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NMY51 Chemically Competent Cell 酵母菌化学感受态细胞

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NMY51 Chemically Competent Cell 酵母菌化学感受态细胞

货号： MF2360-5000UL 品牌： Jinpan 标签： 分子生物学

描述

NMY51 Chemically Competent Cell 酵母菌化学感受态细胞

温馨提示

见我司整理的酵母双杂交（Yeast two-hybrid assay）产品专题。

产品关键词：

Y190-GAL4酵母单杂交系统；Y1HGold；pGBKT7；pGADT7；Ar Qual；X-α-Gal；Aureobasidin A （AbA）；金担子素；

 

产品订购：更大包装或产品技术问题，请来电/在线咨询，电话：021-50837765 。

货号 产品名称 规格             价格（元） 
MF2360-1000UL     NMY51 Chemically Competent Cell 酵母菌化学感受态细胞      10×100μl 290
MF2360-5000UL NMY51 Chemically Competent Cell 酵母菌化学感受态细胞 50×100μl 1320

 

产品组分：

组分编号           组分名称 保存              

货号（规格）
MF2360-1000UL    MF2360-5000UL  
MF2360-A NMY51Chemically Competent Cell     -80℃ 10×100μl 50×100μl
MF2360-B pGADT7 Control Vector (10ng/μl) -80℃ 10μl   10μl  
MF2360-C Carrier DNA (10μg/μl) -20℃ 100μl  500μl 
MF2360-D PEG/LiAC Solution +4℃ 5ml 25ml

 

产品描述

双膜系统（Dualmembrane system）是由Dualsystems Biotech公司开发的专门筛选跨膜蛋白间相互作用的筛选技术，该技术利用分离的泛素系统直接检测天然状态下膜蛋白间的相互作用，是目前为止唯一用来检测膜蛋白间相互作用的酵母双杂交系统。

双膜系统利用NMY51酵母菌，能直接转化质粒进行蛋白突变验证或筛库实验。转化标志为TRP1，leu2-3。报告基因为HIS3，ADE2和LacZ。NMY51的选择性生长筛选通过营养缺陷报告基因（HIS3，ADE2）进行，之后通过LacZ报告基因进行β-半乳糖分析的定量或半定量筛选，三个独立的报告基因由不同的启动子调控，有助于降低假阳性几率。

双膜系统的工作原理在于：泛素分子量很小，由76个氨基酸残基组成。泛素作为降解信号分子，能够连接另一个蛋白的N端，之后被泛素专一性蛋白酶（ubps）识别，导致与泛素相连蛋白被酶降解。泛素可人为分成两个部分：N端（Nub）和C端（Cub）。首先，将泛素Nub的三位异亮氨酸突变成甘氨酸（Nubi突变为NuBG），通过这种方式Cub的亲和力明显降低，避免Cub和Nub自我结合或靠近的可能性。其次，Cub与合成的LEXA-VP16转录激活因子融合成融合蛋白Cub-lexa-vp16。正常情况下，NuBG不与Cub结合，ubps也不能识别分离的泛素，转录激活因子也不会被切下来。最后，将待测蛋白分别与NuBG和Cub融合，形成bait融合蛋白（bait-cub-lexa-vp16）和prey融合蛋白（prey-NuBG）。如果bait和prey发生相互作用，促使NuBG和Cub的相互接近，从而被ubps识别，导致LEXA-VP16的解离，进入核内，进而激活报告基因的转录。该系统能使用四种Bait质粒：pBT3-N，pBT3-SUC，pBT3-STE，pBT3-C，筛选标志是Leu。三种prey质粒：pPR3-C ，pPR3-SUC，pPR3-STE，筛选标志是Trp。

本品为经特殊工艺制备的NMY51酵母菌化学感受态细胞，用pGADT7质粒检测转化效率＞104cfu/μg DNA。且在-80℃能稳定保存三个月。

基因型

MATa, his3Δ200, trp1-901, leu2-3, 112, ade2, LYS2::(lexAop)4-HIS3, ura3::(lexAop)8-lacZ, ade2::(lexAop) 8-ADE2, GAL4

