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Filipin III (Cholesterol fluorescent probe) 胆固醇荧光探针

发表于由

Filipin III (Cholesterol fluorescent probe) 胆固醇荧光探针 货号： JP5213-500UG 品牌： Jinpan 标签： 细胞生物学研究

描述

Filipin III (Cholesterol fluorescent probe)

胆固醇荧光探针

 

产品关键词

Filipin III 菲律宾菌素 III；Cholesterol fluorescent probe 胆固醇荧光探针；U 18666A；polyene antibiotic 多烯抗生素；CAS NO：480-49-9；

产品信息

产品名称

 产品编号 规格         价格（元）

Filipin III (Cholesterol fluorescent probe)胆固醇荧光探针

 JP5213-500UG 500µg 1943
Filipin III (Cholesterol fluorescent probe)胆固醇荧光探针 JP5213-1MG 1mg

2733
Filipin III (Cholesterol fluorescent probe)胆固醇荧光探针 JP5213-5MG 5mg

9963

​

产品描述

菲律宾菌素 III（Filipin III）是一种五烯大环内酯抗生素，是分离自菲律宾链霉菌（S. filipinensis）培养物的四种多烯大环内酯异构体中的占比最多的一种。归因其发荧光且特异性结合胆固醇的特性，菲律宾菌素 III常常通过冷冻断裂电镜术和结合后降低的荧光来检测膜上的胆固醇。菲律宾菌素 III用在番茄细胞中，观察激活配体非依赖性的信号反应。通过菲律宾菌素 III和胆固醇的螯合活性，破坏正常和转染角质细胞的脂筏，抑制AKT信号通络。菲律宾菌素 III复合物最大激发波长是338和357nm，最大发射波长是480nm。

产品特征

1）   CAS NO.：480-49-9

2）   化学名：4S,6S,8S,10R,12R,14R,16S,27S-octahydroxy-3R-(1R-hydroxy-hexyl)17,28R-dimethyl- oxacyclooctacosa-17E,19E,21E,21E,23E,25E-pentaen-2-one

3）   同义名：16,20,22,24-Octacosapentenoic acid; 16,20,22,24-Octacosapentenoic acid; 3,5,7,9,11,13,15,26,27- nonahydroxy-2-(1-hydroxyhexyl)-16-methyl-, 27-lactone; NSC3364; NSC-3364;

4）   分子式：C35H58O11

5）   分子量：654.8

6）   纯度：≥90%

7）   外观：固体

8）   溶解性：溶于DJPO（10mg/ml）、DMF（5mg/ml）、乙醇（1mg/ml）、DJPO:PBS(pH 7.2)(1:4)（0.2mg/ml）

9）   化学结构式：Filipin III (Cholesterol fluorescent probe) 胆固醇荧光探针

保存与运输方法

保存：-20℃避光干燥保存，至少2年有效。

运输：室温运输。

注意事项

1）  关于化合物溶解性：产品特性内的“≥”表明溶于标示浓度，但饱和溶解度未知。不同批次化合物的溶解度会有差异。

2）  为了让化合物更好的溶解，可通过37℃加热或（和）超声波水浴中震动片刻来处理。若实验所需浓度过大甚至达产品溶解极限，请添加助溶剂助溶或自行调整浓度。

3）  菲律宾菌素 III与胆固醇的相互作用会改变吸收和荧光光谱，为此，在做荧光显微镜成像分析时，使用340-380nm作为激发波长，385-470nm作为发射波长。

4）  菲律宾菌素 III的荧光染色漂白非常迅速，因此，染色后样本务必尽快分析。

5）  菲律宾菌素 III溶液对光和空气都非常敏感。条件允许的话，配置好的溶液分装冻存，且充入惰性气体，-80℃分装冻存，避免反复冻融。

6）  为了您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作。

操作流程

以下是针对细胞样本的染色方法，仅作参考。用户需根据实际染色样本和染色条件来优化。

1、  储存液的制备

将低温保存的固体平衡至室温至少20min，低速离心后，于无菌工作台内加入适量有机溶剂（比如：无水高质量DJPO）配置成10mg/ml（=15.2718mM）的储存液。

