JC-10 for Mitochondrial Membrane Potential 线粒体膜电位荧光探针

货号： JP3206-1MG 品牌： Jinpan 标签： 细胞生物学研究

描述

JC-10（JC-1优越替代物）线粒体膜电位荧光探针

温馨提示：见我司整理线粒体荧光探针产品专题。

产品标签

JC-10；JC-1；Rhodamine 123 罗丹明123； CCCP；Mitochondrial Membrane Potential 线粒体膜电位探针；CAS：47729-63-5

订购信息：现货供应。欢迎来电咨询，电话：021-50837765 ，18121428569；QQ：3308240863， 2971634497。

产品描述

JC-10是一种新型的用来监测线粒体膜电位变化的荧光探针，是JC-1的优越替代物。与JC-1相比，具有以下几个重要优势：1）溶解性得以改良——在水溶液中形成沉淀可能性明显降低；2）使用更方便——简化步骤将手动操作时间最小化；3）荧光信号更高——改良的信号与背景荧光的信噪比；4）结果更稳定——优化探针以保证更连续性和稳定性结果。

JC-10是一种替换JC-1，用于检测线粒体膜电位△Ψm的理想荧光探针。JC-10以电势依赖性的方式积聚在线粒体内，可以用来检测细胞、组织或纯化的线粒体膜电位。正常线粒体内，JC-10聚集在线粒体基质中形成聚合物，聚合物发出强烈的红色荧光（Ex=540 nm, Em=590 nm）；不健康的线粒体由于膜电位的下降或丧失，JC-10只能以单体的形式存在于胞浆中，产生绿色荧光（Ex=490 nm, Em=525 nm）。JC-10不仅可用于定性检测，因颜色的变化可以非常直接的反映出线粒体膜电位的变化。也可以用于定量检测，因线粒体的去极化程度可以通过红/绿荧光强度的比例来衡量。观察时，只需使用常规的观察红色荧光和绿色荧光的设置即可。

JC-10可用来检测大量细胞类型如神经元和心肌细胞的线粒体膜电位，也可用来研究重要的细胞生理活动，比如ATP合成，活性氧（ROS）和凋亡发生等。

本品以粉末形式提供，只需溶于DJPO配制成2mg/ml的储存液，然后用合适的缓冲液稀释到工作浓度即可使用。

产品特性

1）同义名：Enhanced JC-1;

2）分子量：~600 g/mol

3） 纯度：＞95%（HPLC）

4） 溶解性：DJPO（2mg/ml）

保存与运输方法

保存：-20℃避光保存，至少1年有效。

运输：室温运输。

注意事项

1. JC-10是光敏感性的，所有染色步骤的操作过程中避免强光接触。
2. JC-10染色完成后，立即进行后续的结果分析非常必要；
3. 为了您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作。

使用方法

1. 染色工作液制备

JC-10储存液制备：取本品溶于无水DJPO配制成2mg/ml储存液（比如5mg JC-10加入2.5ml DJPO），混匀后，按照单次用量分装，避光冻存，避免反复冻融。

JC-10（1×）工作液制备：取一管JC-10储存液置于室温，使其充分融化，之后用HHBS（1×Hanks with 20 mM Hepes buffer, pH 7.0）或其他缓冲液（pH 7-8，含0.02% Pluronic®F-127）配制成10-30μM的1×工作液，漩涡混匀待用。

【注意】：对于某些细胞系pH8的工作液可能防止JC-10泄露。

2. JC-10染色步骤（荧光酶标仪）

1）用待测药物处理细胞一段时间（比如，Jurkat细胞用喜树碱camptothecin）处理4-6h）以诱导凋亡。对于空白孔（不含细胞的培养基）加入相应体积的药物缓冲液。

2）按照100μl/孔/96孔板或25μl/孔/384孔板的量加入JC-10工作液到培养孔内。

3）将整个培养板置于37℃，5% CO2孵育15-60min。【注意】：合适的孵育时间取决于细胞类型和细胞浓度。每次试验建议优化孵育时间。

4）用荧光酶标仪监测Ex/Em = 500/525 nm（FITC通道）和540/595 nm（TRITC通道）的荧光变化，计算两者荧光信号比值，以判断细胞健康程度。

