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Annexin V-FITC/PI Apoptosis Detection Kit 细胞凋亡检测试剂盒

发表于由

Annexin V-FITC/PI Apoptosis Detection Kit 细胞凋亡检测试剂盒

货号： JP3210-50T 品牌： Jinpan 标签： 细胞生物学研究

描述

Annexin V- FITC/PI Apoptosis Detection Kit

细胞凋亡检测试剂盒

产品信息

产品名称 产品编号 规格 价格（元）
Annexin V-FITC/PI Apoptosis Detection Kit

细胞凋亡检测试剂盒

 JP3210-20T 20T 650
JP3210-50T 50T 1350
JP3210-100T 100T 1980

产品描述

Annexin V-FITC/PI细胞凋亡检测试剂盒（Annexin V-FITC/PI Apoptosis Detection Kit）是一款用来检测细胞凋亡的试剂盒，可以用流式细胞仪或荧光显微镜进行检测。本试剂盒包含FITC标记的Annexin V，用来检测早期细胞凋亡；以及碘化丙啶（PI），用来检测坏死细胞。

本试剂盒的工作原理在于：磷脂酰丝氨酸（Phosphotidylserine，PS）是一种带负电荷的磷脂。正常细胞中，PS位于细胞膜内面，但当凋亡开始后，PS在磷脂双分子层中的不对称分布逐渐消失并转移到细胞膜表面，从而暴露在细胞外环境中。膜联蛋白V（Annexin V）是一种分子量约35kDa的钙离子依赖性磷脂结合蛋白，能非常容易的结合PS，且具有高度的亲和性。因此，通过Annexin V与PS的结合与否来判断凋亡发生。另外，PI的引入能辅助区分凋亡早期细胞和晚期凋亡或坏死细胞。PI作为一种活细胞排斥探针，不能穿透具有完整细胞膜的正常细胞或凋亡早期细胞，但能穿透丧失细胞膜完整性的凋亡晚期细胞或坏死细胞，从而将细胞核染红。因此，将Annexin V-FITC与PI联合使用时，呈现结果为：正常细胞（Annexin V-FITC-/PI-），早期凋亡细胞（Annexin V-FITC+/PI-）；晚期凋亡细胞和坏死细胞同时呈现双阳性（Annexin V-FITC+/PI+）。

产品组成

组分编号 组分名称 保存方法 产品编号（规格）
JP3210-20T JP3210-50T JP3210-100T
JP3210-A Annexin V-FITC 2-8℃避光 100μl 250μl 500μl
JP3210-B 碘化丙啶溶液 2-8℃避光 200μl 500μl 1ml
JP3210-C 结合缓冲液（4×） 2-8℃ 4ml 10ml 20ml

保存与运输方法

保存：2-8℃保存，不可冰冻。其中组分A，B需避光保存。1年有效。

运输：冰袋运输。

注意事项

1） 由于细胞凋亡是一个快速过程，染色后请尽快检测，时间过长会导致凋亡或坏死细胞数量增加。

2） 对于贴壁细胞，需要很好掌控消化步骤。细胞凋亡诱导时贴壁细胞如有漂浮细胞，需同时收集漂浮细胞和贴壁细胞合并染色。处理贴壁细胞时要小心，尽量避免人为造成的细胞损伤。胰酶消化时间过短，细胞需要用力吹打才能脱落，容易造成细胞膜的损伤，导致PI摄入过多；而胰酶消化时间过长，细胞膜也易造成损伤，甚至会影响细胞膜PS与Annexin V的结合。消化时将胰酶铺满孔板底后，轻摇使胰酶与细胞充分接触，之后倒掉大部分胰酶，利用残留的少量胰酶再消化一段时间，待细胞间空隙增大，瓶底呈花斑状即可终止。消化液中尽量不用EDTA，EDTA会影响Annexin V与PS的结合。

3） 实验中若需固定细胞，比如凋亡检测同时还需要检测细胞周期，建议选用Annexin V-FITC，不要使用Annexin V-EGFP，因固定过程中EGFP会变性导致无荧光。

4） 若样品来源于血液，务必先去除血液中的血小板。因为血小板含有PS，会与Annexin V结合产生假阳性。可使用含EDTA的缓冲液并低速离心去除血小板。

5） 荧光物质易发生淬灭，试剂储存和操作过程中尽量避光。荧光检测时也尽量缩短观察时间。

6） 为了您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作。

使用方法

一、 染色步骤

1.1 细胞样品的准备：

a）对于贴壁细胞：小心收集细胞培养液到一干净离心管内备用。 用不含EDTA的胰酶消化细胞至细胞可以被轻轻用移液管或枪头吹打下来时，加入前面收集的细胞培养液，吹打下所有的贴壁细胞，并轻轻吹散细胞。再次收集到离心管内。1000rpm离心5min，沉淀细胞。对于特定的细胞，如果无法完全离心至管底，可以适当延长离心时间或稍稍加大离心速度。小心吸除上清，可以残留约50µl左右的培养液，以避免吸走细胞。加入1ml 4℃预冷的PBS，重悬细胞，再次离心沉淀细胞，小心吸除上清。

b）对于悬浮细胞：1000rpm离心5min沉淀细胞。对于特定的细胞，如果无法完全离心至管底，可以适当延长离心时间或稍稍加大离心速度。小心吸除上清，可以残留约50µl左右的培养液，以避免吸走细胞。加入1ml 4℃预冷的PBS，重悬细胞，再次离心沉淀细胞，小心吸除上清。

