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氨基 PEG 的酰胺偶联方案

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氨基 PEG 的酰胺偶联方案

当PH值为7-9时，不需要偶联剂，PEG胺能与NHS酯有效反应。

氨基 PEG 的酰胺偶联方案

(1)将含有小分子的胺缓慢溶解在有机溶剂中，如DMF、CH2Cl2、DMSO、THF或其他溶剂。
(2)根据反应动力学，在连续搅拌下将含NHS的化合物以1:1或2:1当量mmol添加到反应混合物中。
(3)根据底物的性质搅拌反应混合物3-24小时，并通过LC-MS或TLC板监测。
(4)最终产物可以通过常规的有机合成或柱纯化来分离。

氨基 PEG 的酰胺偶联方案

比例1:1当量
偶联剂可以是EDC、DCC、HATU。 EDC 交联在酸性 (pH 4.5) 条件下很有效。
(1)开瓶前将EDC和羧酸保持至室温。
(2) 将 100mg 每种试剂（约 100μL）溶解在所需量的可与水混溶的无水溶剂（如 DMF 或 DMSO）中，制备羧酸储备溶液。
(3)将适量的EDC和含胺分子加入适量的活化缓冲液中的羧化表面，并在室温下反应15分钟。
(4)加入DTT猝灭EDC。注意：对于易于清洁的表面，可以跳过淬火步骤，并用偶联缓冲液清洗表面，以去除任何残留的 EDC 和 NHS。
(5)将缀合物缓冲液中制备的羧酸混合物添加至活化的表面并在室温下反应2小时。
(6) 加入羟胺或另一种含胺缓冲液以猝灭反应。羟胺水解固体表面上未反应的 NHS 并形成羟基盐。其他猝灭方法包括添加三聚氰胺、赖氨酸、甘氨酸或乙醇胺；然而，这些含伯胺的化合物可以修饰羧基。 （注：新引入的羧基可以通过重复步骤4和5进一步修饰）
(7) 将偶联缓冲液中制备的所需含胺底物添加到活化的表面，并在室温下反应2小时。
(8) 按照步骤7所述猝灭反应。

氨基PEG实验方案

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氨基PEG实验方案

不需要偶联剂。当PH值为7-9时，PEG胺能与NHS酯有效反应。

氨基PEG实验方案
(1)将含有小分子的胺缓慢溶解在有机溶剂中，如DMF、CH2Cl2、DMSO、THF或其他溶剂。
(2)根据反应动力学，在连续搅拌下将含NHS的化合物以1:1或2:1当量mmol添加到反应混合物中。
(3)根据底物的性质搅拌反应混合物3-24小时，并通过LC-MS或TLC板监测。
(4)最终产物可以通过常规的有机合成或柱纯化来分离。

氨基PEG实验方案

比例1:1当量
偶联剂可以是EDC、DCC、HATU。 EDC 交联在酸性 (pH 4.5) 条件下很有效。
(1)开瓶前将EDC和羧酸保持至室温。
(2) 将 100mg 每种试剂（约 100μL）溶解在所需量的可与水混溶的无水溶剂（如 DMF 或 DMSO）中，制备羧酸储备溶液。
(3)将适量的EDC和含胺分子加入适量的活化缓冲液中的羧化表面，并在室温下反应15分钟。
(4)加入DTT猝灭EDC。注意：对于易于清洁的表面，可以跳过淬火步骤，并用偶联缓冲液清洗表面，以去除任何残留的 EDC 和 NHS。
(5)将缀合物缓冲液中制备的羧酸混合物添加至活化的表面并在室温下反应2小时。
(6) 加入羟胺或另一种含胺缓冲液以猝灭反应。羟胺水解固体表面上未反应的 NHS 并形成羟基盐。其他猝灭方法包括添加三聚氰胺、赖氨酸、甘氨酸或乙醇胺；然而，这些含伯胺的化合物可以修饰羧基。 （注：新引入的羧基可以通过重复步骤4和5进一步修饰）
(7) 将偶联缓冲液中制备的所需含胺底物添加到活化的表面，并在室温下反应2小时。
(8) 按照步骤7所述猝灭反应。

EDC HCl (1-ethyl-3-(3-dimethylaminopropyl)carbodiimide hydrochloride) 1-(3-二甲氨基丙基)-3-乙基碳二亚胺盐酸盐

发表于由

EDC HCl (1-ethyl-3-(3-dimethylaminopropyl)carbodiimide hydrochloride) 1-(3-二甲氨基丙基)-3-乙基碳二亚胺盐酸盐