【可选】：吸掉JC-10染色工作液，按照100μl/孔/96孔板或25μl/孔/384孔板的量加入HHBS缓冲液或其他生理缓冲液，然后再进行荧光信号分析。

3. JC-10染色步骤（荧光显微镜或流式细胞仪）

1）用待测药物处理细胞一段时间（比如，Jurkat细胞用喜树碱camptothecin）处理4-6h）以诱导凋亡。对于空白孔（不含细胞的培养基）加入相应体积的药物缓冲液。

2）离心去上清，调整细胞密度为1-5×105细胞/管。

3）用500µl JC-10染色工作液重悬细胞。

4）室温孵育或37℃，5%CO2孵育10-30 min，避光。【注意】：合适的孵育时间取决于细胞类型和细胞浓度。每次试验建议优化孵育时间。

5）用荧光显微镜分别观察Ex/Em = 490/525 nm（FITC通道）和540/595 nm（TRITC通道）的荧光变化；或者用流式细胞仪（FL1和FL2通道进行检测）。

【可选】：离心后吸掉JC-10染色工作液，加入500µl HHBS缓冲液或其他合适缓冲液重悬细胞使其密度为1-5×105细胞/管，然后再进行荧光分析。

应用示例（荧光显微镜观察）：

文献来源：Yokokura S et al. Calmodulin antagonists induce cell cycle arrest and apoptosis in vitro and inhibit tumor growth in vivo in human multiple myeloma. BMC Cancer. 2014 Nov 26;14:882.

实验方法（线粒体膜电位去极化检测）：A total of 1 × 106cells were loaded with 10 μg/ml of JC-10 at 37°C for 30 min. Next, the cells were treated with 60 μM of CaM antagonists at 37°C for 1 h and the visualized using a fluorescence microscope (Olympus BX-51/DP-72; Olympus, Tokyo, Japan) fitted with a WIB filter (excitation, 460–490 nm; dichroic mirror, 505 nm; emission barrier filter, 510 nm).

实验结果（线粒体膜电位去极化检测）：

Fig 1. Effects of CaM antagonists on intracellular Ca2+levels and mitochondrial membrane potential. Cells were pretreated with JC-10 dye for 30 min, and subsequently incubated with CaM antagonists (60 μM) for 1 h. The cells were then visualized under a fluorescence microscope to visualize the yellow fluorescent aggregation that indicates high mitochondrial membrane potential which is distinct from the green fluorescent monomer observed at a low mitochondrial membrane potential.

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规格信息

JC-1 (Powder) 线粒体膜电位荧光探针（粉末）

货号： JP3203-25MG 品牌： Jinpan 标签： 细胞生物学研究

描述

JC-1 线粒体膜电位荧光探针

产品标签

Rhodamine 123罗丹明123；JC-1；JC-10；CCCP；CAS：62669-70-9

产品信息

温馨提示：见我司整理线粒体荧光探针产品专题。

产品描述

JC-1是一种广泛用于检测线粒体膜电△Ψm位的理想荧光探针。JC-1染料以电势依赖性的方式积聚在线粒体内，可以用来检测细胞、组织或纯化的线粒体膜电位。正常线粒体内，JC-1聚集在线粒体基质中形成聚合物，聚合物发出强烈的红色荧光（Ex=585 nm, Em=590 nm）；不健康的线粒体由于膜电位的下降或丧失，JC-1只能以单体的形式存在于胞浆中，产生绿色荧光（Ex=514 nm, Em=529 nm）。

JC-1不仅可用于定性检测，因颜色的变化可以非常直接的反映出线粒体膜电位的变化。也可以用于定量检测，因线粒体的去极化程度可以通过红/绿荧光强度的比例来衡量。观察时，只需使用常规的观察红色荧光和绿色荧光的设置即可。

