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diagnocine MCDB 153 MediumHM-AT135

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diagnocine MCDB 153 Medium

简要描述：diagnocine MCDB 153 Medium ：MCDB 培养基是为培养特定细胞类型而开发的，无需血清补充剂。

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应用领域 医疗卫生,化工,生物产业,制药,综合

diagnocine  MCDB 153 Medium

MCDB 153 培养基
，含微量元素、L-谷氨酰胺和 28mM HEPES 缓冲液，
不含碳酸氢钠
粉末

产品代码：HM-AT135


产品描述：

MCDB 培养基是为培养特定细胞类型而开发的，无需血清补充剂。每种 MCDB 培养基都针对特定的细胞类型进行配制。MCDB 105 和 110 被配制用于人类二倍体细胞的快速克隆生长正常。MCDB 131 培养基最初是为人类微血管内皮细胞 (HMVEC) 的克隆生长而开发的。MCDB 151、201 和 302 最初是为人类角质形成细胞、鸡胚成纤维细胞和 CHO 细胞的克隆生长而开发的。

AT135 是含有微量元素、L-谷氨酰胺和 28mM HEPES 缓冲液的 MCDB 153。HEPES 是一种两性离子缓冲液，在 37ºC 时的 pKa 为 7.3，可防止在培养开始时倾向于发生的初始 pH 升高，并增加培养基的缓冲能力。建议用户查阅文献以获取有关针对不同细胞系特定的培养基补充和生理生长要求的建议。

方向：

  1. 将 17.7gms 悬浮在 900ml 组织培养级水中，持续温和搅拌直至粉末*溶解。不要加热水。

  2. 在 1 升培养基中加入 1.176 克碳酸氢钠粉末 (TC230) 或 15.7 毫升 7.5% 碳酸氢钠溶液 (TCL013)，搅拌至溶解。

  3. 使用 1N HCl 或 1N NaOH 将 pH 值调整到低于所需 pH 值的 0.2 – 0.3 pH 单位，因为在过滤过程中 pH 值会升高。

  4. 用组织培养级水定容至1000ml。

  5. 通过孔隙率为 0.22 微米或更小的无菌膜过滤器过滤，立即对培养基进行消毒，使用正压而不是真空，以尽量减少二氧化碳的损失。

  6. 根据需要在无菌条件下添加无菌补充剂，并将所需数量的无菌培养基分配到无菌容器中。

  7. 将液体培养基储存在 2-8°C 和避光处直至使用。


需要但未提供的材料：

  • 组织培养级水（TCL010）

  • 碳酸氢钠粉（TC230）

  • 碳酸氢钠溶液，7.5% (TCL013)

  • 1N 盐酸 (TCL003)

  • 1N 氢氧化钠 (TCL002)

  • 胎牛血清 (RM1112/RM10432)


质量控制：

  • 外观：灰白色至乳白色均匀粉末。

  • 溶解度：14.9 gms/L 的澄清溶液。

  • 不含碳酸氢钠的 pH 值：5.10 – 5.70

  • 碳酸氢钠的 pH 值：6.40 – 7.00

  • 不含碳酸氢钠的渗透压: 300.00 – 340.00

  • 碳酸氢钠渗透压：320.00 – 360.00

  • 培养反应：通过分析细胞的形态来定性评估培养基的生长促进能力，并通过估计细胞计数并通过至少三个传代培养将其与对照培养基进行比较来定量评估培养基的生长促进能力。

  • 内毒素含量：NMT 5EU/ml


储存和保质期：

  1. 所有粉状培养基和制备好的液体培养基应储存在 2-8°C。在有效期内使用。尽管有上述推荐的储存条件，某些粉末介质在某些情况下可能会出现一些变质/降解的迹象。这可以通过颜色变化、外观变化和颗粒物质的存在以及溶解后的混浊度来表示。

  2. 不推荐制备浓缩培养基，因为游离碱氨基酸和溶解度低的盐复合物可能在浓缩培养基中沉淀。

  3. 制备培养基的 pH 值和碳酸氢钠浓度是影响细胞生长的关键因素。这也受所用培养基量和培养容器体积（表面积与体积比）的影响。例如，在大瓶中，如 Roux 瓶，随着大量二氧化碳的释放，pH 值会明显升高。因此，必须为每种细胞类型确定 pH、碳酸氢钠浓度、表面积与体积比的最佳条件。我们建议严格监测 pH 值。如果需要，可以使用无菌 1N HCl 或 1N NaOH 或通过在二氧化碳中鼓泡来调节 pH 值。

  4. 如果需要，可以在过滤灭菌之前或之后将补充剂添加到培养基中，并遵守无菌预防措施。培养基的保质期取决于添加到培养基中的补充剂的性质。

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diagnocine  MCDB 153 Medium

diagnocine：DIG Labeled Blue Color Marker for SmallFNK-DM270

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diagnocine：DIG Labeled Blue Color Marker for Small

简要描述：DIG 标记的小 RNA 蓝色标记：diagnocine：DIG Labeled Blue Color Marker for Small RNA

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品牌 其他品牌 货号 FNK-DM270
供货周期 一个月 应用领域 医疗卫生,环保,化工,生物产业,制药

diagnocine：DIG Labeled Blue Color Marker for Small RNA

DynaMarker DIG 标记的小 RNA 蓝色标记物由彩色（蓝色）和 DIG 标记的 6 个单链核酸组成，其表观分子量为 RNA 的 100、75、50、40、30 和 20 个碱基。该标记物适用于监测变性聚丙烯酰胺凝胶电泳和抗 DIG 抗体的免疫检测

diagnocine：DIG Labeled Blue Color Marker for SmallFNK-DM270

图 1. DynaMarker DIG 标记的小 RNA 蓝色标记物 (5 μl) 在 15 % 聚丙烯酰胺 – 7.5 M 尿素凝胶/1 × TBE 缓冲液作为运行缓冲液上的电泳图谱。