货号： MP4202-100G 品牌： Jinpan 标签： 蛋白研究

描述

EDC HCl 1-(3-二甲氨基丙基)-3-乙基碳二亚胺盐酸盐

产品关键词

EDC 1-(3-二甲氨基丙基)-3-乙基碳二亚胺；EDC HCl；sulfo-NHS N-羟基硫代琥珀酰亚胺；Carboxyl activating agent 羧基活化剂；Peptide synthesis 多肽合成；CAS：25952-53-8；

产品信息

产品名称 产品编号          规格             价格（元）  
EDC HCl (1-ethyl-3-(3-dimethylaminopropyl)carbodiimide hydrochloride)    

1-(3-二甲氨基丙基)-3-乙基碳二亚胺盐酸盐

 MP4202-5G 5g 89
MP4202-25G 25g 169
MP4202-100G 100g 449

 

产品描述

1-(3-二甲氨基丙基)-3-乙基碳二亚胺盐酸盐（1-ethyl-3-(3-dimethylaminopropyl)carbodiimide hydrochloride, EDC HCl）是一种水溶性碳二亚胺衍生物，用于偶联半抗原到蛋白和多肽上。EDC HCl能用来修饰NMDA受体，以及肽合成中用作一种缩合剂。

EDC HCl是一种零长度交联剂，用来偶联羧基到伯胺上。这一交联剂应用非常广泛，比如：肽合成中形成酰胺键，连接半抗原到载体蛋白上形成免疫原，通过5’磷酸基团标记核酸，制备生物分子具胺反应指向的N-羟基琥珀酰亚胺酯（NHS Ester）。

EDC首先与羧基反应产生一个具胺反应性的O-酰基异脲中间体，如果这一中间体未碰到胺，会水解再生成羧基。当体系内含N-羟基硫代琥珀酰亚胺（sulfo-NHS），EDC能将羧基转化成具胺反应性的N-羟基硫代琥珀酰亚胺酯（sulfo-NHS ester）。这一步只需将EDC与含羧基分子混合，并加入sulfo-NHS即可完成。

产品特性

1）   CAS NO：25952-53-8

2）   英文同义名：EDC Hydrochloride; EDAC HCl; EDAC Hydrochloride; WSC HCl; N-(3-Dimethylaminopropyl)-N′-ethylcarbodiimide hydrochloride; 3-(ethyliminomethylideneamino)-N,N- dimethylpropan-1-amine hydrochloride; 1-(3-Dimethylaminopropyl)-3-ethylcarbodiimide hydrochloride;

3）   中文同义名：EDC盐酸盐；EDAC 盐酸盐；WSC 盐酸盐；1-乙基-3-(3-二甲基氨基丙基)碳酰二亚胺盐酸盐；N-乙基-N′-(3-二甲基氨丙基)碳二亚胺盐酸盐；

4）   分子式：C8H17N3·HCl

5）   分子量：191.7 g/mol

6）   纯度：≥98%

7）   外观：白色至灰白色粉末

8）   溶解性：溶于水

9）   化学结构式：EDC HCl (1-ethyl-3-(3-dimethylaminopropyl)carbodiimide hydrochloride) 1-(3-二甲氨基丙基)-3-乙基碳二亚胺盐酸盐

保存与运输方法

保存：-20℃干燥保存，至少2年有效。

运输：冰袋运输。

注意事项

为了您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作。

操作步骤【仅做参考】

一、  用EDC将半抗原偶联到载体蛋白上

1.1   所需材料

载体蛋白：2mg 牛血清白蛋白（BSA）、卵清白蛋白（OVA）或钥孔血蓝蛋白（KLH）

共轭缓冲液：0.1M MES，pH 4.5~5

EDC：10mg

半抗原：1~2mg

离心脱盐柱或其他具5~6k截留分子量的凝胶过滤柱

1.2   偶联步骤

1）   将EDC平衡至室温；

2）   加入2mg BSA、OVA或KLH到200μl共轭缓冲液；

3）   在500μl共轭缓冲液中溶解高达2mg的肽或半抗原，并将其加入200μl载体蛋白溶液中。

4）   对于BSA或OVA偶联，将10mg EDC溶于1ml超纯水中，并且立即加100μl该溶液到载体蛋白-多肽溶液。对于KLH偶联，将10mg EDC溶于1ml超纯水中，并且立即加50μl该溶液到载体蛋白-多肽溶液。如果出现沉淀，之后减少EDC用量。