保存与运输方法

保存：其中感受态细胞按标签注明置于-80℃保存，三个月有效。其他组分按照标签注明保存，一年有效。

运输：干冰运输。

 

注意事项

1）   最好在冰上融化感受态细胞。

2）   转化高浓度质粒可相应减少用于涂板的菌量。同时转化2-3种质粒可适当增加质粒的用量。

3）   NMY51对高温敏感，最适生长温度为27-30℃，一旦高于31℃，生长速度和转化率都呈指数下降。

4）   菌落变粉红色并不是污染，而是酵母细胞生长中的一种常见现象。当酵母细胞在平板上培养几天，将平板内的腺嘌呤消耗殆尽，那时酵母试图通过自身代谢途径合成腺嘌呤以供利用。然而，某些菌株ADE2基因被破坏，腺嘌呤合成受阻。且ADE4，5，6，7，8基因均正常。由此，造成中间产物P-ribosylamino imidazole（AIR）在细胞的积累使得菌落变为粉红色。

5）   酵母菌在缺陷培养基上生长速度比YPDA培养基慢，营养缺陷成分越多，生长越慢，以转化涂板为例：涂YPDA平板于29℃，48h培养可见直径1mm克隆；涂SD单缺平板于29℃，48-60h培养可见直径1mm克隆；涂SD双缺平板于29℃，60-80h培养可见直径1mm克隆；涂SD三缺或四缺平板于29℃，80-90h培养可见直径1mm克隆；

6）   为了您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作。

使用方法

1）   Carrier DNA于使用前通过加热处理使其变性为单链状态，方法如下：95-100℃ 水浴或金属浴3min，快速插入冰中，静置3min。重复一次。

2）   取100 µl冰上融化的NMY51化学感受态细胞，依次加入预冷的目的质粒2-5 µg，单链Carrier DNA 10 µl，PEG/LiAc 500µl，用枪吹打几次充分混匀，30℃水浴30 min（在15min时翻转6-8次混匀）。

3）   之后将管子放42℃水浴15 min（在7.5min时翻转6-8次混匀）。

4）   5000 rpm离心40s弃上清，用400 µl ddH2O重悬沉淀，离心30s弃上清。

5）   用50 µl ddH2O重悬，涂板，放入29℃培养48-96 h。

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货号 名称 规格               
MF2351-300UL           Y2HGold Yeast Strain酵母双杂交用甘油菌 300μl
MF2352-1000UL Y2HGold Chemically Competent Cell酵母菌化学感受态细胞       10×100μl
MF2353-300UL Y187 Yeast Strain酵母双杂交用甘油菌 300μl
MF2354-1000UL Y187 Chemically Competent Cell酵母菌化学感受态细胞 10×100μl
MF2355-300UL AH109 Yeast Strain酵母双杂交用甘油菌 300μl
MF2356-1000UL AH109 Chemically Competent Cell酵母菌化学感受态细胞 10×100μl
MF2357-300UL EGY48 Yeast Strain 酵母双杂交用甘油菌 300μl
MF2358-1000UL EGY48 Chemically Competent Cell酵母菌化学感受态细胞 10×100μl
MF2359-300UL NMY51 Yeast Strain 酵母双杂交用甘油菌 300μl
MF2360-1000UL NMY51 Chemically Competent Cell酵母菌化学感受态细胞 10×100μl
MF2363-300UL Y190 Yeast Strain酵母单杂交用甘油菌 300μl
MF2364-1000UL Y190 Chemically Competent Cell酵母菌化学感受态细胞 10×100μl
MF2501-200T Yeast Transformation Kit酵母转化试剂盒 200T

 

 

 

 

规格信息

品牌：

Jinpan
CAS:

N/A
规格：

50×100μl
货期：

咨询客服

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货号： MF2360-1000UL 品牌： Jinpan 标签： 分子生物学

