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Y187 Chemically Competent Cell 酵母菌化学感受态细胞

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Y187 Chemically Competent Cell 酵母菌化学感受态细胞

货号： MF2354-1000UL 品牌： Jinpan 标签： 分子生物学

描述

Y187 Chemically Competent Cell 酵母菌化学感受态细胞

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见我司（金畔生物）整理的酵母双杂交（Yeast two-hybrid assay）产品专题。

产品标签

Matchmarker GAL4双杂交系统；Y2HGold；pGBKT7；Y187；pGADT7；AUR1-C；Aureobasidin A（AbA）；金担子素；

产品信息

    产品名称 产品编号 规格 价格（元）  
    Y187 Chemically Competent Cell  酵母菌化学感受态细胞  MF2354-1000UL    10×100μl       290
MF2354-5000UL 50×100μl 1320

产品包装

    组分编号         

 组分名称

保存           

货号（规格）
MF2354-1000UL    MF2354-5000UL
    MF2354-A     Y187 Competent Cell     – 80℃ 10×100μl 50×100μl
    MF2354-B     pGADT7 Control Vector (10ng/μl)             -80℃ 10μl   10μl  
    MF2354-C     Carrier DNA (5μg/μl)     -20℃ 100μl  500μl 
MF2354-D PEG/LiAC Solution +4℃ 5ml

25ml

保存与运输方法

保存：其中感受态细胞按标签注明置于-80℃保存，三个月有效。其他组分按照标签注明保存，一年有效。

运输：干冰运输。

产品描述

酵母双杂交系统是用于体内研究蛋白相互作用的一种非常便利的工具，常用的如GAL4为基础的双杂交系统，使用酵母转录因子GAL4来检测转录激活后的蛋白相互作用。工作原理为：一个完整的酵母转录因子GAL4由两个可以分开，功能上相互独立的结构域组成，N端有一个147个氨基酸组成的DNA结合域（DNA- BD），C端有一个由113个氨基酸组成的转录激活域（AD）。DB可以识别并结合上游激活序列（UAS），而AD能激活UAS下游基因进行转录，单独的BD或AD不能激活基因转录。正常情况，BD和AD不会结合，将待检测的蛋白质分别与BD和AD融合，形成诱饵融合蛋白（bait-DNA）和诱捕融合蛋白（prey-DNA），只有当诱饵和诱捕蛋白发生相互作用，促使BD和AD的相互接近，形成完整的GAL4，从而激活报告基因的转录。

Y187是GAL4系统酵母单杂交/双杂交用实验菌株，MATα型，能直接转化质粒或与MATa型酵母菌株（如Y2HGold，AH109等）通过接合（mating）操作进行蛋白相互作用验证或双杂交文库筛选和构建。Y187-GAL4酵母双杂交系统需要两种质粒配套使用，分别为pGBKT7和pGADT7。前者筛选标志为Trp1，用于表达DNA-BD与诱饵蛋白（bait）的融合蛋白；后者筛选标志为Leu，用于表达AD与诱捕蛋白（prey）的融合蛋白。Y187有两个报告基因：lacZ，MEL1，分别由两种完全异源的Gal4反应启动元件-G1，M1操控，这两种启动子只有GAL4识别的17bp核心区相同，其余部分都不同，因此大大降低了酵母双杂交假阳性发生的概率。

本品为经特殊工艺制备的Y187酵母菌化学感受态细胞，用pGADT7质粒检测转化效率＞104cfu/μg DNA。且在-80℃能稳定保存三个月。

基因型

MATα, ura3-52, his3-200, ade 2-101, trp 1-901, leu 2-3, 112, gal4Δ, met-, gal80Δ, URA3:: GAL1UAS-Gal1TATA– lacZ, MEL1

注意事项

1. 最好在冰上融化感受态细胞。

2. 转化高浓度质粒可相应减少用于涂板的菌量。同时转化2-3种质粒可适当增加质粒的用量。

3. Y187对高温敏感，最适生长温度为27-30℃，一旦高于31℃，生长速度和转化率都呈指数下降。

4. 菌落变粉红色并不是污染，而是酵母细胞生长中的一种常见现象。当酵母细胞在平板上培养几天，将平板内的腺嘌呤消耗殆尽，那时酵母试图通过自身代谢途径合成腺嘌呤以供利用。然而，某些菌株ADE2基因被破坏，腺嘌呤合成受阻。且ADE4，5，6，7基因均正常。由此，造成中间产物P-ribosylamino imidazole（AIR）在细胞的积累使得菌落变为粉红色。

