上海金畔社生物科技有限公司日本同仁化学dojindo全线产品代理 中国代理商
特点：
● 数据可靠，不会与NAD+及NADH反应
● 只有Dojindo的试剂盒中带有可以简单去除蛋白质的微量管
● 享有显色底物WST专利
产品解说
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试剂盒内含
概述
烟酰胺腺嘌呤二核苷酸磷酸(NADP) 是磷酸戊糖途径（一种细胞代谢途径）反应中一种重要的辅因子。NADP以氧化态NADP+和还原态NADPH的形式存在于细胞中。NADPH不光对脂肪酸、胆固醇而且对还原型谷胱甘肽的生成至关重要。另外最近的研究表明，NADP+/NADPH通过限制碳水化合物的摄入来延长寿命与NADP+/NADPH有很大关联。
NADP/NADPH Assay Kit-WST能定量检测细胞中总NADP+/NADPH、NADPH和NADP+的量，并计算它们的比值。细胞内NADPH水平可以用试剂盒内的Extraction Buffer裂解细胞后加热进行定量检测。而细胞内的NADP+水平则可以通过总NADP+/NADPH减去NADPH的量计算得到。
原理
技术资料
分别检测NADP+和NADPH
分别测定NADP+和NADPH的操作步骤
*只有Dojindo的试剂盒中带有可以简单去除蛋白质的微量管
用试剂盒内的提取缓冲液及去除蛋白质用的微量管，能简便地制备细胞裂解液。 通过加热细胞裂解液能单独检测细胞内NADPH量，而细胞内的NADP+量则可以通过总NADP+/NADPH量减去NADPH量的计算得到。
在本试剂盒中，当n=3时，可以测量12个样品和8个标准样品。使用超过12个样品时，您需要准备单独的超滤管。
使用NADP+/NADPH作为标记的研究
检索来源：Google Scholar
检索关键词：
NADP/NADPH：“NADP/NADPH”
线粒体：”NADP/NADPH”Mitochondria
癌：”NADP/NADPH”Cancer
氧化应激：”NADP/NADPH”Oxidative Stress
孔板检测中数据的可靠性
通过同时检测试剂盒内的标准溶液，可以对浓度在0.01-1 μmol/l的总NADP+/NADPH和NADPH进行定量。如果样品中的总NADP+/NADPH的浓度>1 μmol/l，可以通过稀释样品来调节。实验证实本试剂盒(NADP/NADPH Assay Kit-WST)不会与NAD+及NADH反应。
操作步骤
（1）按下图，在每孔中分别加入50 μl的标准液和样品溶液。
※为了获得准确的数据，建议每个样品做3个复孔。
（2）在每孔中加入50 μl Working Solution。
※由于在加入Working Solution后酶会立刻反应，请用多通道移液器以减少由于加液时间延迟而导致的实验误差。
（3）在37°C培养60 min。
※培养时请密封培养板，以防止液体蒸发。
（4）用酶标仪在450 nm处检测吸光度。
（5）用标准曲线测定样品中总NADP+/NADPH和NADPH的量。
※如果原样品在检测前已稀释，可用稀释倍率乘以检测的数值。
※NADP+的量可用下列计算公式计算：总NADP+/NADPH-NADPH的量计算得到。
NADP+=总NADP+/NADPH-NADPH
实验例
细胞样品检测实验例 (加入抗癌药物Doxorubicin)
向Jucket细胞中 (3×106 cells)加入终浓度为500 nmol/l的Doxorubicin (Dox)，在培养24 h后检测NADP+/NADPH 比值和还原型/氧化型谷胱甘肽的比值(GSH/GSSG)。用本试剂盒检测PBS清洗后的细胞的NADP+/NADPH比值，用 GSSG/GSH Quantification Kit II (货号：G263) 检测谷胱甘肽的比值。
在细胞内加入DOX后，产生的ROS(H2O2) 破坏了DNA、DNA修复酶 (PARP*) 被激活， 并且NADP+被其消耗。为了补充不足的NADP+，NADPH氧化酶被激活，结果在数据中则会表现为NADP+的增加。与此同时还原型谷胱甘肽 (GSH) 会被产生的ROS所消耗，因此GSH/GSSG的比值会下降。
常见问题Q&A
| Q1：该试剂盒可以检测多少个样本？ |
| A1：
*所有样品均测定3次（n=3） 上表中显示了当标准样品从2 μmol/l连续稀释，作出一条共计8个点（n=3）的标准曲线时可以检测的样品数量。如果分为2次检测，由于需要重复做一条标准曲线，因此样品检测的数量会更少。 |
| Q2：可以单独购买过滤管吗？ |
| A2：不可以，我们不单独出售过滤管。如果需要其他耗材，可以使用市场上售卖的过滤管。 |
| Q3：工作液稳定吗？ |
| A3：工作液无法长期保存。请在使用前配制工作液，由于工作液对光敏感请注意避光。该工作液在室温下可避光保存4小时。 |
| Q4：样品颜色没有变化，是什么原因？ |
| A4：样品中的NAD含量可能低于使用此试剂盒可测定的检测限度，在这种情况下，请增加细胞数，或者如果检测样品被稀释，则在检测前降低稀释比例。 |
参考文献
| 编号 | 文献 | 年 | IF |
| 1 | Order-of-magnitude enhancement in photocurrent generation of Synechocystis sp. PCC 6803 by outer membrane deprivation | 2022 | 17.7 |
| 2 | Targeted therapy for drug-tolerant persister cells after imatinib treatment for gastrointestinal stromal tumours |
2021 | 9.1 |
| 3 | Impact of anti-diabetic sodium-glucose cotransporter 2 inhibitors on tumor growth of intractable hematological malignancy in humans | 2022 | 7.4 |
| 4 | Chemical Triggering Cyanobacterial Glycogen Accumulation: Methyl Viologen Treatment Increases Synechocystis sp. PCC 6803 Glycogen Storage by Enhancing Levels of Gene Transcript and Substrates in Glycogen Synthesis | 2022 | 4.9 |
| 5 | Glucose Limitation Sensitizes Cancer Cells to Selenite-Induced Cytotoxicity via SLC7A11-Mediated Redox Collapse, Cancers (Basel),2022, 14(2):345 | 2022 | 4.4 |
| 6 | Inhibition of NAMPT markedly enhances plasma-activated medium-induced cell death in human breast cancer MDA-MB-231 cells |
2019 | 4.1 |
| 7 | Metabolomic approach to characterize the metabolic phenotypes and varied response to ouabain of diffuse large B-cell lymphoma cells | 2021 | 2.9 |
| 8 | Effect of Phosphoribosyltransferase Down-regulation on Malignant Glioma Cell Characteristics | 2020 | 2.5 |