1.2 用去离子水按照1:3稀释结合缓冲液到1×，比如，5ml结合缓冲液（4×）加入15ml去离子水。

1.3 用结合缓冲液（1×）重新悬浮细胞并调整浓度为1-5×106/ml。

1.4 取100µl的细胞悬液到5ml流式管中，加入5µl Annexin V-FITC混匀，室温避光孵育5min。

1.5 再加入10µl碘化丙啶溶液，并加400µl结合缓冲液（1×），混匀，尽快（＜1h）用流式细胞仪或荧光显微镜完成检测。

【注意】：方便起见，步骤1.4内可同时加入5µl Annexin V-FITC和10µl碘化丙啶溶液混匀，室温避光孵育5min。然后加入400µl结合缓冲液（1×）混匀，但需尽快（＜1h）用流式细胞仪或荧光显微镜完成检测。但为了减少实验误差，建议按照1.4-1.5的步骤来操作。因PI受时间影响比较大，细胞标记上PI后毒性会增加。随着时间延长会导致PI染色增加，尤其是检测早期凋亡时，误差会明显加大。建议PI加入后立即开始检测。

二、 染色检测

2.1流式细胞仪分析

1）请根据以下设计实验：

空白管：阴性对照组细胞，不加Annexin V-FITC和碘化丙啶溶液。目的用来调节电压。

单染管：阳性对照组细胞，只加Annexin V-FITC。目的用来调节补偿。

检测管：处理细胞组，加Annexin V-FITC和碘化丙啶溶液。用空白管和单染管调节好电压补偿后，获得所需的流式数据。

2）对于Annexin V-FITC（Ex=488nm，Em=525nm），用流式细胞仪的FITC信号检测器（通常F1通道）；对于PI-DNA复合物（Ex=535nm，Em=615nm），用流式细胞仪的PE发射信号检测器（通常F2通道）。

3）用CellQuest等软件进行分析，绘制双色散点图（two-color dot plot），FITC为横坐标，PI为纵坐标。每个样采集10,000 events。典型实验结果中，细胞可分成三个亚群，活细胞仅有很低强度的背景荧光，凋亡早期细胞仅有较强的绿色荧光，凋亡晚期细胞或坏死细胞有绿色和红色的双重荧光染色。

2.2荧光显微镜分析

1)滴一滴用Annexin V-FITC/PI双染的细胞悬液于载玻片上，并用盖玻片盖上细胞。【注意】：对于贴壁细胞，可直接用盖玻片培养细胞并诱导细胞凋亡。探针孵育结束后，可将盖玻片倒置在载玻片上并进行观察。需要在染色结束后尽快（＜1h）进行观察。

2)于荧光显微镜下用双色滤光片（FITC/罗丹明）进行观察。早期凋亡细胞，仅结合Annexin V-FITC的细胞质膜呈现绿色。而丧失膜完整的细胞在细胞核上被PI染色呈现红色，且在细胞表面（质膜）上因被Annexin V-FITC染色呈绿色光环。

常见问题

1） Annexin V/PI凋亡试剂盒能够用于检测人或其他动物的细胞凋亡情况？

回复：可以，因Annexin V特异性结合PS，而PS在不同种属间无差异。

2）贴壁细胞做凋亡用胰酶消化对细胞膜有损伤？

回复：低浓度胰酶消化，轻柔吹打贴壁细胞2～3次，4℃，1000rpm离心5min， 处理得当的话， 胰酶造成损伤可以控制在 5%以内，在有对照组的情况下对实验结果不会造成明显影响。

3）贴壁细胞可先染PI然后再消化吗？这样是否可减少由于消化液造成的细胞膜损伤而染上PI的误差？

回复：先加 PI不仅染色是否每组都均匀充分很难判断， 而且PI本身对细胞也是有毒性的， 对实验结果影响会比胰酶大，不建议这样做。

4）为什么只能用不含 EDTA的胰酶消化贴壁细胞，用含 EDTA的胰酶消化细胞对结果有什么影响？

回复：因Annexin V是钙离子依赖性的磷脂结合蛋白，EDTA是一种金属螯合剂。因此EDTA的加入会影响Annexin V活性，进而影响结果。

相关产品

货号 名称 规格
JP3210-20T Annexin V-FITC/PI Apoptosis Detection Kit细胞凋亡检测试剂盒 20T
JP3211-20T Annexin V-Alexa Fluor 488/PI Apoptosis Detection Kit细胞凋亡检测试剂盒 20T
JP3212-20T Annexin V-EGFP/PI Apoptosis Detection Kit细胞凋亡检测试剂盒 20T
JP3213-20T Annexin V-Alexa Fluor 647/PI Apoptosis Detection Kit细胞凋亡检测试剂盒 20T
JP3214-30T Annexin V-APC/7-AAD Apoptosis Detection Kit 细胞凋亡检测试剂盒 30T
JP3215-20T Annexin V-PE/7-AAD Apoptosis Detection Kit细胞凋亡检测试剂盒 20T