5. 酵母菌在缺陷培养基上生长速度比YPDA培养基慢，营养缺陷成分越多，生长越慢，以转化涂板为例：涂YPDA平板于29℃，48h培养可见直径1mm克隆；涂SD单缺平板于29℃，48-60h培养可见直径1mm克隆；涂SD双缺平板于29℃，60-80h培养可见直径1mm克隆；涂SD三缺或四缺平板于29℃，80-90h培养可见直径1mm克隆；

6. 为了您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作。

使用方法

1. 取100 µl冰上融化的Y187化学感受态细胞，依次加入预冷的目的质粒2-5 µg，Carrier DNA（95-100℃孵育5 min，快速冰浴。重复一次。）10 µl，PEG/LiAc 500µl，用枪吹打几次充分混匀，30℃水浴30 min（在15min时翻转6-8次混匀）。

2. 之后将管子放42℃水浴15 min（在7.5min时翻转6-8次混匀）。

3. 5000 rpm离心40s弃上清，用400 µl ddH2O重悬沉淀，离心30s弃上清。

4. 用50 µl ddH2O重悬，涂板，放入29℃培养48-96 h。

相关产品

货号 名称 规格
MF2351-300UL              Y2HGold Yeast Strain酵母双杂交用甘油菌 300μl
MF2352-1000UL Y2HGold Chemically Competent Cell 酵母菌化学感受态细胞         10×100μl      
MF2353-300UL Y187 Yeast Strain 酵母双杂交用甘油菌 300μl
MF2354-1000UL Y187 Chemically Competent Cell 酵母菌化学感受态细胞 10×100μl
MF2501-200T Yeast Transformation Kit酵母转化试剂盒 200T

 

 

 

规格信息

品牌：

Jinpan
CAS:

N/A
规格：

10×100μl
货期：

咨询客服

Y2HGold Chemically Competent Cell 酵母菌化学感受态细胞

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Y2HGold Chemically Competent Cell 酵母菌化学感受态细胞

货号： MF2352-5000UL 品牌： Jinpan 标签： 分子生物学

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Y2HGold Chemically Competent Cell 酵母菌化学感受态细胞

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Matchmarker GAL4双杂交系统；Y2HGold；pGBKT7；Y187；pGADT7；AUR1-C；Aureobasidin A（AbA）；金担子素；

产品信息

产品名称 产品编号 规格 价格（元）      
Y2HGold Chemically Competent Cell 酵母菌化学感受态细胞 MF2352-1000UL          10×100μl           290
MF2352-5000UL 50×100μl 1320

产品包装

组分编号           组分名 保存                 

货号（规格）
MF2352-1000UL       MF2352-5000UL      
MF2352-A Y2HGold Competent Cell -80℃ 10×100μl 50×100μl
MF2352-B pGADT7 Control Vector (10ng/μl)          -80℃ 10μl   10μl  
MF2352-C Carrier DNA (5μg/μl) -20℃ 100μl  500μl 
MF2352-D PEG/LiAC Solution +4℃ 5ml 25ml

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保存：其中感受态细胞按标签注明置于-80℃保存，三个月有效。其他组分按照标签注明保存，一年有效。

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产品描述

酵母双杂交系统是用于体内研究蛋白相互作用的一种非常便利的工具，常用的如GAL4为基础的双杂交系统，使用酵母转录因子GAL4来检测转录激活后的蛋白相互作用。工作原理为：一个完整的酵母转录因子GAL4由两个可以分开，功能上相互独立的结构域组成，N端有一个147个氨基酸组成的DNA结合域（DNA- BD），C端有一个由113个氨基酸组成的转录激活域（AD）。DB可以识别并结合上游激活序列（UAS），而AD能激活UAS下游基因进行转录，单独的BD或AD不能激活基因转录。正常情况，BD和AD不会结合，将待检测的蛋白质分别与BD和AD融合，形成诱饵融合蛋白（bait-DNA）和诱捕融合蛋白（prey-DNA），只有当诱饵和诱捕蛋白发生相互作用，促使BD和AD的相互接近，形成完整的GAL4，从而激活报告基因的转录。