5）   室温反应2h。

6）   使用脱盐柱纯化偶联物。如果需将免疫原储存数日，需过滤除菌，并在4℃或-20℃下保存于无菌管内。

二、  用EDC和NHS（或Sulfo-NHS）两步法偶联蛋白

【注意】以下步骤引用自Grabarek and Gergely，能够顺序偶联两个蛋白，并且不会影响第二个蛋白的羧基。此步骤需含巯基化合物淬灭第一个反应。

【注意】EDC与Sulfo-NHS的活化反应在pH 4.5~7.2最有效。然而，NHS活化或Sulfo-NHS活化分子与伯胺的反应在pH 7~8最有效。为了得到最佳结果，第一步反应在pH 5~6的MES缓冲液（或其他非胺非羧酸盐缓冲液）内进行，之后用磷酸盐缓冲液（或其他非胺缓冲液）提高pH到7.2~7.5，立即进行与伯胺分子的反应。为了淬灭第一步反应，使用2-ME或通过脱盐柱进行缓冲液交换，可以简单的除去过量试剂。

2.1   所需材料

活化缓冲液：0.1M MES，0.5M NaCl，pH 6.0

偶联缓冲液：磷酸盐（PBS），100mM 磷酸钠，150mM NaCl，pH 7.2

蛋白1：制备于活化缓冲液（1mg/ml）

蛋白2：制备于偶联缓冲液

NHS或Sulfo-NHS

2-ME

【可选】脱盐柱或其他凝胶柱

羟胺盐酸

2.2   偶联步骤

1）   开瓶前将EDC和NHS平衡至室温。

2）   向1 ml蛋白1溶液中加入0.4 mg EDC（~2 mM）和0.6 mg NHS或1.1 mg Sulfo-NHS（~5 mM），室温下反应15min。

3）   加入1.4 μl 2-ME（终浓度为20 mM）以淬灭EDC。

4）   【可选】：使用已经用偶联缓冲液（PBS）平衡的脱盐柱将蛋白质与过量的还原剂和灭活的交联剂分开。

5）   将蛋白2以与蛋白质1等摩尔比加入活化的蛋白中。室温反应2h。

6）   为了淬灭反应，加入羟胺至终浓度为10 mM。此方法水解蛋白1上未反应的NHS，生成异羟肟酸。

7）   使用脱盐柱除去过量的淬灭剂。

 

相关产品

货号 名称 规格           
MP4201-25G        Dicyclohexylcarbodiimide (DCC)二环己基碳二亚胺 25g
MP4202-5G EDC HCl (1-ethyl-3-(3-dimethylaminopropyl)carbodiimide hydrochloride)    5g
MP4203-1G EDC (1-ethyl-3-(3-dimethylaminopropyl)carbodiimide) 1g

 

 

规格信息

品牌：

Jinpan
CAS:

25952-53-8
规格：

100g
货期：

咨询客服

EDC HCl (1-ethyl-3-(3-dimethylaminopropyl)carbodiimide hydrochloride) 1-(3-二甲氨基丙基)-3-乙基碳二亚胺盐酸盐

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EDC HCl (1-ethyl-3-(3-dimethylaminopropyl)carbodiimide hydrochloride) 1-(3-二甲氨基丙基)-3-乙基碳二亚胺盐酸盐

货号： MP4202-25G 品牌： Jinpan 标签： 蛋白研究

描述

EDC HCl 1-(3-二甲氨基丙基)-3-乙基碳二亚胺盐酸盐

产品关键词

EDC 1-(3-二甲氨基丙基)-3-乙基碳二亚胺；EDC HCl；sulfo-NHS N-羟基硫代琥珀酰亚胺；Carboxyl activating agent 羧基活化剂；Peptide synthesis 多肽合成；CAS：25952-53-8；

产品信息

产品名称 产品编号          规格             价格（元）  
EDC HCl (1-ethyl-3-(3-dimethylaminopropyl)carbodiimide hydrochloride)    

1-(3-二甲氨基丙基)-3-乙基碳二亚胺盐酸盐

 MP4202-5G 5g 89
MP4202-25G 25g 169
MP4202-100G 100g 449

 

产品描述

1-(3-二甲氨基丙基)-3-乙基碳二亚胺盐酸盐（1-ethyl-3-(3-dimethylaminopropyl)carbodiimide hydrochloride, EDC HCl）是一种水溶性碳二亚胺衍生物，用于偶联半抗原到蛋白和多肽上。EDC HCl能用来修饰NMDA受体，以及肽合成中用作一种缩合剂。