— —Written/Edited by V. Shallan【版权归集奇生物/JP金畔所有】

 

规格信息

品牌：

Jinpan
CAS:

N/A
规格：

50T
货期：

咨询客服

Annexin V-FITC/PI Apoptosis Detection Kit 细胞凋亡检测试剂盒

发表于由

Annexin V-FITC/PI Apoptosis Detection Kit 细胞凋亡检测试剂盒

货号： JP3210-20T 品牌： Jinpan 标签： 细胞生物学研究

描述

Annexin V- FITC/PI Apoptosis Detection Kit

细胞凋亡检测试剂盒

产品信息

产品名称 产品编号 规格 价格（元）
Annexin V-FITC/PI Apoptosis Detection Kit

细胞凋亡检测试剂盒

 JP3210-20T 20T 650
JP3210-50T 50T 1350
JP3210-100T 100T 1980

产品描述

Annexin V-FITC/PI细胞凋亡检测试剂盒（Annexin V-FITC/PI Apoptosis Detection Kit）是一款用来检测细胞凋亡的试剂盒，可以用流式细胞仪或荧光显微镜进行检测。本试剂盒包含FITC标记的Annexin V，用来检测早期细胞凋亡；以及碘化丙啶（PI），用来检测坏死细胞。

本试剂盒的工作原理在于：磷脂酰丝氨酸（Phosphotidylserine，PS）是一种带负电荷的磷脂。正常细胞中，PS位于细胞膜内面，但当凋亡开始后，PS在磷脂双分子层中的不对称分布逐渐消失并转移到细胞膜表面，从而暴露在细胞外环境中。膜联蛋白V（Annexin V）是一种分子量约35kDa的钙离子依赖性磷脂结合蛋白，能非常容易的结合PS，且具有高度的亲和性。因此，通过Annexin V与PS的结合与否来判断凋亡发生。另外，PI的引入能辅助区分凋亡早期细胞和晚期凋亡或坏死细胞。PI作为一种活细胞排斥探针，不能穿透具有完整细胞膜的正常细胞或凋亡早期细胞，但能穿透丧失细胞膜完整性的凋亡晚期细胞或坏死细胞，从而将细胞核染红。因此，将Annexin V-FITC与PI联合使用时，呈现结果为：正常细胞（Annexin V-FITC-/PI-），早期凋亡细胞（Annexin V-FITC+/PI-）；晚期凋亡细胞和坏死细胞同时呈现双阳性（Annexin V-FITC+/PI+）。

产品组成

组分编号 组分名称 保存方法 产品编号（规格）
JP3210-20T JP3210-50T JP3210-100T
JP3210-A Annexin V-FITC 2-8℃避光 100μl 250μl 500μl
JP3210-B 碘化丙啶溶液 2-8℃避光 200μl 500μl 1ml
JP3210-C 结合缓冲液（4×） 2-8℃ 4ml 10ml 20ml

保存与运输方法

保存：2-8℃保存，不可冰冻。其中组分A，B需避光保存。1年有效。

运输：冰袋运输。

注意事项

1） 由于细胞凋亡是一个快速过程，染色后请尽快检测，时间过长会导致凋亡或坏死细胞数量增加。

2） 对于贴壁细胞，需要很好掌控消化步骤。细胞凋亡诱导时贴壁细胞如有漂浮细胞，需同时收集漂浮细胞和贴壁细胞合并染色。处理贴壁细胞时要小心，尽量避免人为造成的细胞损伤。胰酶消化时间过短，细胞需要用力吹打才能脱落，容易造成细胞膜的损伤，导致PI摄入过多；而胰酶消化时间过长，细胞膜也易造成损伤，甚至会影响细胞膜PS与Annexin V的结合。消化时将胰酶铺满孔板底后，轻摇使胰酶与细胞充分接触，之后倒掉大部分胰酶，利用残留的少量胰酶再消化一段时间，待细胞间空隙增大，瓶底呈花斑状即可终止。消化液中尽量不用EDTA，EDTA会影响Annexin V与PS的结合。

3） 实验中若需固定细胞，比如凋亡检测同时还需要检测细胞周期，建议选用Annexin V-FITC，不要使用Annexin V-EGFP，因固定过程中EGFP会变性导致无荧光。