Y2HGold是GAL4系统酵母双杂交用实验菌株，能直接转化质粒或与MATα型酵母菌株Y187通过接合（mating）操作进行蛋白相互作用验证或双杂交文库筛选和构建。Y2HGold-GAL4酵母双杂交系统需要两种质粒配套使用，分别为pGBKT7和pGADT7。前者筛选标志为Trp1，用于表达DNA-BD与诱饵蛋白（bait）的融合蛋白；后者筛选标志为Leu，用于表达AD与诱捕蛋白（prey）的融合蛋白。Y2HGold有四个报告基因：AUR1-C，HIS3, ADE2, MEL1，分别由三个完全异源的Gal4反应启动元件-G1，G2，M1操控，这三种启动子只有GAL4识别的17bp核心区相同，其余部分都不同，因此大大降低了酵母双杂交假阳性发生的概率。此外，新报告基因AUR1-C与以往的营养缺陷报告基因相比，具有更低背景，这一优势也可降低酵母双杂交假阳性发生的概率。

本品为经特殊工艺制备的Y2HGold酵母菌化学感受态细胞，用pGADT7质粒检测转化效率＞104cfu/μg DNA。且在-80℃能稳定保存三个月。

基因型

MATa, trp1-901, leu2-3, 112, ura3-52, his3-200, gal4Δ, gal80Δ, LYS2::GAL1UAS-Gal1TATA-His3, GAL2UAS-Gal2TATA-Ade2 URA3::MEL1UAS-Mel1TATAAUR1-C MEL1

注意事项

1. 最好在冰上融化感受态细胞。

2. 转化高浓度质粒可相应减少用于涂板的菌量。同时转化2-3种质粒可适当增加质粒的用量。

3. Y2HGold对高温敏感，最适生长温度为27-30℃，一旦高于31℃，生长速度和转化率都呈指数下降。

4. 菌落变粉红色并不是污染，而是酵母细胞生长中的一种常见现象。当酵母细胞在平板上培养几天，将平板内的腺嘌呤消耗殆尽，那时酵母试图通过自身代谢途径合成腺嘌呤以供利用。然而，某些菌株ADE2基因被破坏，腺嘌呤合成受阻。且ADE4，5，6，7基因均正常。由此，造成中间产物P-ribosylamino imidazole（AIR）在细胞的积累使得菌落变为粉红色。

5. 酵母菌在缺陷培养基上生长速度比YPDA培养基慢，营养缺陷成分越多，生长越慢，以转化涂板为例：涂YPDA平板于29℃，48h培养可见直径1mm克隆；涂SD单缺平板于29℃，48-60h培养可见直径1mm克隆；涂SD双缺平板于29℃，60-80h培养可见直径1mm克隆；涂SD三缺或四缺平板于29℃，80-90h培养可见直径1mm克隆；

6. 为了您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作。

使用方法

1. 取100 µl冰上融化的Y2HGold化学感受态细胞，依次加入预冷的目的质粒2-5 µg，Carrier DNA（95-100℃孵育5 min，快速冰浴。重复一次。）10 µl，PEG/LiAc 500µl，用枪吹打几次充分混匀，30℃水浴30 min（在15min时翻转6-8次混匀）。

2. 之后将管子放42℃水浴15 min（在7.5min时翻转6-8次混匀）。

3. 5000 rpm离心40s弃上清，用400 µl ddH2O重悬沉淀，离心30s弃上清。

4. 用50 µl ddH2O重悬，涂板，放入29℃培养48-96 h。

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货号 名称 规格
MF2351-300UL              Y2HGold Yeast Strain酵母双杂交用甘油菌 300μl
MF2352-1000UL Y2HGold Chemically Competent Cell 酵母菌化学感受态细胞         10×100μl      
MF2353-300UL Y187 Yeast Strain 酵母双杂交用甘油菌 300μl
MF2354-1000UL Y187 Chemically Competent Cell 酵母菌化学感受态细胞 10×100μl
MF2501-200T Yeast Transformation Kit酵母转化试剂盒 200T

 

 

 

 

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Jinpan
CAS:

N/A
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50×100μl
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Y2HGold Chemically Competent Cell 酵母菌化学感受态细胞