EDC HCl是一种零长度交联剂，用来偶联羧基到伯胺上。这一交联剂应用非常广泛，比如：肽合成中形成酰胺键，连接半抗原到载体蛋白上形成免疫原，通过5’磷酸基团标记核酸，制备生物分子具胺反应指向的N-羟基琥珀酰亚胺酯（NHS Ester）。

EDC首先与羧基反应产生一个具胺反应性的O-酰基异脲中间体，如果这一中间体未碰到胺，会水解再生成羧基。当体系内含N-羟基硫代琥珀酰亚胺（sulfo-NHS），EDC能将羧基转化成具胺反应性的N-羟基硫代琥珀酰亚胺酯（sulfo-NHS ester）。这一步只需将EDC与含羧基分子混合，并加入sulfo-NHS即可完成。

产品特性

1）   CAS NO：25952-53-8

2）   英文同义名：EDC Hydrochloride; EDAC HCl; EDAC Hydrochloride; WSC HCl; N-(3-Dimethylaminopropyl)-N′-ethylcarbodiimide hydrochloride; 3-(ethyliminomethylideneamino)-N,N- dimethylpropan-1-amine hydrochloride; 1-(3-Dimethylaminopropyl)-3-ethylcarbodiimide hydrochloride;

3）   中文同义名：EDC盐酸盐；EDAC 盐酸盐；WSC 盐酸盐；1-乙基-3-(3-二甲基氨基丙基)碳酰二亚胺盐酸盐；N-乙基-N′-(3-二甲基氨丙基)碳二亚胺盐酸盐；

4）   分子式：C8H17N3·HCl

5）   分子量：191.7 g/mol

6）   纯度：≥98%

7）   外观：白色至灰白色粉末

8）   溶解性：溶于水

9）   化学结构式：EDC HCl (1-ethyl-3-(3-dimethylaminopropyl)carbodiimide hydrochloride) 1-(3-二甲氨基丙基)-3-乙基碳二亚胺盐酸盐

保存与运输方法

保存：-20℃干燥保存，至少2年有效。

运输：冰袋运输。

注意事项

为了您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作。

操作步骤【仅做参考】

一、  用EDC将半抗原偶联到载体蛋白上

1.1   所需材料

载体蛋白：2mg 牛血清白蛋白（BSA）、卵清白蛋白（OVA）或钥孔血蓝蛋白（KLH）

共轭缓冲液：0.1M MES，pH 4.5~5

EDC：10mg

半抗原：1~2mg

离心脱盐柱或其他具5~6k截留分子量的凝胶过滤柱

1.2   偶联步骤

1）   将EDC平衡至室温；

2）   加入2mg BSA、OVA或KLH到200μl共轭缓冲液；

3）   在500μl共轭缓冲液中溶解高达2mg的肽或半抗原，并将其加入200μl载体蛋白溶液中。

4）   对于BSA或OVA偶联，将10mg EDC溶于1ml超纯水中，并且立即加100μl该溶液到载体蛋白-多肽溶液。对于KLH偶联，将10mg EDC溶于1ml超纯水中，并且立即加50μl该溶液到载体蛋白-多肽溶液。如果出现沉淀，之后减少EDC用量。

5）   室温反应2h。

6）   使用脱盐柱纯化偶联物。如果需将免疫原储存数日，需过滤除菌，并在4℃或-20℃下保存于无菌管内。

二、  用EDC和NHS（或Sulfo-NHS）两步法偶联蛋白

【注意】以下步骤引用自Grabarek and Gergely，能够顺序偶联两个蛋白，并且不会影响第二个蛋白的羧基。此步骤需含巯基化合物淬灭第一个反应。

【注意】EDC与Sulfo-NHS的活化反应在pH 4.5~7.2最有效。然而，NHS活化或Sulfo-NHS活化分子与伯胺的反应在pH 7~8最有效。为了得到最佳结果，第一步反应在pH 5~6的MES缓冲液（或其他非胺非羧酸盐缓冲液）内进行，之后用磷酸盐缓冲液（或其他非胺缓冲液）提高pH到7.2~7.5，立即进行与伯胺分子的反应。为了淬灭第一步反应，使用2-ME或通过脱盐柱进行缓冲液交换，可以简单的除去过量试剂。