DynaMarker DIG 标记的小 RNA 蓝色标记物中条带的表观大小与未染色 RNA 的大小非常一致，长度为 100、75、50、40、30 和 20 个碱基（准确度约为 95%，参见表 1） ）。用于小 RNA 的 DynaMarker DIG 标记蓝色标记物以即用型混合物形式提供，使用前不需要加热或添加变性剂。

diagnocine：DIG Labeled Blue Color Marker for SmallFNK-DM270

表 1.显示了与 DynaMarker® Small RNA II 相比的表观分子量，以及适用于 DynaMarker DIG 标记的小 RNA 蓝色标记物电泳的丙烯酰胺浓度。 （* 75 碱基 RNA 来自新合成的 RNA。75 碱基 RNA 不包含在 DynaMarker® Small RNA II 中。）

存储缓冲区 

2 mM Tris-HCl (pH8.0)、8mM EDTA、78% 甲酰胺

质量控制 

将 DynaMarker DIG 标记的小 RNA 蓝色标记物在 37 °C 下孵育 24 小时后，在 15% 聚丙烯酰胺 – 7.5 M 尿素凝胶电泳中未观察到标记物明显降解。 

建议上样量 5 – 10 µl

电泳条件

确保在 10 – 15% 丙烯酰胺-尿素/1 × TBE 凝胶和 1 × TBE 作为运行缓冲液上使用此标记物。在其他条件下，条带无法正确分离。

笔记

为了准确地电泳测定分子量，
应使用 DynaMarker® Small RNA II（代码# DM192）或 DynaMarker® Small RNA II Easy Load（代码# DM197）。

灵敏度

该标记物适用于化学发光（例如CDP-star ®  * 1）免疫分析。灵敏度取决于高速即时胶片（例如FP-3000B* 2  ）、X光胶片或成像仪器的曝光时间长度。下图显示了一个示例。

diagnocine：DIG Labeled Blue Color Marker for SmallFNK-DM270

图 2. DynaMarker DIG 标记的小 RNA 和 hsa-miR-21 蓝色标记的检测。将 5 μl DynaMarker DIG 标记的小 RNA 蓝色标记和 5 μg MCF-7 总 RNA 印迹到尼龙膜上，并将 hsa-miR-21 与 DIG 标记的 DNA 探针 (2.5 nM) 杂交。使用抗 DIG-AP 抗体和 CDP-star® 检测该标记物和 has-miR-21。

*1：CDP-star® 是 Tropix, Inc. 的商标。
*2：FP-3000B 是 Fujifilm Corp. 的产品。

推荐用法 

DynaMarker DIG 标记的小 RNA 蓝色标记物适用于监测变性丙烯酰胺凝胶电泳和膜上的印迹。一个例子如下所示：

  • DynaMarker DIG 标记的小 RNA 蓝色标记物的电泳和印迹

1) 15%聚丙烯酰胺-7.5M尿素凝胶的制备

40 % 丙烯酰胺：双溶液 7.5 ml
尿素 9.0 g
10 × TBE 2.0 ml                                 
H2O 至 20 ml

尿素全溶解后，加入 20 μl TEMED 和 100 μl 10% 过硫酸铵。快速混合，然后将凝胶倒入立式凝胶装置的模具中。

2)上样和电泳。
使用前将 DynaMarker DIG 标记的小 RNA 蓝色标记物全解冻。将变性的 RNA 样品和 5 μl DynaMarker DIG 标记的小 RNA 蓝色标记物装入孔中，并使用 1 × TBE 电泳缓冲液在 200 V 下运行凝胶。 3

)转移 DynaMarker DIG 标记的小 RNA 蓝色标记物和 RNA从凝胶到膜（图 3）。

3-1)切一块比凝胶稍大的带正电的尼龙膜。将膜和四张适当尺寸的吸墨纸浸泡在 1 × TBE 缓冲液中。
3-2)将两张吸墨纸放在转移池的阳极平台上。
3-3)将膜放在吸墨纸上。
3-4)将凝胶从玻璃板转移到膜的顶部并压出任何气泡。 （*确保膜和凝胶之间没有气泡。）
3-5)将另外两张吸墨纸放在凝胶上，然后设置阴极组件。
3-6)以 2 mA/cm2 传输 30 – 60 分钟。
3-7)确保标记物成功转移到膜上后，除去纸
和凝胶。用 2 × SSC 冲洗膜。
3-8)用UV交联剂将RNA固定在膜上。
3-9)进行Northern杂交(图4)。

diagnocine：DIG Labeled Blue Color Marker for SmallFNK-DM270

图 3.
左： (1) 5 µl DynaMarker DIG 标记的小 RNA 蓝色标记物、(2) 5 µg 人乳腺总 RNA 和 (3) 5 µg 乳腺腺癌 (MCF-7) 总 RNA 的电泳图谱12.5 % 聚丙烯酰胺 – 7.5 M 尿素凝胶/1× TBE 缓冲液作为运行缓冲液。
右： 将 (1) – (3) 印迹到尼龙膜上。

diagnocine：DIG Labeled Blue Color Marker for SmallFNK-DM270

图 4. hsa-miR-21 和 hsa-miR-16 的检测 DIG 标记的 DNA 探针与印有乳腺总 RNA 和 MCF-7 总 RNA 的尼龙膜杂交，并用抗 DIG-AP 抗体检测探针和化学发光AP底物。


上海金畔生物科技有限公司

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