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Y190-GAL4酵母单杂交系统；Y1HGold；pGBKT7；pGADT7；Ar Qual；X-α-Gal；Aureobasidin A （AbA）；金担子素；

 

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MF2360-1000UL     NMY51 Chemically Competent Cell 酵母菌化学感受态细胞      10×100μl 290
MF2360-5000UL NMY51 Chemically Competent Cell 酵母菌化学感受态细胞 50×100μl 1320

 

产品组分：

组分编号           组分名称 保存              

货号（规格）
MF2360-1000UL    MF2360-5000UL  
MF2360-A NMY51Chemically Competent Cell     -80℃ 10×100μl 50×100μl
MF2360-B pGADT7 Control Vector (10ng/μl) -80℃ 10μl   10μl  
MF2360-C Carrier DNA (10μg/μl) -20℃ 100μl  500μl 
MF2360-D PEG/LiAC Solution +4℃ 5ml 25ml

 

产品描述

双膜系统（Dualmembrane system）是由Dualsystems Biotech公司开发的专门筛选跨膜蛋白间相互作用的筛选技术，该技术利用分离的泛素系统直接检测天然状态下膜蛋白间的相互作用，是目前为止唯一用来检测膜蛋白间相互作用的酵母双杂交系统。

双膜系统利用NMY51酵母菌，能直接转化质粒进行蛋白突变验证或筛库实验。转化标志为TRP1，leu2-3。报告基因为HIS3，ADE2和LacZ。NMY51的选择性生长筛选通过营养缺陷报告基因（HIS3，ADE2）进行，之后通过LacZ报告基因进行β-半乳糖分析的定量或半定量筛选，三个独立的报告基因由不同的启动子调控，有助于降低假阳性几率。

双膜系统的工作原理在于：泛素分子量很小，由76个氨基酸残基组成。泛素作为降解信号分子，能够连接另一个蛋白的N端，之后被泛素专一性蛋白酶（ubps）识别，导致与泛素相连蛋白被酶降解。泛素可人为分成两个部分：N端（Nub）和C端（Cub）。首先，将泛素Nub的三位异亮氨酸突变成甘氨酸（Nubi突变为NuBG），通过这种方式Cub的亲和力明显降低，避免Cub和Nub自我结合或靠近的可能性。其次，Cub与合成的LEXA-VP16转录激活因子融合成融合蛋白Cub-lexa-vp16。正常情况下，NuBG不与Cub结合，ubps也不能识别分离的泛素，转录激活因子也不会被切下来。最后，将待测蛋白分别与NuBG和Cub融合，形成bait融合蛋白（bait-cub-lexa-vp16）和prey融合蛋白（prey-NuBG）。如果bait和prey发生相互作用，促使NuBG和Cub的相互接近，从而被ubps识别，导致LEXA-VP16的解离，进入核内，进而激活报告基因的转录。该系统能使用四种Bait质粒：pBT3-N，pBT3-SUC，pBT3-STE，pBT3-C，筛选标志是Leu。三种prey质粒：pPR3-C ，pPR3-SUC，pPR3-STE，筛选标志是Trp。

本品为经特殊工艺制备的NMY51酵母菌化学感受态细胞，用pGADT7质粒检测转化效率＞104cfu/μg DNA。且在-80℃能稳定保存三个月。

基因型

MATa, his3Δ200, trp1-901, leu2-3, 112, ade2, LYS2::(lexAop)4-HIS3, ura3::(lexAop)8-lacZ, ade2::(lexAop) 8-ADE2, GAL4

保存与运输方法

保存：其中感受态细胞按标签注明置于-80℃保存，三个月有效。其他组分按照标签注明保存，一年有效。

运输：干冰运输。

 