4） 若样品来源于血液，务必先去除血液中的血小板。因为血小板含有PS，会与Annexin V结合产生假阳性。可使用含EDTA的缓冲液并低速离心去除血小板。

5） 荧光物质易发生淬灭，试剂储存和操作过程中尽量避光。荧光检测时也尽量缩短观察时间。

6） 为了您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作。

使用方法

一、 染色步骤

1.1 细胞样品的准备：

a）对于贴壁细胞：小心收集细胞培养液到一干净离心管内备用。 用不含EDTA的胰酶消化细胞至细胞可以被轻轻用移液管或枪头吹打下来时，加入前面收集的细胞培养液，吹打下所有的贴壁细胞，并轻轻吹散细胞。再次收集到离心管内。1000rpm离心5min，沉淀细胞。对于特定的细胞，如果无法完全离心至管底，可以适当延长离心时间或稍稍加大离心速度。小心吸除上清，可以残留约50µl左右的培养液，以避免吸走细胞。加入1ml 4℃预冷的PBS，重悬细胞，再次离心沉淀细胞，小心吸除上清。

b）对于悬浮细胞：1000rpm离心5min沉淀细胞。对于特定的细胞，如果无法完全离心至管底，可以适当延长离心时间或稍稍加大离心速度。小心吸除上清，可以残留约50µl左右的培养液，以避免吸走细胞。加入1ml 4℃预冷的PBS，重悬细胞，再次离心沉淀细胞，小心吸除上清。

1.2 用去离子水按照1:3稀释结合缓冲液到1×，比如，5ml结合缓冲液（4×）加入15ml去离子水。

1.3 用结合缓冲液（1×）重新悬浮细胞并调整浓度为1-5×106/ml。

1.4 取100µl的细胞悬液到5ml流式管中，加入5µl Annexin V-FITC混匀，室温避光孵育5min。

1.5 再加入10µl碘化丙啶溶液，并加400µl结合缓冲液（1×），混匀，尽快（＜1h）用流式细胞仪或荧光显微镜完成检测。

【注意】：方便起见，步骤1.4内可同时加入5µl Annexin V-FITC和10µl碘化丙啶溶液混匀，室温避光孵育5min。然后加入400µl结合缓冲液（1×）混匀，但需尽快（＜1h）用流式细胞仪或荧光显微镜完成检测。但为了减少实验误差，建议按照1.4-1.5的步骤来操作。因PI受时间影响比较大，细胞标记上PI后毒性会增加。随着时间延长会导致PI染色增加，尤其是检测早期凋亡时，误差会明显加大。建议PI加入后立即开始检测。

二、 染色检测

2.1流式细胞仪分析

1）请根据以下设计实验：

空白管：阴性对照组细胞，不加Annexin V-FITC和碘化丙啶溶液。目的用来调节电压。

单染管：阳性对照组细胞，只加Annexin V-FITC。目的用来调节补偿。

检测管：处理细胞组，加Annexin V-FITC和碘化丙啶溶液。用空白管和单染管调节好电压补偿后，获得所需的流式数据。

2）对于Annexin V-FITC（Ex=488nm，Em=525nm），用流式细胞仪的FITC信号检测器（通常F1通道）；对于PI-DNA复合物（Ex=535nm，Em=615nm），用流式细胞仪的PE发射信号检测器（通常F2通道）。

3）用CellQuest等软件进行分析，绘制双色散点图（two-color dot plot），FITC为横坐标，PI为纵坐标。每个样采集10,000 events。典型实验结果中，细胞可分成三个亚群，活细胞仅有很低强度的背景荧光，凋亡早期细胞仅有较强的绿色荧光，凋亡晚期细胞或坏死细胞有绿色和红色的双重荧光染色。

2.2荧光显微镜分析

1)滴一滴用Annexin V-FITC/PI双染的细胞悬液于载玻片上，并用盖玻片盖上细胞。【注意】：对于贴壁细胞，可直接用盖玻片培养细胞并诱导细胞凋亡。探针孵育结束后，可将盖玻片倒置在载玻片上并进行观察。需要在染色结束后尽快（＜1h）进行观察。

2)于荧光显微镜下用双色滤光片（FITC/罗丹明）进行观察。早期凋亡细胞，仅结合Annexin V-FITC的细胞质膜呈现绿色。而丧失膜完整的细胞在细胞核上被PI染色呈现红色，且在细胞表面（质膜）上因被Annexin V-FITC染色呈绿色光环。

常见问题

1） Annexin V/PI凋亡试剂盒能够用于检测人或其他动物的细胞凋亡情况？

回复：可以，因Annexin V特异性结合PS，而PS在不同种属间无差异。

2）贴壁细胞做凋亡用胰酶消化对细胞膜有损伤？

回复：低浓度胰酶消化，轻柔吹打贴壁细胞2～3次，4℃，1000rpm离心5min， 处理得当的话， 胰酶造成损伤可以控制在 5%以内，在有对照组的情况下对实验结果不会造成明显影响。

