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BL21(DE3) Electrocompetent cell 大肠杆菌电转感受态细胞

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BL21(DE3) Electrocompetent cell 大肠杆菌电转感受态细胞

货号： MF2391-0250UL 品牌： Jinpan 标签： 分子生物学

描述

BL21(DE3) Electrocompetent Cell 大肠杆菌电转感受态细胞

 

产品订购：更大包装或产品技术问题，请来电/在线咨询，电话：021-50837765 。

货号 产品名称 规格           价格（元）   
MF2391-0250UL    BL21(DE3) ElectrocompetentCell 大肠杆菌电转感受态细胞    5×50μl 1800
MF2391-1000UL BL21(DE3) ElectrocompetentCell 大肠杆菌电转感受态细胞 20×50μl 5760

 

产品组分：

组分编号         组分名称

货号（规格）
MF2391-0500UL     MF2391-2500UL    
MF2391-A BL21(DE3) ElectrocompetentCell          5×50μl 20×50μl
MF2391-B pUC19 Control Vector (10pg/μl) 10μl 10μl

 

菌株描述

BL21(DE3)菌株来源于大肠杆菌B/r菌株，特别构建适用于重组蛋白的高水平表达。BL21(DE3)菌株缺乏lon和ompT蛋白酶，从而改进重组蛋白的稳定性。DE3命名表明该菌株染色体上整合λ噬菌体DE3溶原体（其上携带lacUV5启动子调控的T7 RNA聚合酶基因），IPTG能诱导T7 RNA聚合酶的表达。BL21 (DE3)特别适合于噬菌体T7启动子为基础的表达系统（比如，pRSET，pCR T7和pET）。

BL21 (DE3)菌株基因型：F-ompThsdSB(rB-mB-)galdcm(DE3)

 

产品描述

我司（金畔生物）提供的BL21(DE3)电转感受态细胞经特殊工艺制作，适用于各种多肽、蛋白表达文库的构建，经pUC19质粒检测转化效率>1010cfu/μg DNA。

 

保存与运输条件：

保存：-80℃保存，6个月有效。

运输：干冰运输。

 

注意事项

1）   感受态细胞应保存在-80℃，不可反复冻融和放置时间过长，以免降低感受态细胞的转化效率。

2）   整个转化操作，严格根据相应温度及无菌条件要求进行。

3）   加入DNA的体积不应大于感受态体积的1/10。质粒不纯或存在乙醇等有机物污染，会导致转化效率急剧下降。质粒增大一倍，转化效率下降一个数量级。若转化大质粒或想得到较高转化效率，推荐使用高纯质粒抽提试剂盒提取质粒。

4）   为确保最高转化效率，整个操作过程应尽量轻柔，并保持低温。

5）   转化高浓度的质粒可相应减少最终涂板用量。

6）   对于连接产物的转化，大部分公司的连接体系或重组体系（比如，Thermo或NEB公司的T4连接酶体系，NEB公司的重组系统）不用纯化，能直接与BL21(DE3)电转感受态细胞混合后进行转化，需控制DNA浓度≤100ng/μl，体积≤5μl/50μl感受态细胞。过高浓度连接产物或过大体积连接产物都会降低转化效率，增加弧光放电的风险。

7）   电击杯里的离子会增加溶液的电导，增大在含细胞和DNA溶液中产生电流和弧光放电的风险。

8）   为了您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作。

使用方法

1)        将0.1 cm电击杯和杯盖从储存液中拿出倒置于干净吸水纸上5min，待其沥干水分，正置5min，使乙醇充分挥发干净，立即插入冰中，压实冰面，电极杯顶离冰面0.5cm以方便盖上杯盖，冰中静置5min使其充分降温。

2)        取-80℃保存的感受态细胞插入冰中5min，待其完全融化。

3)        往50μl感受态细胞悬液中加入目的DNA（质粒或连接产物），用手拨打管底使其混匀，避免产生气泡，立即插入冰中。

【注意】：要测定转化效率，请使用1μl pUC19 Control Vector (10pg/μl)。

【注意】：对于连接产物，大部分公司的T4连接酶体系或50℃重组体系不用纯化，可直接与BL21(DE3)电转感受态细胞混合后进行电击转化，需控制DNA浓度≤100ng/μl，体积≤5μl/50μl感受态细胞。

【注意】：对盐浓度较高的DNA溶液或反应体系需用乙醇沉淀DNA后加入适量TE缓冲液重悬，然后与电击感受态细胞混合进行电击转化。

4)        用枪轻轻吹打混匀感受态细胞-DNA之后快速转移到电击杯中，避免产生气泡，盖上杯盖。

5)        启动电转仪，设置参数：C=25 μF，PC=200 Ω，V=1.8 kV（此参数参考Bio-rad，具体使用请参考电转仪推荐参数来操作），将电击杯快速放入电转槽中，电击完成快速插入冰中。