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货号： MF2352-1000UL 品牌： Jinpan 标签： 分子生物学

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Y2HGold Chemically Competent Cell 酵母菌化学感受态细胞

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Matchmarker GAL4双杂交系统；Y2HGold；pGBKT7；Y187；pGADT7；AUR1-C；Aureobasidin A（AbA）；金担子素；

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产品名称 产品编号 规格 价格（元）      
Y2HGold Chemically Competent Cell 酵母菌化学感受态细胞 MF2352-1000UL          10×100μl           290
MF2352-5000UL 50×100μl 1320

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组分编号           组分名 保存                 

货号（规格）
MF2352-1000UL       MF2352-5000UL      
MF2352-A Y2HGold Competent Cell -80℃ 10×100μl 50×100μl
MF2352-B pGADT7 Control Vector (10ng/μl)          -80℃ 10μl   10μl  
MF2352-C Carrier DNA (5μg/μl) -20℃ 100μl  500μl 
MF2352-D PEG/LiAC Solution +4℃ 5ml 25ml

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酵母双杂交系统是用于体内研究蛋白相互作用的一种非常便利的工具，常用的如GAL4为基础的双杂交系统，使用酵母转录因子GAL4来检测转录激活后的蛋白相互作用。工作原理为：一个完整的酵母转录因子GAL4由两个可以分开，功能上相互独立的结构域组成，N端有一个147个氨基酸组成的DNA结合域（DNA- BD），C端有一个由113个氨基酸组成的转录激活域（AD）。DB可以识别并结合上游激活序列（UAS），而AD能激活UAS下游基因进行转录，单独的BD或AD不能激活基因转录。正常情况，BD和AD不会结合，将待检测的蛋白质分别与BD和AD融合，形成诱饵融合蛋白（bait-DNA）和诱捕融合蛋白（prey-DNA），只有当诱饵和诱捕蛋白发生相互作用，促使BD和AD的相互接近，形成完整的GAL4，从而激活报告基因的转录。

Y2HGold是GAL4系统酵母双杂交用实验菌株，能直接转化质粒或与MATα型酵母菌株Y187通过接合（mating）操作进行蛋白相互作用验证或双杂交文库筛选和构建。Y2HGold-GAL4酵母双杂交系统需要两种质粒配套使用，分别为pGBKT7和pGADT7。前者筛选标志为Trp1，用于表达DNA-BD与诱饵蛋白（bait）的融合蛋白；后者筛选标志为Leu，用于表达AD与诱捕蛋白（prey）的融合蛋白。Y2HGold有四个报告基因：AUR1-C，HIS3, ADE2, MEL1，分别由三个完全异源的Gal4反应启动元件-G1，G2，M1操控，这三种启动子只有GAL4识别的17bp核心区相同，其余部分都不同，因此大大降低了酵母双杂交假阳性发生的概率。此外，新报告基因AUR1-C与以往的营养缺陷报告基因相比，具有更低背景，这一优势也可降低酵母双杂交假阳性发生的概率。

本品为经特殊工艺制备的Y2HGold酵母菌化学感受态细胞，用pGADT7质粒检测转化效率＞104cfu/μg DNA。且在-80℃能稳定保存三个月。

基因型

MATa, trp1-901, leu2-3, 112, ura3-52, his3-200, gal4Δ, gal80Δ, LYS2::GAL1UAS-Gal1TATA-His3, GAL2UAS-Gal2TATA-Ade2 URA3::MEL1UAS-Mel1TATAAUR1-C MEL1

注意事项

1. 最好在冰上融化感受态细胞。

2. 转化高浓度质粒可相应减少用于涂板的菌量。同时转化2-3种质粒可适当增加质粒的用量。

3. Y2HGold对高温敏感，最适生长温度为27-30℃，一旦高于31℃，生长速度和转化率都呈指数下降。

4. 菌落变粉红色并不是污染，而是酵母细胞生长中的一种常见现象。当酵母细胞在平板上培养几天，将平板内的腺嘌呤消耗殆尽，那时酵母试图通过自身代谢途径合成腺嘌呤以供利用。然而，某些菌株ADE2基因被破坏，腺嘌呤合成受阻。且ADE4，5，6，7基因均正常。由此，造成中间产物P-ribosylamino imidazole（AIR）在细胞的积累使得菌落变为粉红色。