3）贴壁细胞可先染PI然后再消化吗？这样是否可减少由于消化液造成的细胞膜损伤而染上PI的误差？

回复：先加 PI不仅染色是否每组都均匀充分很难判断， 而且PI本身对细胞也是有毒性的， 对实验结果影响会比胰酶大，不建议这样做。

4）为什么只能用不含 EDTA的胰酶消化贴壁细胞，用含 EDTA的胰酶消化细胞对结果有什么影响？

回复：因Annexin V是钙离子依赖性的磷脂结合蛋白，EDTA是一种金属螯合剂。因此EDTA的加入会影响Annexin V活性，进而影响结果。

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货号 名称 规格
JP3210-20T Annexin V-FITC/PI Apoptosis Detection Kit细胞凋亡检测试剂盒 20T
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JP3214-30T Annexin V-APC/7-AAD Apoptosis Detection Kit 细胞凋亡检测试剂盒 30T
JP3215-20T Annexin V-PE/7-AAD Apoptosis Detection Kit细胞凋亡检测试剂盒 20T

— —Written/Edited by V. Shallan【版权归集奇生物/JP金畔所有】

 

规格信息

品牌：

Jinpan
CAS:

N/A
规格：

20T
货期：

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FITC-Con A (FITC labeled Concanavalin A) FITC标记刀豆蛋白A

发表于由

FITC-Con A (FITC labeled Concanavalin A) FITC标记刀豆蛋白A

货号： MP6321-5MG 品牌： Jinpan 标签： 蛋白研究

描述

FITC-Con A (FITC labeled Concanavalin A)

FITC标记刀豆蛋白A

产品标签

淋巴细胞转化实验（T Lymphocyte Transformation Test），非特异性有丝分裂原（mitogen），T细胞活化和增殖，Con A，Concanavalin A ，伴刀豆凝集素，植物血球凝集素PHA，CAS：11028-71-0

产品信息

产品名称 产品编号 规格               价格（元）  
FITC-Con A (FITC labeled Concanavalin A) FITC标记刀豆蛋白A    MP6321-5MG    5mg 1285

植物凝集素系列相关产品：

1）  见我司金畔生物整理的植物血凝素PHA（PHA-L，PHA-M，PHA-E，PHA-P）产品专题和信息。

2）  见我司金畔生物整理的番茄凝集素Tomato-Lectin产品专题和信息。

3）  见我司金畔生物整理的加纳籽凝集素I-同工凝集素B4（GSL I-B4，BSL I-B4）产品专题和信息。

4）  见我司金畔生物整理的刀豆蛋白凝集素Concanavalin A产品专题和信息。

5）  更多凝集素产品逐渐开发中。。。。。。

产品描述

刀豆蛋白A（Concanavalin A，Con A），来源于Canavalia ensiformis洋刀豆（刀豆），是一种凝集素蛋白（Mw 104kDa）。pH≥7.0条件下，Con A以同质四聚体结构形式存在，由四个分子量为26kDa的亚基构成。酸性条件（pH 4.5-5.5）下，Con A解离为活化的二聚体结构（52kDa）。每一个单体，不管pH值或分子结构如何，都包含2个金属离子结合位点。金属离子（Ca2+ 和 Mn2+ ）必须结合到这两个位点上Con A才能发挥活性。乙酰化、琥珀酰化或其他衍生物也能产生稳定的二聚体结构形式。

刀豆蛋白A（Concanavalin A，Con A）无血型特异性，但选择性结合发现于各种糖蛋白、糖脂和糖类分子上的α-甘露糖基（α-mannosyl residues）和α-葡糖基残基（α-glucosyl residues），需要Ca2+ 和 Mn2+ 离子存在才能显示活性。Con A适用于碳水化合物研究，糖蛋白纯化，酶标记（enzyme tagging），细胞膜研究，细胞凝集，和细胞分型研究。

本品是FITC标记的刀豆蛋白（FITC labeled Concanavalin A, FITC-ConA），Ex/Em=495/515nm，亲和纯化所得，基本不含未标记的荧光素。建议工作浓度范围是5-20μg/ml。

产品特性

1）   英文同义名：Concanavalin A from Canavalia ensiformis (Jack bean), FITC Conjugate; FITC-ConA;

FITC labeled Concanavalin A (ConA); ConA lectin (FITC);

2）   中文同义名：刀豆蛋白 A 来源于洋刀豆 （刀豆），FITC标记；FITC标记的刀豆凝集素A；FITC标记的刀豆球蛋白A；FITC标记的伴刀豆球蛋白A；

3）   糖类特异性：α-甘露糖；α-葡萄糖；

4）   F/P（摩尔）：2.0-5.0

5）   外观：溶液（溶于10 mM HEPES, 0.15 M NaCl, pH 7.5, containing 0.1 mM Ca2+, 0.08% sodium azide and 0.01mM Mn2+）