6)        2min后从冰中取出电击杯，放在室温，加入700 μl无抗生素的SOC培养基（室温），用枪吹吸电击杯底部数次混匀后，转移到50ml离心管，向离心管内补加的SOC培养基定容至10ml。于37℃，225rpm振荡复苏培养1h。

【注意】：SOC培养基配方:2% Tryptone, 0.5% Yeast Extract, 10 mM NaCl, 2.5 mM KCl, 10 mM MgCl2,10 mM MgSO4, 20mM glucose。SOC培养基营养丰富，主要用于大肠杆菌感受态细胞转化的复苏步骤，能最大化感受态细胞的转化效率。

7)        5,000rpm离心1min，重悬后取100~200μl加到含相应抗生素的SOC平板上（因菌量较大，若全部涂板请选用直径150mm培养皿2~5个），用无菌玻棒轻轻的将细胞均匀涂开。室温正置10 min，待液体被吸收后，倒置平板，37℃过夜培养13~17h。

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规格信息

品牌：

Jinpan
CAS:

N/A
规格：

5×50μl
货期：

咨询客服

OrigamiB(DE3) Chemically Competent Cell 大肠杆菌化学感受态细胞

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OrigamiB(DE3) Chemically Competent Cell 大肠杆菌化学感受态细胞

货号： MF2346-5000UL 品牌： Jinpan 标签： 分子生物学, 感受态细胞

描述

OrigamiB(DE3) Chemically Competent Cell

大肠杆菌化学感受态细胞

 

产品订购：更大包装或产品技术问题，请来电/在线咨询，电话：021-50837765 。

  货号                           产品名称   规格                 价格（元）             
  MF2346-1000UL                    OrigamiB(DE3) Chemically Competent Cell化学感受态细胞        10×100μl   396
  MF2346-5000UL   OrigamiB(DE3) Chemically Competent Cell化学感受态细胞     50×100μl   1696

【好消息】：见我司的感受态细胞促销活动。买感受态细胞得京东卡，发表使用评论，赢红包，双重惊喜，行动起来啦。

产品组分：

   组分编号                  

组分名

                                  货号（规格）
MF2346-1000UL                       MF2346-5000UL                    
   MF2346-A OrigamiB(DE3) Competent Cell                   10×100μl 50×100μl
   MF2346-B Control Vector puC19,10pg/μl 10μl 10μl

菌株描述

OrigamiB菌株与原始菌Origami一样，包含突变的硫氧还蛋白还原酶（Thioredoxin Reductase, trxB）和谷胱甘肽还原酶（glutathione reductase,gor），表达主要还原途径的两个关键酶，有利于形成正确折叠的含二硫键的蛋白，增强蛋白的可溶性。该菌株包含BL21的lon和ompT缺失，能提高蛋白稳定性。

DE3命名表明该菌株染色体上整合λ噬菌体DE3溶原体（携带lacUV5启动子调控的T7 RNA聚合酶基因）。这种菌株适用于目的基因克隆在pET载体上的蛋白生产，由IPTG诱导表达。

OrigamiB(DE3)菌株具有卡那霉素和四环素抗性，因此不适合与仅能用卡那霉素或四环素筛选的质粒联用。

OrigamiB(DE3)菌株基因型：F- ompT hsdSB(rB- mB-) gal dcm lacY1 ahpC (DE3) gor522:: Tn10 trxB (KanR, TetR)

产品描述

本品是大肠杆菌OrigamiB(DE3)菌株经特殊工艺制作所得的感受态细胞，可用于DNA的热击转化。经pUC19质粒检测转化效率可达108 cfu/μg DNA。且在-80℃能稳定保存几个月转化效率不发生改变。

 

保存与运输条件：

保存：-80℃保存，6个月有效。

运输：干冰运输。

 

注意事项

  1. 感受态细胞必须用干冰运输。感受态细胞应在-80℃保存，不可反复冻融且放置时间过长，否则会减低感受态细胞的转化效率。
  2. 最好在冰上融化感受态细胞。
  3. 进行转化操作时，需在相应温度及无菌条件下进行。
  4. 为防止转化实验不成功，可保留部分连接反应液以重新转化，将损失降到最低。
  5. 产品包装内含质粒pUC19 DNA(10pg/μl)，供对照实验用。
  6. OrigamiB(DE3)菌株具有卡那霉素和四环素抗性，不能用于具此抗性质粒的表达。
  7. 诱导时，IPTG浓度范围可选：0.1~2mM。
  8. 为了得到足量的蛋白，需就最佳诱导时间、温度、IPTG浓度进行优化。
  9. 为了您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作。