2.1   所需材料

活化缓冲液：0.1M MES，0.5M NaCl，pH 6.0

偶联缓冲液：磷酸盐（PBS），100mM 磷酸钠，150mM NaCl，pH 7.2

蛋白1：制备于活化缓冲液（1mg/ml）

蛋白2：制备于偶联缓冲液

NHS或Sulfo-NHS

2-ME

【可选】脱盐柱或其他凝胶柱

羟胺盐酸

2.2   偶联步骤

1）   开瓶前将EDC和NHS平衡至室温。

2）   向1 ml蛋白1溶液中加入0.4 mg EDC（~2 mM）和0.6 mg NHS或1.1 mg Sulfo-NHS（~5 mM），室温下反应15min。

3）   加入1.4 μl 2-ME（终浓度为20 mM）以淬灭EDC。

4）   【可选】：使用已经用偶联缓冲液（PBS）平衡的脱盐柱将蛋白质与过量的还原剂和灭活的交联剂分开。

5）   将蛋白2以与蛋白质1等摩尔比加入活化的蛋白中。室温反应2h。

6）   为了淬灭反应，加入羟胺至终浓度为10 mM。此方法水解蛋白1上未反应的NHS，生成异羟肟酸。

7）   使用脱盐柱除去过量的淬灭剂。

 

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MP4202-5G EDC HCl (1-ethyl-3-(3-dimethylaminopropyl)carbodiimide hydrochloride)    5g
MP4203-1G EDC (1-ethyl-3-(3-dimethylaminopropyl)carbodiimide) 1g

 

 

规格信息

品牌：

Jinpan
CAS:

25952-53-8
规格：

25g
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EDC HCl (1-ethyl-3-(3-dimethylaminopropyl)carbodiimide hydrochloride) 1-(3-二甲氨基丙基)-3-乙基碳二亚胺盐酸盐

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EDC HCl (1-ethyl-3-(3-dimethylaminopropyl)carbodiimide hydrochloride) 1-(3-二甲氨基丙基)-3-乙基碳二亚胺盐酸盐

货号： MP4202-5G 品牌： Jinpan 标签： 蛋白研究

描述

EDC HCl 1-(3-二甲氨基丙基)-3-乙基碳二亚胺盐酸盐

产品关键词

EDC 1-(3-二甲氨基丙基)-3-乙基碳二亚胺；EDC HCl；sulfo-NHS N-羟基硫代琥珀酰亚胺；Carboxyl activating agent 羧基活化剂；Peptide synthesis 多肽合成；CAS：25952-53-8；

产品信息

产品名称 产品编号          规格             价格（元）  
EDC HCl (1-ethyl-3-(3-dimethylaminopropyl)carbodiimide hydrochloride)    

1-(3-二甲氨基丙基)-3-乙基碳二亚胺盐酸盐

 MP4202-5G 5g 89
MP4202-25G 25g 169
MP4202-100G 100g 449

 

产品描述

1-(3-二甲氨基丙基)-3-乙基碳二亚胺盐酸盐（1-ethyl-3-(3-dimethylaminopropyl)carbodiimide hydrochloride, EDC HCl）是一种水溶性碳二亚胺衍生物，用于偶联半抗原到蛋白和多肽上。EDC HCl能用来修饰NMDA受体，以及肽合成中用作一种缩合剂。

EDC HCl是一种零长度交联剂，用来偶联羧基到伯胺上。这一交联剂应用非常广泛，比如：肽合成中形成酰胺键，连接半抗原到载体蛋白上形成免疫原，通过5’磷酸基团标记核酸，制备生物分子具胺反应指向的N-羟基琥珀酰亚胺酯（NHS Ester）。

EDC首先与羧基反应产生一个具胺反应性的O-酰基异脲中间体，如果这一中间体未碰到胺，会水解再生成羧基。当体系内含N-羟基硫代琥珀酰亚胺（sulfo-NHS），EDC能将羧基转化成具胺反应性的N-羟基硫代琥珀酰亚胺酯（sulfo-NHS ester）。这一步只需将EDC与含羧基分子混合，并加入sulfo-NHS即可完成。

产品特性

1）   CAS NO：25952-53-8

2）   英文同义名：EDC Hydrochloride; EDAC HCl; EDAC Hydrochloride; WSC HCl; N-(3-Dimethylaminopropyl)-N′-ethylcarbodiimide hydrochloride; 3-(ethyliminomethylideneamino)-N,N- dimethylpropan-1-amine hydrochloride; 1-(3-Dimethylaminopropyl)-3-ethylcarbodiimide hydrochloride;