6）   蛋白浓度：5mg/ml

7）   Ex/Em：495/515nm

8）   应用：IF、糖生物学

保存与运输方法

保存：2-8℃避光保存，至少1年有效。

运输：冰袋运输。

注意事项

1）   本品置于2-8℃长期保存可能会产生沉淀，使用前请37℃温育数分钟，之后离心吸取上清使用。此操作基本不会对产生性能造成负影响。

2）   为了您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作。 

常见问题

1）   FITC标记刀豆蛋白（FITC-ConA）（# MP6321-5MG）的建议工作浓度是多少？ 如何配制染色工作液？

回复：本品用于免疫荧光染色（IF）的建议工作浓度是5-20μg/ml，用户可根据自身的实际需求或参考文献来进行工作浓度的优化。可用生理缓冲液如PBS，HEPES等稀释到工作浓度。

2）   FITC标记刀豆蛋白（FITC-ConA）（# MP6321-5MG）进行免疫荧光染色（IF）的建议孵育条件如何？

回复：一般孵育条件是室温（RT）孵育30min，也可于4℃孵育30-1h。具体的孵育条件请根据自身的实际需求或参考文献来进行优化。

相关文献a）The Candida albicans ENO1 gene encodes a transglutaminase involved in growth, cell division, morphogenesis, and osmotic protection. PMID: 29386353. 【Cells were washed twice with 1× PBS, permeabilized with 70% ethanol, incubated with 2 μg/ml FITC-ConA in 1× PBS for 30 min at room temperature, washed twice with 1× PBS, and analyzed in the flow cytometer. The maximum excitation wavelength was 495 nm, and the maximum emission wavelength was 515 nm.】

相关文献b）Staining of the inner acrosomal membrane of human spermatozoa with concanavalin A lectin as an indicator of potential egg penetration ability. PMID: 1718787. 【Spermatozoa were pelleted by microcentrifugation, and excess fixative was removed. The pellet was resuspended in a small volume of fixative remaining and 20μl aliquots of fixed sperm suspension were allowed to air dry on poly-L-lysine-treated slides. The slides were then rinsed in 0.2 M glycine followed by a second wash in 10 mM phosphate buffered saline (PBS). Spermatozoa were labeled with 25μl of 100μg FITC-ConA/mL in PBS for 25 minutes at RT. Slides were rinsed with excess PBS and mounted in medium16 before immediate examination at a magnification of 400X under an Olympus BHT microscope.】

3）   FITC标记刀豆蛋白（FITC-ConA）（# MP6321-5MG）如何进行视网膜血管染色？

回复：很多临床前实验表明在各种FITC标记的凝集素中刀豆蛋白A对视网膜血管（retinal vasculature）能表现出最均匀的染色结果。很多文献用FITC-ConA来标记血管壁上粘附的白细胞和血管内皮细胞。使用方法可参考以下文献：

文献a）Simvastatin Inhibits Leukocyte Accumulation and Vascular Permeability in the Retinas of Rats with Streptozotocin-Induced Diabetes. PMID: 15111316.【Six different rats were used in each group. After the induction of deep anesthesia, the chest cavity was carefully opened and a 20-gauge perfusion cannula was introduced into the aorta. Drainage was achieved by opening the right atrium. The animals were then perfused with 100 ml of phosphate-buffered saline (PBS) to wash out blood cells in the vessels, such as erythrocytes and nonadherent leukocytes. After PBS perfusion, the animals were perfused with 25 ml of fluorescein isothiocyanate (FITC)-labeled concanavalin A lectin (ConA; 40 μg/ml in PBS, pH 7.4). ConA was used to label leukocytes adherent to the vessel walls. Residual unbound ConA was removed with PBS perfusion. The retina was carefully removed and fixed with 1% paraformaldehyde, and flat mounts were prepared using a fluorescence anti-fading medium. The retinas were then observed using fluorescence microscopy】

文献b）VEGF164 Is Proinflammatory in the Diabetic Retina. PMID: 12714656 【Perfusion with FITC-ConA or Rhodamine-Con A (40 μg/mL in PBS [pH 7.4], 5 mg/kg BW) was then performed to label adherent leukocytes and vascular endothelial cells, followed by removal of residual unbound lectin with PBS perfusion.】

 

 

 

 

 

规格信息

品牌：

Jinpan
CAS:

N/A
规格：

5mg
货期：

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FITC-LEL (FITC labeled Lycopersicon Esculentum (Tomato) Lectin) FITC标记番茄凝集素

发表于由

FITC-LEL (FITC labeled Lycopersicon Esculentum (Tomato) Lectin) FITC标记番茄凝集素

货号： MP6311-500UG 品牌： Jinpan 标签： 蛋白研究

描述

FITC labeled Lycopersicon Esculentum (Tomato) Lectin

FITC标记番茄凝集素

产品标签

番茄凝集素（Tomato lectin）；FITC-LEL；Intravascular perfusion 血管内灌注；Lectin perfusion 凝集素灌注；Microvasculature 微血管；Endothelial cells 内皮细胞；