2、工作液的制备

于正式实验前，用PBS、HBSS或其他生理缓冲液稀释储存液，到所需的工作浓度，比如：10-100μg/ml。最佳的工作浓度请参阅文献或自行设置梯度浓度进行摸索。工作液必须现配现用。

2、  染色步骤（室温进行）

应用示例（来自文献，仅做参考）

1）   用Filipin III进行染色，验证MβCD处理后细胞膜胆固醇水平的降低。Vero细胞铺板在96孔板，用不同浓度的MβCD（2.5, 5, 7.5和10 mM）诱导处理45 min。用冰PBS清洗3次，细胞用4%多聚甲醛固定。之后，细胞膜胆固醇用稀释于PBS的50μg/ml Filipin III（储存液溶于DJPO，浓度是25mg/ml）孵育2h。高容量成像系统基于Filipin III的荧光强度来定量细胞膜胆固醇水平。【文献来源：PMID: 33224131; PMCID: PMC7667042.】

 Filipin III (Cholesterol fluorescent probe) 胆固醇荧光探针

(B) Vero cells were plated in 96-well plates and treated with various concentrations of MβCD (2.5, 5, 7.5, and 10 mM) for 45 min. Cell membrane cholesterol was labeled with 50 μg/mL filipin III, and images were acquired with the Operetta CLSTM High-Content Analysis System.

2）   用Filipin III进行染色，验证U18666A诱导吞噬体样囊泡中的胆固醇积累。CU428和II8G-IA细胞用2μM U18666A或溶剂对照处理15min，之后加入26 μM胆固醇。1h后，样本转移到离心管，清洗后重悬于100μl Tris-HCl，加入等体积4%多聚甲醛-3.4%蔗糖室温固定15min。用PBS清洗后，重悬于100μl PBS中，加入50μg/ml Filipin III（储存液溶于DJPO，浓度是5mg/ml，充入氮气后，-80℃冻存）室温孵育1h，保持震荡，最后细胞清洗2次后，重悬于40μl PBS，滴加到载玻片上进行观察和成像分析。用UV-2A 滤波器组合观察，用Fiji软件进行成像处理和数据分析。【文献来源：Hernández, J., Gabrielli, M., Costa, J. et al. Phagocytic and pinocytic uptake of cholesterol in Tetrahymena thermophila impact differently on gene regulation for sterol homeostasis. Sci Rep 11, 9067 (2021). https://doi.org/10.1038/s41598-021-88737-z】

Filipin III (Cholesterol fluorescent probe) 胆固醇荧光探针

(b) Fluorescent microscopy. CU428 and II8G-IA cells were pretreated with 2 μM U18666A or vehicle for 15 min prior to the addition of 26 μM cholesterol. Untreated cells are designated as Control. After 1 h, cells were fixed, stained with Filipin and examined by fluorescence microscopy. Arrows indicate large, phagosome-like vesicles and arrowheads indicate selected small vesicles that were also observed in some cells. To improve visualization, some of the background fluorescence of CU428 cells was allowed, although II8G-IA cells required more contrast stretching as fluorescence levels were identical between treatments. Scale bar = 50 μm. Results shown are representative experiment repeated three times with similar results.

相关产品

货号 名称 规格          
JP5213-500UG Filipin III (Cholesterol fluorescent probe)胆固醇荧光探针 500µg
JP5214A-1MG Filipin Complex , ≥70%菲律宾菌素复合物 1mg
JP5214B-5MG Filipin Complex, ≥95%菲律宾菌素复合物 5mg
JP5215-500UG BODIPY 480/508-Cholesterol胆固醇荧光探针 500µg
JP5216-1MG Dehydroergosterol (DHE)脱氢麦角甾醇 1mg

规格信息

品牌：

Jinpan
CAS:

480-49-9
规格：

500µg
货期：

咨询客服

Filipin III (Cholesterol fluorescent probe) 胆固醇荧光探针

发表于由

Filipin III (Cholesterol fluorescent probe) 胆固醇荧光探针 货号： JP5213-1MG 品牌： Jinpan 标签： 细胞生物学研究

