9-[2-(4′-MethylcoumariN-7′-oxycarbonyl)phenyl]-3,6-bis(diethylamino)xanthylium chloride

Cellstain- MitoRed

商品信息

规格

特性：该产物为品红色至紫棕色固体，可溶于二甲基亚砜和甲醇。

可溶于二甲基亚砜：试验成功

NMR光谱：试验适合

MitoRed为基于罗丹明的可透过细胞膜的染料。它集中于线粒体内并发出红色荧光。MitoRed与线粒体的相互作用取决于线粒体的膜电位。

可用20-200 nM MitoRed对线粒体染色。MitoRed的激发和发射波长分别为560 nm和580 nm。

λex=560 nm, λem=580 nm

染色步骤

1. 将50 µg MitoRed溶解到78 µl DMSO中制备成1 mM MitoRed-DMSO溶液。

2. 用载玻片准备细胞。细胞数目应为5×10⁴-5×10⁵个/ml。

3. 孵育该载玻片，用PBS或Hank’s液洗涤细胞。

4. 用培养基稀释1 mM MitoRed溶液以制备20-200 nM MitoRed缓冲液。

5. 将MitoRed缓冲液^a) 加入载玻片并在37℃下孵育30分钟至1小时。

6. 去除MitoRed缓冲液并用培养基洗涤细胞。^b)

7. 用带有罗丹明滤光片的荧光显微镜观察细胞。

a) 加入细胞前将MitoRed缓冲液放在37℃下孵育。

b) 洗涤细胞后为了固定，加入10%福尔马林缓冲液并孵育15-20分钟，接着用PBS洗涤。

1) R. Ikeda, T. Sugita, E. S.  Jacobson and T. Shinoda, “Effects of Melanin upon Susceptibility of  Cryptococcus to Antifungals”, Microbiol.  Immunol., 2003, 47(4),  271.

Q1:如何使用Mito Red。

A1： 下面显示了一个使用HeLa细胞的示例。 *根据细胞类型和观察条件，有必要检查试剂浓度和染色条件。 <试剂> -Cellstain®-MitoRed 二甲基亚砜 用DMSO 78μL→1 mmol / L溶液溶解MitoRed 50μg（1瓶） <操作方法> 1.培养小室玻片上的细胞，以使细胞密度合适。 （1×105至1×106细胞/ mL） 2.除去培养基，并轻轻洗涤（培养基，PBS，Hank溶液等）。 用中等浓度将3.1 mmol / L的MitoRed溶液稀释至最终浓度为20-200 nmol / L。 （最好先将其在37°C的温度下保温，然后再添加到细胞中） 将稀释的MitoRed溶液加入孔中，并在培养条件下孵育大约30分钟至1小时。 4.除去MitoRed溶液，并用中性溶液洗涤。 5.在荧光显微镜G激发下观察。 （Λex= 560 nm，λem= 580 nm） 固定电池时，请执行以下（3）之后的操作。 4.除去MitoRed溶液并洗涤。 （无血清培养基，PBS，Hank溶液等） 5.用5.10％中性福尔马林缓冲液固定15至20分钟。 6.用PBS清洁。 7.在荧光显微镜下观察。

Q2：细胞染料的激发波长和发射波长是多少。

A2：

Q3：不管是活细胞还是死细胞，它都会染色细胞内线粒体吗？

A3:仅活细胞。它不能用于死细胞，因为线粒体的膜电位会丢失。