产品信息

产品名称 产品编号 规格 目录价（元）
FITC labeled Lycopersicon Esculentum (Tomato) Lectin    MP6311-500UG   500μg             1500

【温馨提示：见我司金畔生物整理的血管功能研究标志物-番茄凝集素（Tomato Lectin ）产品专题】

产品描述

番茄凝集素（Tomato lectin，Lycopersicon Esculentum Lectin（LEL）），是一种非常稳定的单亚基糖蛋白，约含有等量的蛋白质和碳水化合物。据报道其糖类部分由85%阿拉伯糖和15%半乳糖组成，在溶液中可能形成多聚体聚合物。LEL无血型特异性，但能亲和N-乙酰-β-D-葡糖胺寡聚体。LEL能够很好的结合内皮细胞，用来观察和评价微血管系统。LEL能够抑制菜豆来源植物血凝素（PMA）的促有丝分裂活性。

本品为FITC标记的番茄凝集素（来源于Lycopersicon esculentum），Ex/Em=495/515nm，通过血管内灌注法或直接染色组织切片能快速且有效的检测和可视化啮齿类动物的血管和小胶质细胞。

产品特性

1） 英文同义名：Lycopersicon esculentum agglutinin（LEA），FITC Conjugate; Fluorescein labeled Lycopersicon Esculentum (Tomato) Lectin; FITC-LEL; FITC-LEA;

2） 分子量：~71kDa

3） 糖类特异性：[GlcNAc]1-3, N-Acetylglucosamine

4） F/P（摩尔）：2.0-5.0

5） 外观：黄色至黄绿色液体（溶于10 mM HEPES, 0.15 M NaCl, pH 7.5, containing 0.1 mM Ca2+, 0.08% sodium azide and 5 mg/mL β-cyclodextrin）

6） 浓度：2mg/ml

7） Ex/Em=495/515nm

8） 应用：糖生物；IF；

保存与运输方法

保存：2-8℃避光保存，1年有效。

运输：冰袋运输。

使用方法【源自文献，仅作参考】

文献1，Huang J et al. Regression of established tumors and metastases by potent vascular endothelial growth factor blockade. Proc Natl Acad Sci U S A. 2003 Jun 24;100(13):7785-90. PMID: 12805568

体内研究（Lectin Perfusion）：

动物模型（Animal Model）：Xenografts were established in 4- to 6-week-old female NCR nude mice by intrarenal injection of 106 SK-NEP-1 cultured human Wilms tumor cells and allowed to grow. After 5 weeks, large tumors were palpable in all mice, and a cohort was randomly selected to provide day-0 controls.

灌注方法（Lectin perfusion）：Selected mice at each time point underwent intravascular injection of fluorescein- labeled Lycopersicon esculentum lectin (100 μg in 100 μl of saline) into the left ventricle. The vasculature was fixed by infusion of 1% paraformaldehyde (pH 7.4) in PBS and then washed by perfusion of PBS.

给药途径（Administration）：Intravascular (i.v.) injection
文献2，Inai T et al. Inhibition of vascular endothelial growth factor (VEGF) signaling in cancer causes loss of endothelial fenestrations, regression of tumor vessels, and appearance of basement membrane ghosts. Am J Pathol. 2004 Jul;165(1):35-52. PMID: 15215160

体内研究（Lectin Perfusion）：

动物模型（Animal Model）：Tumor-bearing RIP-Tag2 transgenic mice34 (C57BL/6 background, 10 to 12 weeks of age).

灌注方法（Lectin perfusion）：In mice used for immunohistochemistry, blood flow and patency of individual tumor vessels were assessed by injection of 100 μg of fluorescein isothiocyanate-labeled Lycopersicon esculentum lectin in 0.9% NaCl (100 μl into femoral vein). Two minutes later the chest was opened rapidly, and the vasculature was perfused for 2 minutes at a pressure of 120 mmHg with fixative [1% paraformaldehyde in phosphate-buffered saline (PBS), pH 7.4] from an 18-gauge cannula inserted into the aorta via an incision in the left ventricle. Blood and fixative exited through an opening in the right atrium. Tissues were removed, immersed in fixative for 1 hour at 4°C, and then processed for immunohistochemistry.

给药途径（Administration）：Intravascular (i.v.) injection
文献3，Dawitz J et al. Functional calcium imaging in developing cortical networks. J Vis Exp. 2011 Oct 22;(56). pii: 3550. doi: 10.3791/3550. PMID:22041662

体外研究：

细胞类型（Cell type）：Microglia and endothelial cells

实验方法（Assay）：Take 25 μl of 2mg/ml Lycopersicon esculentum (tomato) lectin FITC conjugate stock solution into 2.5ml r-ACSF to give 20 μg/ml concentration. Pipette the dye over the slices as before, leaving the slices incubating for a period of 45 minutes.