 

使用方法【所有操作均在无菌条件的标准下进行】

  1. 从-80℃冰箱取出取感受态细胞，迅速置于冰浴中，5min后待菌块融化，加入目的DNA，用手轻弹管底轻轻混匀，冰浴静置25min。
  2. 42℃水浴热激45s，迅速将离心管转移到冰浴中，冰上静置2min。此过程不要摇动离心管。
  3. 向每个离心管中加700 μl无菌的LB培养基（不含抗生素），混匀后置于37℃摇床，200 rpm振荡培养60min，目的使质粒上相关的抗性标记基因表达，使菌体复苏。
  4. 低速离心收菌（比如5000rpm，1min），留取100μl左右上清，用枪轻轻吹打重悬菌块，之后加到所选质粒筛选抗生素的LB固体琼脂培养基上，用无菌的涂布棒将细胞均匀涂开，将平板置于室温（或37℃）直至液体被吸收，倒置培养，37℃培养过夜。【注意】：

    a）涂布用量可根据具体实验调整。若转化的DNA总量较多，可不用离心，直接取少量转化产物涂布平板；反之，若转化的DNA总量较少，则通过离心（4,000 rpm，2min）后吸除部分培养液，悬浮菌体后将其涂布于一个平板中。

    b）新制备的固体培养基不易涂干，可将平板正置于37℃直至液体被吸收后再倒置培养。

    c）涂布剩余的菌液可置于4℃保存，如果次日的转化菌落数过少，可以将剩下的菌液再涂布新培养基进行培养。

 

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JP0019-10G Kanamycin Sulfate硫酸卡那霉素 10g
MF2002-1G IPTG异丙基-β-D-硫代半乳糖苷 1g

 

附录I 蛋白诱导步骤（仅作参考）

1）从新鲜涂布平板上挑取一单克隆，转移到含相应抗生素的3ml LB液体培养基内。

2）37℃，200rpm摇菌培养过液。

3）将步骤2）中过夜培养的菌液吸取0.5ml接种到含相应抗生素的50ml LB液体培养基内（建议使用500ml三角瓶培养）。

4）37℃，150rpm摇菌培养直至OD600达到0.6~0.8（建议0.6，约2.5h）。

5）【可选】用移液枪吸取1ml培养物到干净的离心管内，置于冰上直至用于凝胶分析或保存在-20℃。这是非诱导的对照样本。

5）加入IPTG使其终浓度为1mM。目的蛋白的最佳诱导时间可能在2~16h，依蛋白而异。

6）37℃，120rpm培养2~4h。为了确定目的蛋白的最佳诱导时间，建议作一个时间周期优化实验，范围从2~16h。

7）将培养物冰浴10min。4℃，5,000 x g离心10min收集菌株。

8）吸掉上清，将沉淀保存在-20℃（也能保存在更低的温度）。

IPTG母液（1M）配制

称量2.38g IPTG（Mw: 238.30）溶于适量去离子水，充分溶解后，调整终体积到10ml，并过滤除菌，即得到1M ITPG母液。

 

 

规格信息

品牌：

Jinpan
CAS:

N/A
规格：

50×100μl
货期：

咨询客服

OrigamiB(DE3) Chemically Competent Cell 大肠杆菌化学感受态细胞

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OrigamiB(DE3) Chemically Competent Cell 大肠杆菌化学感受态细胞

货号： MF2346-1000UL 品牌： Jinpan 标签： 分子生物学

描述

OrigamiB(DE3) Chemically Competent Cell

大肠杆菌化学感受态细胞

 

产品订购：更大包装或产品技术问题，请来电/在线咨询，电话：021-50837765 。

  货号                           产品名称   规格                 价格（元）             
  MF2346-1000UL                    OrigamiB(DE3) Chemically Competent Cell化学感受态细胞        10×100μl   396
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【好消息】：见我司的感受态细胞促销活动。买感受态细胞得京东卡，发表使用评论，赢红包，双重惊喜，行动起来啦。

产品组分：

   组分编号                  

组分名

                                  货号（规格）
MF2346-1000UL                       MF2346-5000UL                    
   MF2346-A OrigamiB(DE3) Competent Cell                   10×100μl 50×100μl
   MF2346-B Control Vector puC19,10pg/μl 10μl 10μl

菌株描述

OrigamiB菌株与原始菌Origami一样，包含突变的硫氧还蛋白还原酶（Thioredoxin Reductase, trxB）和谷胱甘肽还原酶（glutathione reductase,gor），表达主要还原途径的两个关键酶，有利于形成正确折叠的含二硫键的蛋白，增强蛋白的可溶性。该菌株包含BL21的lon和ompT缺失，能提高蛋白稳定性。