本品以冻干粉形式提供，CAS NO.3520-43-2 ，细胞培养级。用于检测细胞的线粒体膜电位时常用的浓度范围为1～20 µg/ml，对于很多细胞适宜采用的工作浓度为10 µg/ml。

产品特性

1）CAS NO：3520-43-2

2）化学名：5,5‘,6,6’-Tetrachloro-1,1‘,3,3’-tetraethylbenzimidazolylcarbocyanine iodide

3）分子式：C25H27Cl4IN4

4）分子量：652.23 g/mol

5） 纯度：＞95%（HPLC）

6） 外观：红褐色粉末

7） 溶解性：溶于DJPO、DMF，几乎不溶于水

8） Ex/Em：单体形式（monomer form）：Ex=514 nm, Em=529 nm；

聚合物形式（J-aggregate form）：Ex=585 nm, Em=590 nm；

保存与运输方法

保存：-20℃干燥避光保存，2年有效。

运输：冰袋运输。

注意事项

1）JC-1是光敏感性的，所有染色步骤的操作过程中避免强光接触。

2）JC-1染色完成后，立即进行后续的结果分析非常必要；

3）为了您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作。

使用方法

1. 染色工作液制备

1）JC-1储存液制备：将JC-1粉末室温回温20min左右，直接加1ml无水DJPO到5mg粉末，颠倒混匀，使其充分溶解后，即得到5mg/ml的储存液。溶液单次用量分装存于-20℃，避光干燥且避免反复冻融。

2）JC-1工作液制备：将冻存的储存液置于室温充分融化，之后用缓冲液或者预热的培养基直接稀释储存液（5 mg/ml）到需要的工作浓度，边震荡边稀释，充分混匀。为了去除任何不溶颗粒，建议13,000 x g离心工作液1 min，小心吸取上清转移到新的管子内。整个过程要避光操作。

【注意】：因JC-1不溶于水，很可能在稀释到工作液的过程中形成聚集颗粒，建议细胞染色前用离心或者过滤的方法去除这些颗粒后再使用。

2. JC-1染色步骤（流式细胞仪）

1）于6-，12或24-孔板上进行细胞铺板，调整密度为5×105cells/ml。37℃，5% CO2培养箱培养过夜。选择合适的化合物根据特定的步骤进行凋亡诱导。【注意】：进行凋亡诱导时的细胞密度建议不超过1×106cells/ml，也可根据自己的细胞类型培养至合适的密度。

2）取0.5 ml细胞悬液至无菌的离心管内；

3）室温条件400 x g离心5 min；吸掉上清。

4）用0.5 ml JC-1工作液重悬细胞，于37℃，5% CO2培养箱孵育15-30 min；【注意】：一般情况，15 min足以进行充分的染色。

5）室温条件400 x g离心5 min；吸掉上清；

6）用2 ml细胞培养液或者缓冲液重悬细胞，之后室温条件400 x g离心5 min；吸掉上清；

7）重复步骤6）；

8）用0.5 ml新鲜培养液或者缓冲液重悬细胞，即可进行后续的流式分析。【注意】：请马上进行流式定量分析，此细节很重要。

数据分析：含有红色JC-1聚集物的健康细胞线粒体用FL2通道检测；含有绿色JC-1单体的凋亡或不健康细胞用FL1（FITC）通道检测。

3. JC-1染色步骤（荧光显微镜）

A、悬浮细胞

1）-6）同上JC-1染色步骤（流式细胞仪）；

7）用0.3 ml缓冲液重悬细胞，即可进行荧光显微镜检测。【注意】：请马上进行荧光显微分析，此细节重要。

数据分析：

使用可同时检测FITC/TRITC或者FITC/Texas RedTM的双带带通滤波器进行检测。健康细胞因JC-1聚集后线粒体呈红色，最大发射波长为590 nm。而凋亡/坏死细胞内的JC-1以单体形式存在，线粒体呈绿色，最大发射波长为530 nm。