注意事项

1）   最好在冰上融化感受态细胞。

2）   转化高浓度质粒可相应减少用于涂板的菌量。同时转化2-3种质粒可适当增加质粒的用量。

3）   NMY51对高温敏感，最适生长温度为27-30℃，一旦高于31℃，生长速度和转化率都呈指数下降。

4）   菌落变粉红色并不是污染，而是酵母细胞生长中的一种常见现象。当酵母细胞在平板上培养几天，将平板内的腺嘌呤消耗殆尽，那时酵母试图通过自身代谢途径合成腺嘌呤以供利用。然而，某些菌株ADE2基因被破坏，腺嘌呤合成受阻。且ADE4，5，6，7，8基因均正常。由此，造成中间产物P-ribosylamino imidazole（AIR）在细胞的积累使得菌落变为粉红色。

5）   酵母菌在缺陷培养基上生长速度比YPDA培养基慢，营养缺陷成分越多，生长越慢，以转化涂板为例：涂YPDA平板于29℃，48h培养可见直径1mm克隆；涂SD单缺平板于29℃，48-60h培养可见直径1mm克隆；涂SD双缺平板于29℃，60-80h培养可见直径1mm克隆；涂SD三缺或四缺平板于29℃，80-90h培养可见直径1mm克隆；

6）   为了您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作。

使用方法

1）   Carrier DNA于使用前通过加热处理使其变性为单链状态，方法如下：95-100℃ 水浴或金属浴3min，快速插入冰中，静置3min。重复一次。

2）   取100 µl冰上融化的NMY51化学感受态细胞，依次加入预冷的目的质粒2-5 µg，单链Carrier DNA 10 µl，PEG/LiAc 500µl，用枪吹打几次充分混匀，30℃水浴30 min（在15min时翻转6-8次混匀）。

3）   之后将管子放42℃水浴15 min（在7.5min时翻转6-8次混匀）。

4）   5000 rpm离心40s弃上清，用400 µl ddH2O重悬沉淀，离心30s弃上清。

5）   用50 µl ddH2O重悬，涂板，放入29℃培养48-96 h。

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货号 名称 规格               
MF2351-300UL           Y2HGold Yeast Strain酵母双杂交用甘油菌 300μl
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10×100μl
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产品标签

LexA双杂交系统；EGY48；Y2HGold；pGBKT7；pLexA；Aureobasidin A （AbA）；金担子素；

产品信息

产品名称 产品编号 规格 价格（元）   
EGY48 Chemically Competent Cell 酵母菌化学感受态细胞 MF2358-1000UL    10×100μl       290
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MF2358-1000UL    MF2358-5000UL 
MF2358-A EGY48 Chemically Competent Cell          -80℃ 10×100μl 50×100μl
MF2358-B pGBKT7 Control Vector (10ng/μl) -80℃ 10μl   10μl  
MF2358-C Carrier DNA (10μg/μl) -20℃ 100μl  500μl 
MF2358-D PEG/LiAC Solution +4℃ 5ml 25ml

保存与运输方法

保存：其中感受态细胞按标签注明置于-80℃保存，三个月有效。其他组分按照标签注明保存，一年有效。

运输：干冰运输。

产品描述

酵母双杂交系统是用于体内研究蛋白相互作用的一种非常便利的工具，目前采用的有LexA系统和GAL4系统。在LexA系统中，DNA结合域（DNA- BD）由一个完整的原核蛋白LexA构成，转录激活域（AD）由一个大肠杆菌来源的含88个氨基酸残基的酸性肽B42构成），在酵母中能活化基因的转录。正常情况，BD和AD不会结合，将待检测的蛋白质分别与BD和AD融合，形成诱饵融合蛋白（bait-DNA）和诱捕融合蛋白（prey-DNA），只有当诱饵和诱捕蛋白发生相互作用，促使BD和AD的相互接近，才能激活报告基因的转录。

EGY48是LexA系统酵母双杂交用实验菌株，MATα型，能直接转化质粒进行蛋白相互作用验证或双杂交文库筛选和构建。转化标记为ura3，his3，trp1。报告基因为LEU2。EGY48-LexA酵母双杂交系统需要三种质粒配套使用，分别为pLexA、pB42AD和p8op-LacZ。质粒pLexA的筛选标志为HIS3，用于表达诱饵融合蛋白。pB42AD的筛选标志为TRP1，用于表达诱捕融合蛋白。报告质粒p8op-LacZ的筛选标志为URA3，报告基因为LacZ，报告基因UAS来源于LexA op (x6)，只有当诱饵（Bait）和诱捕（Prey）相互作用才能启动LacZ表达。