5. 酵母菌在缺陷培养基上生长速度比YPDA培养基慢，营养缺陷成分越多，生长越慢，以转化涂板为例：涂YPDA平板于29℃，48h培养可见直径1mm克隆；涂SD单缺平板于29℃，48-60h培养可见直径1mm克隆；涂SD双缺平板于29℃，60-80h培养可见直径1mm克隆；涂SD三缺或四缺平板于29℃，80-90h培养可见直径1mm克隆；

6. 为了您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作。

使用方法

1. 取100 µl冰上融化的Y2HGold化学感受态细胞，依次加入预冷的目的质粒2-5 µg，Carrier DNA（95-100℃孵育5 min，快速冰浴。重复一次。）10 µl，PEG/LiAc 500µl，用枪吹打几次充分混匀，30℃水浴30 min（在15min时翻转6-8次混匀）。

2. 之后将管子放42℃水浴15 min（在7.5min时翻转6-8次混匀）。

3. 5000 rpm离心40s弃上清，用400 µl ddH2O重悬沉淀，离心30s弃上清。

4. 用50 µl ddH2O重悬，涂板，放入29℃培养48-96 h。

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货号 名称 规格
MF2351-300UL              Y2HGold Yeast Strain酵母双杂交用甘油菌 300μl
MF2352-1000UL Y2HGold Chemically Competent Cell 酵母菌化学感受态细胞         10×100μl      
MF2353-300UL Y187 Yeast Strain 酵母双杂交用甘油菌 300μl
MF2354-1000UL Y187 Chemically Competent Cell 酵母菌化学感受态细胞 10×100μl
MF2501-200T Yeast Transformation Kit酵母转化试剂盒 200T

 

 

 

 

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N/A
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EPI400 Chemically Competent Cell 大肠杆菌化学感受态细胞

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EPI400 Chemically Competent Cell 大肠杆菌化学感受态细胞

货号： MF2350-5000UL 品牌： Jinpan 标签： 分子生物学

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EPI400 Chemically Competent Cell  

大肠杆菌化学感受态细胞

搜索关键词：

EPI400；EC100；CopyCutter Induction Solution；toxic or unstable DNA毒性或不稳定DNA；Epicentre；

产品订购：更大包装或产品技术问题，请来电/在线咨询，电话：021-50837765 。

货号

 产品名称 规格 价格（元）
MF2350-1000UL    EPI400 Chemically Competent Cell大肠杆菌化学感受态细胞    10×100μl    396
MF2350-5000UL EPI400 Chemically Competent Cell大肠杆菌化学感受态细胞 50×100μl

1696

【好消息】：见我司的感受态细胞促销活动。买感受态细胞得京东卡，发表使用评论，赢红包，双重惊喜，行动起来啦。

​

产品组分：

组分编号 组分名 货号（规格）
MF2350-1000UL    MF2350-5000UL   
MF2350-A     EPI400Chemically Competent Cell         10×100μl 50×100μl
MF2350-B Control Vector puC19,10pg/μl 10μl 10μl

菌株描述

EPI400菌株，来源于T1抗噬菌体-EC100菌株，通过对含ColE1或pMB1复制起始点的载体（比如，pUC和pET型载体）上控制载体拷贝数的某一基因进行改造而来。EC100菌株上的组成性表达基因-pcnB（plasmidcopynumber）被删除，用连接到一诱导启动子的改良pcnB基因来替换，即得到EPI400菌株。

EPI400菌株能够明显降低各种常用载体的拷贝数，从而特别适用于各种不稳定DNA或毒性基因的克隆。另外，只需用CopyCutter诱导液（CopyCutter Induction Solution）短时孵育，又可提高拷贝数，改善质粒产量，同时不会降低稳定性。

【更多特征】：

[mcrA,Δ(mrr-hsdRJP-mcrBC)]基因型，使EPI400适合于甲基化DNA的有效克隆；

endA1的突变确保质粒克隆的高产量；recA1的突变确保大分子DNA插入的稳定性；

lacZΔM15标记的存在，使EPI400适用于蓝白斑筛选；

tonA赋予EPI400具抗噬菌体T1和T5的能力；rpsL赋予EPI400链霉素抗性。

EPI400菌株基因型：F- mcrA Δ(mrr-hsdRJP-mcrBC) Φ80dlacZΔM15 ΔlacX74 recA1 endA1 araD139 Δ(ara, leu)7697 galU galK λ- rpsL (StrR) nupG trfA tonA pcnB4 dhfr