描述

Filipin III (Cholesterol fluorescent probe)

胆固醇荧光探针

 

产品关键词

Filipin III 菲律宾菌素 III；Cholesterol fluorescent probe 胆固醇荧光探针；U 18666A；polyene antibiotic 多烯抗生素；CAS NO：480-49-9；

产品信息

产品名称

 产品编号 规格         价格（元）

Filipin III (Cholesterol fluorescent probe)胆固醇荧光探针

 JP5213-500UG 500µg 1943
Filipin III (Cholesterol fluorescent probe)胆固醇荧光探针 JP5213-1MG 1mg

2733
Filipin III (Cholesterol fluorescent probe)胆固醇荧光探针 JP5213-5MG 5mg

9963

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产品描述

菲律宾菌素 III（Filipin III）是一种五烯大环内酯抗生素，是分离自菲律宾链霉菌（S. filipinensis）培养物的四种多烯大环内酯异构体中的占比最多的一种。归因其发荧光且特异性结合胆固醇的特性，菲律宾菌素 III常常通过冷冻断裂电镜术和结合后降低的荧光来检测膜上的胆固醇。菲律宾菌素 III用在番茄细胞中，观察激活配体非依赖性的信号反应。通过菲律宾菌素 III和胆固醇的螯合活性，破坏正常和转染角质细胞的脂筏，抑制AKT信号通络。菲律宾菌素 III复合物最大激发波长是338和357nm，最大发射波长是480nm。

产品特征

1）   CAS NO.：480-49-9

2）   化学名：4S,6S,8S,10R,12R,14R,16S,27S-octahydroxy-3R-(1R-hydroxy-hexyl)17,28R-dimethyl- oxacyclooctacosa-17E,19E,21E,21E,23E,25E-pentaen-2-one

3）   同义名：16,20,22,24-Octacosapentenoic acid; 16,20,22,24-Octacosapentenoic acid; 3,5,7,9,11,13,15,26,27- nonahydroxy-2-(1-hydroxyhexyl)-16-methyl-, 27-lactone; NSC3364; NSC-3364;

4）   分子式：C35H58O11

5）   分子量：654.8

6）   纯度：≥90%

7）   外观：固体

8）   溶解性：溶于DJPO（10mg/ml）、DMF（5mg/ml）、乙醇（1mg/ml）、DJPO:PBS(pH 7.2)(1:4)（0.2mg/ml）

9）   化学结构式：Filipin III (Cholesterol fluorescent probe) 胆固醇荧光探针

保存与运输方法

保存：-20℃避光干燥保存，至少2年有效。

运输：室温运输。

注意事项

1）  关于化合物溶解性：产品特性内的“≥”表明溶于标示浓度，但饱和溶解度未知。不同批次化合物的溶解度会有差异。

2）  为了让化合物更好的溶解，可通过37℃加热或（和）超声波水浴中震动片刻来处理。若实验所需浓度过大甚至达产品溶解极限，请添加助溶剂助溶或自行调整浓度。

3）  菲律宾菌素 III与胆固醇的相互作用会改变吸收和荧光光谱，为此，在做荧光显微镜成像分析时，使用340-380nm作为激发波长，385-470nm作为发射波长。

4）  菲律宾菌素 III的荧光染色漂白非常迅速，因此，染色后样本务必尽快分析。

5）  菲律宾菌素 III溶液对光和空气都非常敏感。条件允许的话，配置好的溶液分装冻存，且充入惰性气体，-80℃分装冻存，避免反复冻融。

6）  为了您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作。

操作流程

以下是针对细胞样本的染色方法，仅作参考。用户需根据实际染色样本和染色条件来优化。

1、  储存液的制备

将低温保存的固体平衡至室温至少20min，低速离心后，于无菌工作台内加入适量有机溶剂（比如：无水高质量DJPO）配置成10mg/ml（=15.2718mM）的储存液。

2、工作液的制备

于正式实验前，用PBS、HBSS或其他生理缓冲液稀释储存液，到所需的工作浓度，比如：10-100μg/ml。最佳的工作浓度请参阅文献或自行设置梯度浓度进行摸索。工作液必须现配现用。