DE3命名表明该菌株染色体上整合λ噬菌体DE3溶原体（携带lacUV5启动子调控的T7 RNA聚合酶基因）。这种菌株适用于目的基因克隆在pET载体上的蛋白生产，由IPTG诱导表达。

OrigamiB(DE3)菌株具有卡那霉素和四环素抗性，因此不适合与仅能用卡那霉素或四环素筛选的质粒联用。

OrigamiB(DE3)菌株基因型：F- ompT hsdSB(rB- mB-) gal dcm lacY1 ahpC (DE3) gor522:: Tn10 trxB (KanR, TetR)

产品描述

本品是大肠杆菌OrigamiB(DE3)菌株经特殊工艺制作所得的感受态细胞，可用于DNA的热击转化。经pUC19质粒检测转化效率可达108 cfu/μg DNA。且在-80℃能稳定保存几个月转化效率不发生改变。

 

保存与运输条件：

保存：-80℃保存，6个月有效。

运输：干冰运输。

 

注意事项

  1. 感受态细胞必须用干冰运输。感受态细胞应在-80℃保存，不可反复冻融且放置时间过长，否则会减低感受态细胞的转化效率。
  2. 最好在冰上融化感受态细胞。
  3. 进行转化操作时，需在相应温度及无菌条件下进行。
  4. 为防止转化实验不成功，可保留部分连接反应液以重新转化，将损失降到最低。
  5. 产品包装内含质粒pUC19 DNA(10pg/μl)，供对照实验用。
  6. OrigamiB(DE3)菌株具有卡那霉素和四环素抗性，不能用于具此抗性质粒的表达。
  7. 诱导时，IPTG浓度范围可选：0.1~2mM。
  8. 为了得到足量的蛋白，需就最佳诱导时间、温度、IPTG浓度进行优化。
  9. 为了您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作。

 

使用方法【所有操作均在无菌条件的标准下进行】

  1. 从-80℃冰箱取出取感受态细胞，迅速置于冰浴中，5min后待菌块融化，加入目的DNA，用手轻弹管底轻轻混匀，冰浴静置25min。
  2. 42℃水浴热激45s，迅速将离心管转移到冰浴中，冰上静置2min。此过程不要摇动离心管。
  3. 向每个离心管中加700 μl无菌的LB培养基（不含抗生素），混匀后置于37℃摇床，200 rpm振荡培养60min，目的使质粒上相关的抗性标记基因表达，使菌体复苏。
  4. 低速离心收菌（比如5000rpm，1min），留取100μl左右上清，用枪轻轻吹打重悬菌块，之后加到所选质粒筛选抗生素的LB固体琼脂培养基上，用无菌的涂布棒将细胞均匀涂开，将平板置于室温（或37℃）直至液体被吸收，倒置培养，37℃培养过夜。

    【注意】：

    a）涂布用量可根据具体实验调整。若转化的DNA总量较多，可不用离心，直接取少量转化产物涂布平板；反之，若转化的DNA总量较少，则通过离心（4,000 rpm，2min）后吸除部分培养液，悬浮菌体后将其涂布于一个平板中。

    b）新制备的固体培养基不易涂干，可将平板正置于37℃直至液体被吸收后再倒置培养。

    c）涂布剩余的菌液可置于4℃保存，如果次日的转化菌落数过少，可以将剩下的菌液再涂布新培养基进行培养。

 

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附录I 蛋白诱导步骤（仅作参考）

1）从新鲜涂布平板上挑取一单克隆，转移到含相应抗生素的3ml LB液体培养基内。

2）37℃，200rpm摇菌培养过液。

3）将步骤2）中过夜培养的菌液吸取0.5ml接种到含相应抗生素的50ml LB液体培养基内（建议使用500ml三角瓶培养）。

4）37℃，150rpm摇菌培养直至OD600达到0.6~0.8（建议0.6，约2.5h）。

5）【可选】用移液枪吸取1ml培养物到干净的离心管内，置于冰上直至用于凝胶分析或保存在-20℃。这是非诱导的对照样本。

5）加入IPTG使其终浓度为1mM。目的蛋白的最佳诱导时间可能在2~16h，依蛋白而异。

6）37℃，120rpm培养2~4h。为了确定目的蛋白的最佳诱导时间，建议作一个时间周期优化实验，范围从2~16h。

7）将培养物冰浴10min。4℃，5,000 x g离心10min收集菌株。

8）吸掉上清，将沉淀保存在-20℃（也能保存在更低的温度）。

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规格：

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