产品描述：

本品是大肠杆菌EPI400菌株经特殊工艺制作所得的感受态细胞，可用于DNA的热击转化。经pUC19质粒检测转化效率可达5×107 cfu/μg DNA。且在-80℃能稳定保存几个月转化效率不发生改变。

 

保存与运输条件：

保存：-80℃保存，6个月有效。

运输：干冰运输。

 

注意事项

1） 感受态细胞必须用干冰运输，感受态细胞应在-80℃保存。

2） 感受态细胞最好在冰上融化，不可在冰上放置时间过长，长时间存放会降低转化效率。

3） 进行转化操作时，需在相应温度及无菌条件下进行。

4） 为防止转化实验不成功，可保留部分连接反应液以重新转化，将损失降到最低。

5） 产品包装内含质粒pUC19 DNA(10pg/μl)，供对照实验用。

6） 转化高浓度的质粒可相应减少最终用于涂板的菌量。

7） 为了您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作。

 

使用方法【所有操作均在无菌条件的标准下进行】

1） 从-80℃冰箱取出取感受态细胞，迅速置于冰浴中，5min后待菌块融化，加入目的DNA（质粒或连接产物），用手轻弹管底轻轻混匀（避免用枪吸打），冰浴静置25min。

2） 42℃水浴热激45s，迅速将离心管转移到冰浴中，冰上静置2min。此过程不要摇动离心管。

3） 向每个离心管中加700 μl无菌的LB培养基（不含抗生素），混匀后置于37℃摇床，200 rpm振荡培养60min，目的使质粒上相关的抗性标记基因表达，使菌体复苏。

4） 低速离心收菌（比如5000rpm，1min），留取100μl左右上清，用枪轻轻吹打重悬菌块，之后加到含所选质粒筛选抗生素的LB固体琼脂培养基上，用无菌的涂布棒将细胞均匀涂开，将平板置于室温（或37℃）直至液体被吸收，倒置培养，37℃培养过夜。如果进行蓝白斑筛选，37℃培养至少15h。

【注意】：

a）涂布用量可根据具体实验调整。若转化的DNA总量较多，可不用离心，直接取少量转化产物涂布平板；反之，若转化的DNA总量较少，则通过离心（5000 rpm，1min）后吸除部分培养液，悬浮菌体后将其涂布于一个平板中。

b）新制备的固体培养基不易涂干，可将平板正置于37℃直至液体被吸收后再倒置培养。

c）涂布剩余的菌液可置于4℃保存，如果次日的转化菌落数过少，可以将剩下的菌液再涂布新培养基进行培养。

 

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JP0021-10G Chloramphenicol, USP Grade氯霉素 10g
JP0019-10G Kanamycin Sulfate硫酸卡那霉素 10g

 

 

规格信息

品牌：

Jinpan
CAS:

N/A
规格：

50×100μl
货期：

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EPI400 Chemically Competent Cell 大肠杆菌化学感受态细胞

发表于由

EPI400 Chemically Competent Cell 大肠杆菌化学感受态细胞

货号： MF2350-1000UL 品牌： Jinpan 标签： 分子生物学

描述

EPI400 Chemically Competent Cell  

大肠杆菌化学感受态细胞

搜索关键词：

EPI400；EC100；CopyCutter Induction Solution；toxic or unstable DNA毒性或不稳定DNA；Epicentre；

产品订购：更大包装或产品技术问题，请来电/在线咨询，电话：021-50837765 。

货号

 产品名称 规格 价格（元）
MF2350-1000UL    EPI400 Chemically Competent Cell大肠杆菌化学感受态细胞    10×100μl    396
MF2350-5000UL EPI400 Chemically Competent Cell大肠杆菌化学感受态细胞 50×100μl

1696

【好消息】：见我司的感受态细胞促销活动。买感受态细胞得京东卡，发表使用评论，赢红包，双重惊喜，行动起来啦。

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产品组分：

组分编号 组分名 货号（规格）
MF2350-1000UL    MF2350-5000UL   
MF2350-A     EPI400Chemically Competent Cell         10×100μl 50×100μl
MF2350-B Control Vector puC19,10pg/μl 10μl 10μl