2、  染色步骤（室温进行）

应用示例（来自文献，仅做参考）

1）   用Filipin III进行染色，验证MβCD处理后细胞膜胆固醇水平的降低。Vero细胞铺板在96孔板，用不同浓度的MβCD（2.5, 5, 7.5和10 mM）诱导处理45 min。用冰PBS清洗3次，细胞用4%多聚甲醛固定。之后，细胞膜胆固醇用稀释于PBS的50μg/ml Filipin III（储存液溶于DJPO，浓度是25mg/ml）孵育2h。高容量成像系统基于Filipin III的荧光强度来定量细胞膜胆固醇水平。【文献来源：PMID: 33224131; PMCID: PMC7667042.】

 Filipin III (Cholesterol fluorescent probe) 胆固醇荧光探针

(B) Vero cells were plated in 96-well plates and treated with various concentrations of MβCD (2.5, 5, 7.5, and 10 mM) for 45 min. Cell membrane cholesterol was labeled with 50 μg/mL filipin III, and images were acquired with the Operetta CLSTM High-Content Analysis System.

2）   用Filipin III进行染色，验证U18666A诱导吞噬体样囊泡中的胆固醇积累。CU428和II8G-IA细胞用2μM U18666A或溶剂对照处理15min，之后加入26 μM胆固醇。1h后，样本转移到离心管，清洗后重悬于100μl Tris-HCl，加入等体积4%多聚甲醛-3.4%蔗糖室温固定15min。用PBS清洗后，重悬于100μl PBS中，加入50μg/ml Filipin III（储存液溶于DJPO，浓度是5mg/ml，充入氮气后，-80℃冻存）室温孵育1h，保持震荡，最后细胞清洗2次后，重悬于40μl PBS，滴加到载玻片上进行观察和成像分析。用UV-2A 滤波器组合观察，用Fiji软件进行成像处理和数据分析。【文献来源：Hernández, J., Gabrielli, M., Costa, J. et al. Phagocytic and pinocytic uptake of cholesterol in Tetrahymena thermophila impact differently on gene regulation for sterol homeostasis. Sci Rep 11, 9067 (2021). https://doi.org/10.1038/s41598-021-88737-z】

Filipin III (Cholesterol fluorescent probe) 胆固醇荧光探针

(b) Fluorescent microscopy. CU428 and II8G-IA cells were pretreated with 2 μM U18666A or vehicle for 15 min prior to the addition of 26 μM cholesterol. Untreated cells are designated as Control. After 1 h, cells were fixed, stained with Filipin and examined by fluorescence microscopy. Arrows indicate large, phagosome-like vesicles and arrowheads indicate selected small vesicles that were also observed in some cells. To improve visualization, some of the background fluorescence of CU428 cells was allowed, although II8G-IA cells required more contrast stretching as fluorescence levels were identical between treatments. Scale bar = 50 μm. Results shown are representative experiment repeated three times with similar results.

相关产品

货号 名称 规格          
JP5213-500UG Filipin III (Cholesterol fluorescent probe)胆固醇荧光探针 500µg
JP5214A-1MG Filipin Complex , ≥70%菲律宾菌素复合物 1mg
JP5214B-5MG Filipin Complex, ≥95%菲律宾菌素复合物 5mg
JP5215-500UG BODIPY 480/508-Cholesterol胆固醇荧光探针 500µg
JP5216-1MG Dehydroergosterol (DHE)脱氢麦角甾醇 1mg

其他信息

品牌：

Jinpan
CAS:

480-49-9
规格：

1mg
货期：

咨询客服

Collagenase III 胶原酶III型

发表于由

Collagenase III 胶原酶III型

货号： JP1003-1000MG 品牌： Jinpan 标签： 细胞生物学研究

描述

Collagenase III 胶原酶III型

 

产品标签

Collagenase III 胶原酶III；Collagenase NB 4 胶原酶NB4（标准级别）；SERVA Electrophoresis；Dispase II 中性蛋白酶；Roche；CAS：9001-12-1；

