Filipin Complex 菲律宾菌素复合物 货号： JP5214A-1MG 品牌： Jinpan 标签： 细胞生物学研究

描述

Filipin Complex 菲律宾菌素复合物

产品关键词

Filipin Complex 菲律宾菌素复合物；Filipin III 菲律宾菌素 III；Cholesterol probe 胆固醇荧光探针；U 18666A；polyene antibiotic 多烯抗生素；CAS NO：11078-21-0；

产品信息

产品描述

菲律宾菌素复合物（Filipin Complex）最早是分离自菲律宾链霉菌（S. filipinensis）培养物的一种多烯大环内酯类抗生素和抗真菌药物，具8种异构体成分，其中菲律宾菌素 III（Filipin III）为主要组分。菲律宾菌素复合物（135 µg/ml）抑制酿酒酵母的细胞生长和线粒体末端电子传递。水溶新溶液和真菌细胞膜上，菲律宾菌素复合物（50 µg/ml）与各种固醇结合，特别是24α-甲基胆固醇、24α-乙基胆固醇和胆固醇，诱导纹孔膜生成和细胞内含物泄露。菲律宾菌素复合物是荧光化合物，能标记生物结构的固醇用于成像分析，最大激发和发射波长分别是338和480nm。

产品特征

1）   CAS NO.：11078-21-0

2）   同义名：U-5956

3）   分子式：C35H58O11(for Filipin III)

4）   分子量：654.8

5）   纯度：≥70%（JP5214A）；≥95%（JP5214B）；

6）   外观：固体

7）   溶解性：溶于DJPO、DMF、乙醇、甲醇

8）   化学结构式：

保存与运输方法

保存：-20℃避光干燥保存，至少2年有效。

运输：室温运输。

注意事项

1）  关于化合物溶解性：产品特性内的“≥”表明溶于标示浓度，但饱和溶解度未知。不同批次化合物溶解度会有差异。

2）  为了让化合物更好的溶解，可通过37℃加热或（和）超声波水浴中震动片刻来处理。若实验所需浓度过大甚至达产品溶解极限，请添加助溶剂助溶或自行调整浓度。

3）  菲律宾菌素复合物与胆固醇的相互作用会改变吸收和荧光光谱，为此，在做荧光显微镜成像分析时，使用340-380nm作为激发波长，385-470nm作为发射波长。

4）  菲律宾菌素复合物的结合破坏脂质双分子层结构，因此，不适合用于活细胞染色。

5）  菲律宾菌素复合物的荧光染色漂白非常迅速，因此，染色后样本务必尽快分析。

6）  菲律宾菌素复合物溶液对光和空气都非常敏感。条件允许的话，配置好的溶液分装冻存，且充入惰性气体，-80℃分装冻存，避免反复冻融。

7）  为了您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作。

操作流程

以下是针对细胞样本的染色方法，仅作参考。用户需根据实际染色样本和染色条件来优化。

1、  储存液的制备

将低温保存的固体平衡至室温至少20min，低速离心后，于无菌工作台内加入适量有机溶剂（比如：无水高质量DJPO）配置成10mg/ml的储存液。

2、工作液的制备

于正式实验前，用PBS、HBSS或其他生理缓冲液稀释储存液，到所需的工作浓度，比如：10-100μg/ml。最佳的工作浓度请参阅文献或自行设置梯度浓度进行摸索。工作液必须现配现用。

2、  染色步骤（室温进行）

应用示例（来自文献，仅做参考）

1）   用Filipin 进行细胞染色，步骤如下：j用DJPO溶解Filipin制备25mg/ml储存液，分装成小份，置于-20℃密封保存后置于干燥盒内。每次小样使用后即丢弃，不可再次冻存。k用生理盐清洗细胞，用1.5%多聚甲醛固定细胞；l用生理盐再次清洗；m用生理盐稀释Filipin制备成50μg/ml Filipin，室温孵育45min；n用生理盐清洗细胞3次；o用360/40nm激发和480/40nm发射滤片并带365nm二色向长带通滤片进行成像分析（其他相似的UV滤片也可以）。【文献来源：PMCID: PMC3626500；PMID: 22325611；】

2）   用Filipin染色检测胆固醇再分布和外流。精子悬液离心后去除培养液，之后立即用溶于PBS的4%多聚甲醛固定30min。清洗2次后，用稀释于PBS的Filipin重悬（工作浓度：83μg/ml），室温标记1h，轻轻震荡，且避光。清洗细胞去除多余Filipin，之后重悬于含0.05% NaN3的PBS中用于短期保存。样本保存在4℃（＜1周），用于后续的成像分析或流式评估。流式分析，用UV激发器（355nm）和550/40nm宽带通滤片来检测荧光；成像分析，染色后的精子置于盖玻片上，风干后，用Prolong Diamond抗荧光封片剂减缓荧光漂白，之后用安装有UV滤片组（360/20nm宽带通激发滤片，400nm二向色镜和425nm长带通发射滤片）的荧光显微镜观察。【文献来源：PMCID: PMC6614389；PMID: 31285440；】

PPredominant patterns of fluorescent filipin-cholesterol labelling and the frequency of each of these patterns observed on fixed boar spermatozoa following incubation in capacitating and non-capacitating conditions for 2 h. (A) Uniform filipin labelling was observed across the entire sperm head in non-capacitating cells (1). In capacitating cells, filipin-cholesterol complexes concentrate in the apical and pre-equatorial region of the sperm head (indicated by bracket; 2). As in (2) but there were filipin-cholesterol complexes residing in the post-equatorial region of the sperm head (post-equatorial region indicated by an arrow; 3). Cells that exhibited a loss of filipin-cholesterol complexes were identified by the lower fluorescence when compared to non-responsive cells or those with cholesterol redistribution (indicated by arrows; 4). Scale bar = 10 µm.

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