用的二甲苯需用AR级以上的，不纯的二甲苯会分解黑色沉淀。

7）   冰冻切片染色时，应减少切片在室温暴露的时间。

8）   为了您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作。

操作步骤

实验前准备材料：蒸馏水，温箱或水浴锅

一、 石蜡切片染色

1.1    石蜡切片脱蜡至蒸馏水；

1.2   切片入ALP染色液，37℃孵育2~12h；

【注意：若需要做阴性对照，可选一切片入ALP对照液，该对照液不含酶的反应底物。】

1.3    流动水清洗2min，入蒸馏水；

1.4    入硝酸钴染液，37℃孵育5min；

1.5    流水洗5min，入蒸馏水；

1.6    准备ALP硫化工作液：取ALP硫化液用蒸馏水或去离子水稀释50倍，混匀即得到硫化工作液，现配现用。切片放入硫化工作液，孵育1-2min；

1.7    流水洗10min，入蒸馏水；

1.8    （可选）核固红复染细胞核，用蒸馏水洗；

1.9    石蜡切片常规脱水、透明、中性树胶封片。

二、 冰冻切片染色

2.1 冰冻切片在丙酮-氯仿等量混合液内，4℃固定2-5min；

2.2  切片入ALP染色液，37℃孵育5-15min；

【注意：若需要做阴性对照，可选一切片入ALP对照液，该对照液不含酶的反应底物。】

2.3 流水洗2min，入蒸馏水；

2.4 入硝酸钴染液，37℃孵育5min；

2.5 流水洗5min，入蒸馏水；

2.6 准备ALP硫化工作液：取ALP硫化液用蒸馏水或去离子水稀释50倍，混匀即得到硫化工作液，现配现用。切片放入硫化工作液，孵育1-2min；

2.7    流水洗10min，入蒸馏水；

2.8    （可选）核固红复染细胞核，用蒸馏水洗；

2.9    冰冻切片用甘油明胶封片剂封片。

三、 染色结果

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【温馨提示】：见我司整理的碱性磷酸酶（Alkaline phosphatase，ALP，AKP）产品专题。

【温馨提示】：见我司整理的碱性磷酸酶活性检测试剂盒（定量检测）产品专题。

【温馨提示】：见我司整理的碱性磷酸酶染色检测试剂盒（定性，干细胞检测）产品专题。

产品描述

碱性磷酸酶（Alkaline phosphatase，ALP，AKP或AP）是一类磷酸酯酶，碱性条件下能够将核苷酸、蛋白、甾醇等分子去磷酸化，广泛分布于哺乳动物组织内。ALP主要存在于物质交换活跃处（细胞膜），如肠上皮和肾近曲小管的刷状缘、附睾上皮之静纤毛、肝的毛细胆管膜以及微动脉和毛细血管动脉部之内皮。还发现于内质网、高尔基复合体、吞饮小泡、肠上皮之溶酶体、中性粒细胞之中性颗粒以及平滑肌之细胞膜及吞饮小泡。

本碱性磷酸酶染色液（改良钙钴法）（Alkaline Phosphatase Stain Solution (Modified Gomori’s Method)）利用的是金属沉淀法来定性检测磷酸酶活性。检测原理是以天然存在的β-甘油磷酸钠为底物，经碱性磷酸酶水解释放出磷酸，磷酸根与钙离子结合为磷酸钙沉淀，再依次被置换为磷酸钴和硫化钴，最终产物为黑色硫化钴沉淀。

产品组成

保存与运输方法

保存：2-8℃保存，6个月稳定。

运输：冰袋运输。

注意事项

1）   ALP染色液、ALP硫化液容易失效，建议开封后根据小份保存，避免重复性开盖使用，影响性能。

2）   ALP硫化液具有腐蚀性和刺激性气味，操作需小心。

3）   样本需新鲜，取材后请立即处理，否则会影响酶活性。

4）   组织固定需在4℃进行，时间不要超过24h，否则酶活性会减弱或消失。

5）   组织在石蜡包埋时，温度不要超过56℃。应使用熔点为52-54℃的石蜡进行浸染，浸蜡时间要短，否则酶活性会减弱或消失。

6）   石蜡切片脱蜡所用的二甲苯需用AR级以上的，不纯的二甲苯会分解黑色沉淀。

7）   冰冻切片染色时，应减少切片在室温暴露的时间。

8）   为了您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作。

操作步骤

实验前准备材料：蒸馏水，温箱或水浴锅

一、 石蜡切片染色

1.1    石蜡切片脱蜡至蒸馏水；

1.2   切片入ALP染色液，37℃孵育2~12h；

【注意：若需要做阴性对照，可选一切片入ALP对照液，该对照液不含酶的反应底物。】

1.3    流动水清洗2min，入蒸馏水；

1.4    入硝酸钴染液，37℃孵育5min；

1.5    流水洗5min，入蒸馏水；

1.6    准备ALP硫化工作液：取ALP硫化液用蒸馏水或去离子水稀释50倍，混匀即得到硫化工作液，现配现用。切片放入硫化工作液，孵育1-2min；

1.7    流水洗10min，入蒸馏水；

1.8    （可选）核固红复染细胞核，用蒸馏水洗；

1.9    石蜡切片常规脱水、透明、中性树胶封片。

二、 冰冻切片染色

2.1 冰冻切片在丙酮-氯仿等量混合液内，4℃固定2-5min；

2.2  切片入ALP染色液，37℃孵育5-15min；

【注意：若需要做阴性对照，可选一切片入ALP对照液，该对照液不含酶的反应底物。】

2.3 流水洗2min，入蒸馏水；

2.4 入硝酸钴染液，37℃孵育5min；

2.5 流水洗5min，入蒸馏水；

2.6 准备ALP硫化工作液：取ALP硫化液用蒸馏水或去离子水稀释50倍，混匀即得到硫化工作液，现配现用。切片放入硫化工作液，孵育1-2min；

2.7    流水洗10min，入蒸馏水；

2.8    （可选）核固红复染细胞核，用蒸馏水洗；

2.9    冰冻切片用甘油明胶封片剂封片。

三、 染色结果

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