产品信息

产品名称 产品编号 规格 价格（元）
Collagenase III 胶原酶III型 JP1003-100MG 100mg 740 629[促销]
Collagenase III 胶原酶III型 JP1003-1000MG 1g 3800

产品描述

胶原酶（Collagenase，CAS NO. 9001-12-1）是一种蛋白水解酶，常用来消化细胞外基质蛋白。作为一种肽链内切酶，胶原酶特异性识别Pro-X-Gly-Pro序列（高频出现在胶原collagen，很少在其他蛋白中发现）并切割氨基酸（X）和甘氨酸（Gly）之间的肽键。不同于其他蛋白酶，胶原酶是唯一一种可识别并降解具三股超螺旋结构的天然胶原纤维，这种胶原纤维广泛存在结缔组织。

商业化胶原酶来源于溶组织梭菌（Clostridium histolyticum），是一种酶粗提物，不仅含有梭菌蛋白酶A（Clostridiopeptidase A），能够降解天然胶原和网状纤维；还含有其他的一些蛋白酶、多糖酶、脂酶等，分别用以水解存在结蹄组织和上皮组织细胞外基质内的其他蛋白、多糖和脂质等。目前商业化的胶原酶因所含组分的差异分为五类，其在应用上具有一定区分，详见附录1。

本品是III型胶原酶，活性≥100 units/mg冻干物，含较低的次级蛋白酶污染物水解活性，但具典型的胶原酶活性。常用于乳腺组织的原代细胞制备；

产品特性

1）EC NO：3.4.24.3

2）CAS NO：9001-12-1

3）酶活力单位定义：在37℃，pH7.5条件下，5h内水解胶原产生多肽相当于1µmol亮氨酸所需的酶量定义为1个活力单位。（One Unit releases one micromole of L-leucine equivalents from collagen in 5 hours at 37°C, pH 7.5.）

保存与运输方法

保存：2-8℃干燥保存，2年有效。

运输：冰袋运输。

使用方法

一、储存液制备

1）直接往100mg胶原酶内加入100µl含钙镁的HBSS缓冲液，轻轻漩涡震荡确保完全溶解混匀。

2）根据具体批次的酶活力，用含钙镁的HBSS缓冲液调整酶浓度到100U/µl（1000×储存液），之后用低蛋白吸附滤膜过滤除菌。

3）立即使用或将储存液根据单次用量分装，置于-20℃避光保存。

4）使用前置于冰上融化，避免反复冻融。建议胶原酶的工作浓度范围50-200U/ml（或0.5-2.5mg/ml），具体使用浓度请根据具体消化对象或参考文献来调整。