B、贴壁细胞

1）培养皿内用盖玻片进行细胞爬片或者细胞培养在腔室玻片（chamber slide）上。选择合适的化合物根据特定的步骤进行凋亡诱导。

2）染色前开始配制JC-1工作液，配制步骤见上。

3）吸掉细胞培养液，然后加入足够覆盖所有细胞的JC-1工作液。于37℃，5% CO2培养箱孵育15-30 min；【注意】：一般情况，15 min足以进行充分的染色。

4）吸掉培养液，然后用合适的缓冲液清洗细胞2次。

5）加入2ml细胞培养液（培养液可含血清和酚红）或者PBS缓冲液，于荧光显微镜或者共聚焦显微镜下观察。数据分析同A.悬浮细胞。

4. JC-1染色步骤（荧光酶标仪）

1）-7）同上JC-1染色步骤（流式细胞仪）；

8）用0.3 ml缓冲液重悬细胞；然后按照每孔0.1 ml的量将染色好的细胞转移到黑色的96孔板内，即可进行荧光酶标板分析。【注意】：请马上进行荧光显微分析，此细节重要。

数据分析：

健康细胞，JC-1单体聚集形成聚合物，线粒体呈现强烈的红色荧光（激发波长550 nm，发射波长600 nm）。而凋亡或坏死细胞内JC-1以单体形式存在，线粒体呈强烈的绿色荧光（激发波长485 nm,发射波长535nm）。之后计算红色荧光信号与绿色荧光信号的比值，用来判断细胞健康程度。

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规格信息

JC-1 (Powder) 线粒体膜电位荧光探针（粉末）

货号： JP3203-5MG 品牌： Jinpan 标签： 细胞生物学研究

描述

JC-1 线粒体膜电位荧光探针

产品标签

Rhodamine 123罗丹明123；JC-1；JC-10；CCCP；CAS：62669-70-9

产品信息

温馨提示：见我司整理线粒体荧光探针产品专题。

产品描述

JC-1是一种广泛用于检测线粒体膜电△Ψm位的理想荧光探针。JC-1染料以电势依赖性的方式积聚在线粒体内，可以用来检测细胞、组织或纯化的线粒体膜电位。正常线粒体内，JC-1聚集在线粒体基质中形成聚合物，聚合物发出强烈的红色荧光（Ex=585 nm, Em=590 nm）；不健康的线粒体由于膜电位的下降或丧失，JC-1只能以单体的形式存在于胞浆中，产生绿色荧光（Ex=514 nm, Em=529 nm）。

JC-1不仅可用于定性检测，因颜色的变化可以非常直接的反映出线粒体膜电位的变化。也可以用于定量检测，因线粒体的去极化程度可以通过红/绿荧光强度的比例来衡量。观察时，只需使用常规的观察红色荧光和绿色荧光的设置即可。

本品以冻干粉形式提供，CAS NO.3520-43-2 ，细胞培养级。用于检测细胞的线粒体膜电位时常用的浓度范围为1～20 µg/ml，对于很多细胞适宜采用的工作浓度为10 µg/ml。

产品特性

1）CAS NO：3520-43-2

2）化学名：5,5‘,6,6’-Tetrachloro-1,1‘,3,3’-tetraethylbenzimidazolylcarbocyanine iodide

3）分子式：C25H27Cl4IN4

4）分子量：652.23 g/mol

5） 纯度：＞95%（HPLC）

6） 外观：红褐色粉末

7） 溶解性：溶于DJPO、DMF，几乎不溶于水

8） Ex/Em：单体形式（monomer form）：Ex=514 nm, Em=529 nm；

聚合物形式（J-aggregate form）：Ex=585 nm, Em=590 nm；

保存与运输方法

保存：-20℃干燥避光保存，2年有效。

运输：冰袋运输。

注意事项

1）JC-1是光敏感性的，所有染色步骤的操作过程中避免强光接触。

2）JC-1染色完成后，立即进行后续的结果分析非常必要；

3）为了您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作。

使用方法

1. 染色工作液制备

1）JC-1储存液制备：将JC-1粉末室温回温20min左右，直接加1ml无水DJPO到5mg粉末，颠倒混匀，使其充分溶解后，即得到5mg/ml的储存液。溶液单次用量分装存于-20℃，避光干燥且避免反复冻融。