3）   中文同义名：EDC盐酸盐；EDAC 盐酸盐；WSC 盐酸盐；1-乙基-3-(3-二甲基氨基丙基)碳酰二亚胺盐酸盐；N-乙基-N′-(3-二甲基氨丙基)碳二亚胺盐酸盐；

4）   分子式：C8H17N3·HCl

5）   分子量：191.7 g/mol

6）   纯度：≥98%

7）   外观：白色至灰白色粉末

8）   溶解性：溶于水

9）   化学结构式：EDC HCl (1-ethyl-3-(3-dimethylaminopropyl)carbodiimide hydrochloride) 1-(3-二甲氨基丙基)-3-乙基碳二亚胺盐酸盐

保存与运输方法

保存：-20℃干燥保存，至少2年有效。

运输：冰袋运输。

注意事项

为了您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作。

操作步骤【仅做参考】

一、  用EDC将半抗原偶联到载体蛋白上

1.1   所需材料

载体蛋白：2mg 牛血清白蛋白（BSA）、卵清白蛋白（OVA）或钥孔血蓝蛋白（KLH）

共轭缓冲液：0.1M MES，pH 4.5~5

EDC：10mg

半抗原：1~2mg

离心脱盐柱或其他具5~6k截留分子量的凝胶过滤柱

1.2   偶联步骤

1）   将EDC平衡至室温；

2）   加入2mg BSA、OVA或KLH到200μl共轭缓冲液；

3）   在500μl共轭缓冲液中溶解高达2mg的肽或半抗原，并将其加入200μl载体蛋白溶液中。

4）   对于BSA或OVA偶联，将10mg EDC溶于1ml超纯水中，并且立即加100μl该溶液到载体蛋白-多肽溶液。对于KLH偶联，将10mg EDC溶于1ml超纯水中，并且立即加50μl该溶液到载体蛋白-多肽溶液。如果出现沉淀，之后减少EDC用量。

5）   室温反应2h。

6）   使用脱盐柱纯化偶联物。如果需将免疫原储存数日，需过滤除菌，并在4℃或-20℃下保存于无菌管内。

二、  用EDC和NHS（或Sulfo-NHS）两步法偶联蛋白

【注意】以下步骤引用自Grabarek and Gergely，能够顺序偶联两个蛋白，并且不会影响第二个蛋白的羧基。此步骤需含巯基化合物淬灭第一个反应。

【注意】EDC与Sulfo-NHS的活化反应在pH 4.5~7.2最有效。然而，NHS活化或Sulfo-NHS活化分子与伯胺的反应在pH 7~8最有效。为了得到最佳结果，第一步反应在pH 5~6的MES缓冲液（或其他非胺非羧酸盐缓冲液）内进行，之后用磷酸盐缓冲液（或其他非胺缓冲液）提高pH到7.2~7.5，立即进行与伯胺分子的反应。为了淬灭第一步反应，使用2-ME或通过脱盐柱进行缓冲液交换，可以简单的除去过量试剂。

2.1   所需材料

活化缓冲液：0.1M MES，0.5M NaCl，pH 6.0

偶联缓冲液：磷酸盐（PBS），100mM 磷酸钠，150mM NaCl，pH 7.2

蛋白1：制备于活化缓冲液（1mg/ml）

蛋白2：制备于偶联缓冲液

NHS或Sulfo-NHS

2-ME

【可选】脱盐柱或其他凝胶柱

羟胺盐酸

2.2   偶联步骤

1）   开瓶前将EDC和NHS平衡至室温。

2）   向1 ml蛋白1溶液中加入0.4 mg EDC（~2 mM）和0.6 mg NHS或1.1 mg Sulfo-NHS（~5 mM），室温下反应15min。

3）   加入1.4 μl 2-ME（终浓度为20 mM）以淬灭EDC。

4）   【可选】：使用已经用偶联缓冲液（PBS）平衡的脱盐柱将蛋白质与过量的还原剂和灭活的交联剂分开。

5）   将蛋白2以与蛋白质1等摩尔比加入活化的蛋白中。室温反应2h。

6）   为了淬灭反应，加入羟胺至终浓度为10 mM。此方法水解蛋白1上未反应的NHS，生成异羟肟酸。

7）   使用脱盐柱除去过量的淬灭剂。

 

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MP4203-1G EDC (1-ethyl-3-(3-dimethylaminopropyl)carbodiimide) 1g

 

 

规格信息

品牌：

Jinpan
CAS:

25952-53-8
规格：

5g
货期：

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