二、组织分离

1）用无菌手术刀或剪刀将组织切成3-4mm小片，之后用含钙镁的HBSS缓冲液清洗组织片几次；

2）加足量含钙镁的HBSS缓冲液浸没组织片，之后按照50-200U/ml用量加入适量胶原酶；

3）37℃孵育4-18h，置于水平摇床并且孵育体系加入3mM CaCl2可提高消化效率。

4）将消化好的细胞混合物用无菌的不锈钢或尼龙网过筛。残留组织可再添加适量的新鲜胶原酶工作液于37℃孵育以进一步解离。

5）将过筛收集到的细胞用不含胶原酶的HBSS缓冲液清洗几遍。

6）低速离心，吸掉清洗液。最后用适当的细胞培养液重悬细胞，使用自动细胞计数器或手动法进行活细胞数检测。

三、器官灌注

1）将胶原酶加入37℃预热含钙镁的HBSS缓冲液，使其浓度为50-200U/ml，或根据具体实验体系调整；另加入3mM CaCl2可提高消化效率。

2）按照针对特定器官的预优化频率来进行灌注；

3）将收集到的细胞/组织混合碎片用无菌的不锈钢或尼龙网过筛。残留组织可再添加适量的新鲜胶原酶工作液于37℃孵育以进一步解离。

4）将过筛收集到的细胞用不含胶原酶的HBSS缓冲液清洗几遍。

6）低速离心，吸掉清洗液。最后用适当的细胞培养液重悬细胞，使用自动细胞计数器或手动法进行活细胞数检测。

注意事项

为了您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作。

附录1

表1 几种胶原酶特征和应用比较

胶原酶类型

组分特征和应用
I型胶原（Type 1） 相对均量的多种酶活（包括胶原酶、酪蛋白酶、梭菌蛋白酶、胰蛋白酶活性）；

通常用作上皮组织、肝、肺、脂肪和肾上腺组织的原代细胞制备。
II型胶原酶（Type 2） 含更高的梭菌蛋白酶活性；

通常用作心脏、骨、肝、胸腺、唾液腺和软骨等组织的原代细胞制备。
III型胶原酶（Type 3） 含较低的次级蛋白酶水解活性；常用于乳腺组织的原代细胞制备；
IV型胶原酶（Type 4） 含较低的胰酶活性；通常用于胰岛细胞制备，和维持受体完整性比较重要的其他研究。

也可用于髓系细胞制备。
V型胶原酶（Type 5） 部分纯化型，含更高的胶原酶和酪蛋白活性，更低胰酶水平以降低对膜蛋白和受体造成损伤。

适用于胰岛制备。
胶原酶NB（标准级别） 相对均量的多种酶活（包括胶原酶、梭菌蛋白酶、中性蛋白酶活性），作用温和。

广谱适用人和动物组织各种细胞的分离，可用作脂肪组织、软骨、皮肤、胎盘、

脐带组织和肺的原代细胞制备；也适用细胞传代，比如胚胎干细胞。

相关产品

产品编号 产品名称 规格 价格（元）
JP1001-100MG Collagenase I 胶原酶I型 100mg 280
JP1002-100MG Collagenase II 胶原酶II型 100mg 280
JP1003-100MG Collagenase III 胶原酶III型 100mg 740
JP1004-100MG Collagenase IV 胶原酶IV型 100mg 280
JP1005-100MG Collagenase V 胶原酶V型 100mg 520
JP1011-100MG Collagenase NB 4 Standard Grade 胶原酶NB4标准级别 100mg 280
JP1006-100MG Dispase II 分散酶II（中性蛋白酶） 100mg 480

— —Written/Edited by V. Shallan【版权归JP金畔所有】

规格信息

品牌：

Jinpan
CAS:

9001/12/1
规格：

1g
货期：

咨询客服

Collagenase III 胶原酶III型

发表于由

Collagenase III 胶原酶III型

货号： JP1003-100MG 品牌： Jinpan 标签： 细胞生物学研究

描述

Collagenase III 胶原酶III型

 

产品标签

Collagenase III 胶原酶III；Collagenase NB 4 胶原酶NB4（标准级别）；SERVA Electrophoresis；Dispase II 中性蛋白酶；Roche；CAS：9001-12-1；

产品信息

产品名称 产品编号 规格 价格（元）
Collagenase III 胶原酶III型 JP1003-100MG 100mg 740 629[促销]
Collagenase III 胶原酶III型 JP1003-1000MG 1g 3800

产品描述

胶原酶（Collagenase，CAS NO. 9001-12-1）是一种蛋白水解酶，常用来消化细胞外基质蛋白。作为一种肽链内切酶，胶原酶特异性识别Pro-X-Gly-Pro序列（高频出现在胶原collagen，很少在其他蛋白中发现）并切割氨基酸（X）和甘氨酸（Gly）之间的肽键。不同于其他蛋白酶，胶原酶是唯一一种可识别并降解具三股超螺旋结构的天然胶原纤维，这种胶原纤维广泛存在结缔组织。

商业化胶原酶来源于溶组织梭菌（Clostridium histolyticum），是一种酶粗提物，不仅含有梭菌蛋白酶A（Clostridiopeptidase A），能够降解天然胶原和网状纤维；还含有其他的一些蛋白酶、多糖酶、脂酶等，分别用以水解存在结蹄组织和上皮组织细胞外基质内的其他蛋白、多糖和脂质等。目前商业化的胶原酶因所含组分的差异分为五类，其在应用上具有一定区分，详见附录1。