2）JC-1工作液制备：将冻存的储存液置于室温充分融化，之后用缓冲液或者预热的培养基直接稀释储存液（5 mg/ml）到需要的工作浓度，边震荡边稀释，充分混匀。为了去除任何不溶颗粒，建议13,000 x g离心工作液1 min，小心吸取上清转移到新的管子内。整个过程要避光操作。

【注意】：因JC-1不溶于水，很可能在稀释到工作液的过程中形成聚集颗粒，建议细胞染色前用离心或者过滤的方法去除这些颗粒后再使用。

2. JC-1染色步骤（流式细胞仪）

1）于6-，12或24-孔板上进行细胞铺板，调整密度为5×105cells/ml。37℃，5% CO2培养箱培养过夜。选择合适的化合物根据特定的步骤进行凋亡诱导。【注意】：进行凋亡诱导时的细胞密度建议不超过1×106cells/ml，也可根据自己的细胞类型培养至合适的密度。

2）取0.5 ml细胞悬液至无菌的离心管内；

3）室温条件400 x g离心5 min；吸掉上清。

4）用0.5 ml JC-1工作液重悬细胞，于37℃，5% CO2培养箱孵育15-30 min；【注意】：一般情况，15 min足以进行充分的染色。

5）室温条件400 x g离心5 min；吸掉上清；

6）用2 ml细胞培养液或者缓冲液重悬细胞，之后室温条件400 x g离心5 min；吸掉上清；

7）重复步骤6）；

8）用0.5 ml新鲜培养液或者缓冲液重悬细胞，即可进行后续的流式分析。【注意】：请马上进行流式定量分析，此细节很重要。

数据分析：含有红色JC-1聚集物的健康细胞线粒体用FL2通道检测；含有绿色JC-1单体的凋亡或不健康细胞用FL1（FITC）通道检测。

3. JC-1染色步骤（荧光显微镜）

A、悬浮细胞

1）-6）同上JC-1染色步骤（流式细胞仪）；

7）用0.3 ml缓冲液重悬细胞，即可进行荧光显微镜检测。【注意】：请马上进行荧光显微分析，此细节重要。

数据分析：

使用可同时检测FITC/TRITC或者FITC/Texas RedTM的双带带通滤波器进行检测。健康细胞因JC-1聚集后线粒体呈红色，最大发射波长为590 nm。而凋亡/坏死细胞内的JC-1以单体形式存在，线粒体呈绿色，最大发射波长为530 nm。

B、贴壁细胞

1）培养皿内用盖玻片进行细胞爬片或者细胞培养在腔室玻片（chamber slide）上。选择合适的化合物根据特定的步骤进行凋亡诱导。

2）染色前开始配制JC-1工作液，配制步骤见上。

3）吸掉细胞培养液，然后加入足够覆盖所有细胞的JC-1工作液。于37℃，5% CO2培养箱孵育15-30 min；【注意】：一般情况，15 min足以进行充分的染色。

4）吸掉培养液，然后用合适的缓冲液清洗细胞2次。

5）加入2ml细胞培养液（培养液可含血清和酚红）或者PBS缓冲液，于荧光显微镜或者共聚焦显微镜下观察。数据分析同A.悬浮细胞。

4. JC-1染色步骤（荧光酶标仪）

1）-7）同上JC-1染色步骤（流式细胞仪）；

8）用0.3 ml缓冲液重悬细胞；然后按照每孔0.1 ml的量将染色好的细胞转移到黑色的96孔板内，即可进行荧光酶标板分析。【注意】：请马上进行荧光显微分析，此细节重要。

数据分析：

健康细胞，JC-1单体聚集形成聚合物，线粒体呈现强烈的红色荧光（激发波长550 nm，发射波长600 nm）。而凋亡或坏死细胞内JC-1以单体形式存在，线粒体呈强烈的绿色荧光（激发波长485 nm,发射波长535nm）。之后计算红色荧光信号与绿色荧光信号的比值，用来判断细胞健康程度。

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