注意事项

1） 本品长期保存中可能产生沉淀，37℃温育溶解后再使用。

2） 本品含防腐剂叠氮钠，操作过程中请注意防护。

3） 为了您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作。

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规格信息

品牌：

Jinpan
CAS:

N/A
规格：

500μg
货期：

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FITC-UEA-I (FITC labeled Ulex Europaeus Agglutinin I) FITC标记荆豆凝集素I

发表于由

FITC-UEA-I (FITC labeled Ulex Europaeus Agglutinin I) FITC标记荆豆凝集素I

货号： MP6308-500UG 品牌： Jinpan 标签： 蛋白研究

描述

FITC-UEA-I（荆豆凝集素I-FITC标记）

 

搜索关键词：

FITC-UEA-I 绿色荧光标记荆豆凝集素I；Anti-H blood group specificity 抗血型H特异性；Lectin Binding 凝集素结合；Endothelial cells内皮细胞；DiI-Ac-LDL 红色荧光探针标记乙酰化LDL；EPC（Endothelial Progenitor Cell）内皮祖细胞；

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 货号                      产品名称                                         规格              价格（元）    
 MP6308-100UG  FITC-UEA-I FITC标记荆豆凝集素  100μg  560
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【温馨提示】：见我司整理的内皮祖细胞（EPC）双荧光鉴定产品专题。

 

FITC-UEA-I基本描述：

荆豆凝集素，英文全名Ulex Europaeus Agglutinin，缩写UEA，特异性抵抗H血型，常见两种凝集素类型：UEA I结合L-岩藻糖，UEA II结合N,Nˊ-二乙酰壳二糖。最初研究发现UEA I分子量为170kDa，后续研究显示UEA I中性或碱性pH下可能会聚合，而正确分子量为68kDa。

本品为FITC荧光标记的UEA I，即FITC-UEA-I（FITC-UEA-1），经凝胶管柱层析法纯化所得，Ex/Em=490/520nm。结合含α-连接岩藻糖的许多糖蛋白和糖脂，比如ABO血型糖偶联物。优先结合血型O细胞，用于确定分泌型状态。还可用做一种优异的人内皮细胞标志物。适用于免疫细胞/免疫荧光（IC/IF）和糖生物研究。

 

FITC-UEA-I主要应用：

FITC-UEA-I（FITC-UEA-1），最常见的应用就是联合DiI-Ac-LDL（红色荧光标记乙酰化LDL）一起，用来标记定向诱导培养的单个核细胞（MNCs），以鉴定成功分化的内皮祖细胞（Endothelial Progenitor Cells，EPCs），这是目前来说最成功的最普遍的从功能学角度来鉴定EPCs的方法。

EPCs鉴定-双标记方法【更多内容见官网——内皮祖细胞的双标记染色】

步骤：贴壁细胞先用12 μg/ml DiI-Ac-LDL（货号：MP6013-500UG）37°C孵育4h。PBS清洗细胞，细胞清洗（5min/次，3次），然后用2%多聚甲醛固定10min。之后用10 μg/ml FITC-UEA-1（货号：MP6308-500UG）室温孵育1h。共聚焦显微镜观察染色效果。  

     

FITC-UEA-I (FITC labeled Ulex Europaeus Agglutinin I) FITC标记荆豆凝集素I

图1：荧光显微镜（40×物镜）双荧光标记观察鸡EPCs对探针的吸附能力，结果显示A：相差；B：DiI-Ac-LDL阳性（红色）；C：FITC-UEA-1阳性（绿色）；D：DiI-Ac-LDL阳性+ FITC-UEA-1阳性（双阳性，黄色荧光）；E：合并图片；

文献来源：Chunyu Bai, et al. Characterization of vascular endothelial progenitor cells from chicken bone marrow. BMC Vet Res. 2012; 8: 54.

基本特性：

1. 英文同义名：UEA I Lectin (FITC); Lectin from Ulex europaeus, FITC conjugate; Fluorescein labeled Ulex Europaeus Agglutinin I; Ulex europaeus Lectin;FITC-UEA-I; FITC-UEA-1; UEA-I-FITC;

2. 分子量：~68 kDa

3. 特异性：岩藻糖血型H（抗原）

4. FITC/蛋白比率：1.0-1.4（A490/A280）

5. 外观：液体

6. 浓度：2mg/ml

7. 应用：糖生物；IF/ICC（1:50-1:200），具体浓度根据实验体系来摸索；

 

相关产品：更大包装或产品技术问题，请来电/在线咨询，电话：021-50837765 。

 货号                       产品名称                                                                 规格            价格（元）    货期         
 MP6013-500UG  Human DiI-Ac-LDL 红色荧光乙酰低密度脂蛋白  500μg （见单品）  2-3天

 

注意事项

为了您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作。

 

 

 

规格信息

品牌：

Jinpan
CAS:

N/A
规格：

500μg
货期：

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