本品是III型胶原酶，活性≥100 units/mg冻干物，含较低的次级蛋白酶污染物水解活性，但具典型的胶原酶活性。常用于乳腺组织的原代细胞制备；

产品特性

1）EC NO：3.4.24.3

2）CAS NO：9001-12-1

3）酶活力单位定义：在37℃，pH7.5条件下，5h内水解胶原产生多肽相当于1µmol亮氨酸所需的酶量定义为1个活力单位。（One Unit releases one micromole of L-leucine equivalents from collagen in 5 hours at 37°C, pH 7.5.）

保存与运输方法

保存：2-8℃干燥保存，2年有效。

运输：冰袋运输。

使用方法

一、储存液制备

1）直接往100mg胶原酶内加入100µl含钙镁的HBSS缓冲液，轻轻漩涡震荡确保完全溶解混匀。

2）根据具体批次的酶活力，用含钙镁的HBSS缓冲液调整酶浓度到100U/µl（1000×储存液），之后用低蛋白吸附滤膜过滤除菌。

3）立即使用或将储存液根据单次用量分装，置于-20℃避光保存。

4）使用前置于冰上融化，避免反复冻融。建议胶原酶的工作浓度范围50-200U/ml（或0.5-2.5mg/ml），具体使用浓度请根据具体消化对象或参考文献来调整。

二、组织分离

1）用无菌手术刀或剪刀将组织切成3-4mm小片，之后用含钙镁的HBSS缓冲液清洗组织片几次；

2）加足量含钙镁的HBSS缓冲液浸没组织片，之后按照50-200U/ml用量加入适量胶原酶；

3）37℃孵育4-18h，置于水平摇床并且孵育体系加入3mM CaCl2可提高消化效率。

4）将消化好的细胞混合物用无菌的不锈钢或尼龙网过筛。残留组织可再添加适量的新鲜胶原酶工作液于37℃孵育以进一步解离。

5）将过筛收集到的细胞用不含胶原酶的HBSS缓冲液清洗几遍。

6）低速离心，吸掉清洗液。最后用适当的细胞培养液重悬细胞，使用自动细胞计数器或手动法进行活细胞数检测。

三、器官灌注

1）将胶原酶加入37℃预热含钙镁的HBSS缓冲液，使其浓度为50-200U/ml，或根据具体实验体系调整；另加入3mM CaCl2可提高消化效率。

2）按照针对特定器官的预优化频率来进行灌注；

3）将收集到的细胞/组织混合碎片用无菌的不锈钢或尼龙网过筛。残留组织可再添加适量的新鲜胶原酶工作液于37℃孵育以进一步解离。

4）将过筛收集到的细胞用不含胶原酶的HBSS缓冲液清洗几遍。

6）低速离心，吸掉清洗液。最后用适当的细胞培养液重悬细胞，使用自动细胞计数器或手动法进行活细胞数检测。

注意事项

为了您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作。

附录1

表1 几种胶原酶特征和应用比较

胶原酶类型

组分特征和应用
I型胶原（Type 1） 相对均量的多种酶活（包括胶原酶、酪蛋白酶、梭菌蛋白酶、胰蛋白酶活性）；

通常用作上皮组织、肝、肺、脂肪和肾上腺组织的原代细胞制备。
II型胶原酶（Type 2） 含更高的梭菌蛋白酶活性；

通常用作心脏、骨、肝、胸腺、唾液腺和软骨等组织的原代细胞制备。
III型胶原酶（Type 3） 含较低的次级蛋白酶水解活性；常用于乳腺组织的原代细胞制备；
IV型胶原酶（Type 4） 含较低的胰酶活性；通常用于胰岛细胞制备，和维持受体完整性比较重要的其他研究。