菌株描述

EPI400菌株，来源于T1抗噬菌体-EC100菌株，通过对含ColE1或pMB1复制起始点的载体（比如，pUC和pET型载体）上控制载体拷贝数的某一基因进行改造而来。EC100菌株上的组成性表达基因-pcnB（plasmidcopynumber）被删除，用连接到一诱导启动子的改良pcnB基因来替换，即得到EPI400菌株。

EPI400菌株能够明显降低各种常用载体的拷贝数，从而特别适用于各种不稳定DNA或毒性基因的克隆。另外，只需用CopyCutter诱导液（CopyCutter Induction Solution）短时孵育，又可提高拷贝数，改善质粒产量，同时不会降低稳定性。

【更多特征】：

[mcrA,Δ(mrr-hsdRJP-mcrBC)]基因型，使EPI400适合于甲基化DNA的有效克隆；

endA1的突变确保质粒克隆的高产量；recA1的突变确保大分子DNA插入的稳定性；

lacZΔM15标记的存在，使EPI400适用于蓝白斑筛选；

tonA赋予EPI400具抗噬菌体T1和T5的能力；rpsL赋予EPI400链霉素抗性。

EPI400菌株基因型：F- mcrA Δ(mrr-hsdRJP-mcrBC) Φ80dlacZΔM15 ΔlacX74 recA1 endA1 araD139 Δ(ara, leu)7697 galU galK λ- rpsL (StrR) nupG trfA tonA pcnB4 dhfr

产品描述：

本品是大肠杆菌EPI400菌株经特殊工艺制作所得的感受态细胞，可用于DNA的热击转化。经pUC19质粒检测转化效率可达5×107 cfu/μg DNA。且在-80℃能稳定保存几个月转化效率不发生改变。

保存与运输条件：

保存：-80℃保存，6个月有效。

运输：干冰运输。

注意事项

1） 感受态细胞必须用干冰运输，感受态细胞应在-80℃保存。

2） 感受态细胞最好在冰上融化，不可在冰上放置时间过长，长时间存放会降低转化效率。

3） 进行转化操作时，需在相应温度及无菌条件下进行。

4） 为防止转化实验不成功，可保留部分连接反应液以重新转化，将损失降到最低。

5） 产品包装内含质粒pUC19 DNA(10pg/μl)，供对照实验用。

6） 转化高浓度的质粒可相应减少最终用于涂板的菌量。

7） 为了您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作。

 

使用方法【所有操作均在无菌条件的标准下进行】

1） 从-80℃冰箱取出取感受态细胞，迅速置于冰浴中，5min后待菌块融化，加入目的DNA（质粒或连接产物），用手轻弹管底轻轻混匀（避免用枪吸打），冰浴静置25min。

2） 42℃水浴热激45s，迅速将离心管转移到冰浴中，冰上静置2min。此过程不要摇动离心管。

3） 向每个离心管中加700 μl无菌的LB培养基（不含抗生素），混匀后置于37℃摇床，200 rpm振荡培养60min，目的使质粒上相关的抗性标记基因表达，使菌体复苏。

4） 低速离心收菌（比如5000rpm，1min），留取100μl左右上清，用枪轻轻吹打重悬菌块，之后加到含所选质粒筛选抗生素的LB固体琼脂培养基上，用无菌的涂布棒将细胞均匀涂开，将平板置于室温（或37℃）直至液体被吸收，倒置培养，37℃培养过夜。如果进行蓝白斑筛选，37℃培养至少15h。

【注意】：

a）涂布用量可根据具体实验调整。若转化的DNA总量较多，可不用离心，直接取少量转化产物涂布平板；反之，若转化的DNA总量较少，则通过离心（5000 rpm，1min）后吸除部分培养液，悬浮菌体后将其涂布于一个平板中。

b）新制备的固体培养基不易涂干，可将平板正置于37℃直至液体被吸收后再倒置培养。

c）涂布剩余的菌液可置于4℃保存，如果次日的转化菌落数过少，可以将剩下的菌液再涂布新培养基进行培养。

 

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N/A
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