也可用于髓系细胞制备。
V型胶原酶（Type 5） 部分纯化型，含更高的胶原酶和酪蛋白活性，更低胰酶水平以降低对膜蛋白和受体造成损伤。

适用于胰岛制备。
胶原酶NB（标准级别） 相对均量的多种酶活（包括胶原酶、梭菌蛋白酶、中性蛋白酶活性），作用温和。

广谱适用人和动物组织各种细胞的分离，可用作脂肪组织、软骨、皮肤、胎盘、

脐带组织和肺的原代细胞制备；也适用细胞传代，比如胚胎干细胞。

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产品编号 产品名称 规格 价格（元）
JP1001-100MG Collagenase I 胶原酶I型 100mg 280
JP1002-100MG Collagenase II 胶原酶II型 100mg 280
JP1003-100MG Collagenase III 胶原酶III型 100mg 740
JP1004-100MG Collagenase IV 胶原酶IV型 100mg 280
JP1005-100MG Collagenase V 胶原酶V型 100mg 520
JP1011-100MG Collagenase NB 4 Standard Grade 胶原酶NB4标准级别 100mg 280
JP1006-100MG Dispase II 分散酶II（中性蛋白酶） 100mg 480

— —Written/Edited by V. Shallan【版权归JP金畔所有】

规格信息

品牌：

Jinpan
CAS:

9001/12/1
规格：

100mg
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同仁化学Hampton蛋白结晶试剂盒Iron(III) chloride hexahydrate/HR2-717| 日本DOJINDO

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Iron(III) chloride hexahydrate

Hampton蛋白结晶试剂盒Iron(III) chloride hexahydrate/HR2-717

CAT NO

HR2-717

NAME

1.0 M Iron(III) chloride hexahydrate

DESCRIPTION

100 mL

PRICE

$79.00

支持材料

Hampton蛋白结晶试剂盒Iron(III) chloride hexahydrate/HR2-717 HR2-717 Iron(III) chloride hexahydrate SDS

应用

  • Crystallization grade Iron(III) chloride hexahydrate for formulating screens or for optimization
  • 结晶级氯化铁 (III) 六水合物，用于筛选或优化

特征

  • Sterile filtered solution
  • Formulated in Type 1+ ultrapure water: 18.2 megaohm-cm resistivity at 25°C, < 5 ppb Total Organic Carbon, bacteria free (<1 Bacteria (CFU/ml)), pyrogen free (<0.03 Endotoxin (EU/ml)), RNase-free (< 0.01 ng/mL) and DNase-free (< 4 pg/µL)
  • 无菌过滤溶液
    在 1+ 型超纯水中配制：25°C 时电阻率为 18.2 兆欧厘米，总有机碳 < 5 ppb，无细菌（<1 细菌 (CFU/ml)），无热原（<0.03 内毒素 (EU/ml)） , 无 RNase (< 0.01 ng/mL) 和无 DNase (< 4 pg/µL)

描述Iron(III) chloride hexahydrate

Synonyms: Ferric chloride hexahydrate
FeCl3 • 6H20
Mr 270.29
CAS Number [10025-77-1]
EC Number 231-729-4
RTECS NO5425000
Merck 14,4019
MDL Number MFCD00149712
PubChem Substance ID 24868480
UN Number 3260 8/PG 3
Purity 98 – 102%

Measured pH range: 0.6 – 1.0 at 25°C
Measured Conductivity Range: 90.0 – 97.8 mS/cm at 25°C

别名：六水氯化铁
FeCl3 • 6H20
270.29 先生
CAS 编号 [10025-77-1]
欧盟编号 231-729-4
RTECS NO5425000
默克 14,4019
MDL 编号 MFCD00149712
PubChem 物质 ID 24868480
联合国编号 3260 8/PG 3
纯度 98 – 102%

测量的 pH 值范围：25°C 时 0.6 – 1.0
测量的电导率范围：25°C 时 90.0 – 97.8 mS/cm

As ≤0.0005%
Ca ≤0.0005%
Cd ≤0.001%
Cl ≤0.002%
Co ≤0.005%
Cr ≤0.01%
Cu ≤0.002%
Fe2+ ≤0.002%
K   ≤0.005%
Mg ≤0.001%
Mn ≤0.1%
N   ≤0.001%
Na ≤0.01%
Ni  ≤0.005%
NO3 ≤0.01%
Pb  ≤0.002%
PO4 ≤0.01%
SO4 ≤0.005%
Zn  ≤0.002%

Iron(III) chloride hexahydrate