本品为经特殊工艺制备的EGY48酵母菌化学感受态细胞，用pGBKT7质粒检测转化效率＞104cfu/μg DNA。且在-80℃能稳定保存三个月。

基因型

MATα, ura3, his3, trp1, LexAop (x6)-LEU2

注意事项

1）   最好在冰上融化感受态细胞。

2）   转化高浓度质粒可相应减少用于涂板的菌量。同时转化2-3种质粒可适当增加质粒的用量。

3）   EGY48对高温敏感，最适生长温度为27-30℃，一旦高于31℃，生长速度和转化率都呈指数下降。

4）   菌落变粉红色并不是污染，而是酵母细胞生长中的一种常见现象。当酵母细胞在平板上培养几天，将平板内的腺嘌呤消耗殆尽，那时酵母试图通过自身代谢途径合成腺嘌呤以供利用。然而，某些菌株ADE2基因被破坏，腺嘌呤合成受阻。且ADE4，5，6，7，8基因均正常。由此，造成中间产物P-ribosylamino imidazole（AIR）在细胞的积累使得菌落变为粉红色。

5）   酵母菌在缺陷培养基上生长速度比YPDA培养基慢，营养缺陷成分越多，生长越慢，以转化涂板为例：涂YPDA平板于29℃，48h培养可见直径1mm克隆；涂SD单缺平板于29℃，48-60h培养可见直径1mm克隆；涂SD双缺平板于29℃，60-80h培养可见直径1mm克隆；涂SD三缺或四缺平板于29℃，80-90h培养可见直径1mm克隆；

6）   为了您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作。

使用方法

1）   取100 µl冰上融化的EGY48化学感受态细胞，依次加入预冷的目的质粒2-5 µg，Carrier DNA （95-100℃ 孵育5 min，快速冰浴。重复一次。）10 µl，PEG/LiAc 500µl，用枪吹打几次充分混匀，30℃水浴30 min（在15min时翻转6-8次混匀）。

2）   之后将管子放42℃水浴15 min（在7.5min时翻转6-8次混匀）。

3）   5000 rpm离心40s弃上清，用400 µl ddH2O重悬沉淀，离心30s弃上清。

4）   用50 µl ddH2O重悬，涂板，放入29℃培养48-96 h。

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MF2352-1000UL Y2HGold Chemically Competent Cell酵母菌化学感受态细胞            10×100μl
MF2353-300UL Y187 Yeast Strain酵母双杂交用甘油菌 300μl
MF2354-1000UL Y187 Chemically Competent Cell酵母菌化学感受态细胞 10×100μl
MF2355-300UL AH109 Yeast Strain酵母双杂交用甘油菌 300μl
MF2356-1000UL AH109 Chemically Competent Cell酵母菌化学感受态细胞 10×100μl
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MF2362-1000UL Y1HGold Chemically Competent Cell 酵母菌化学感受态细胞 10×100μl
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规格信息

品牌：

Jinpan
CAS:

N/A
规格：

50×100μl
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EGY48 Chemically Competent Cell 酵母菌化学感受态细胞

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货号： MF2358-1000UL 品牌： Jinpan 标签： 分子生物学

描述

EGY48 Chemically Competent Cell 酵母菌化学感受态细胞

 

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LexA双杂交系统；EGY48；Y2HGold；pGBKT7；pLexA；Aureobasidin A （AbA）；金担子素；

产品信息

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EGY48 Chemically Competent Cell 酵母菌化学感受态细胞 MF2358-1000UL    10×100μl       290
MF2358-5000UL 50×100μl 1320

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组分编号          组分名称 保存          

货号（规格）
MF2358-1000UL    MF2358-5000UL 
MF2358-A EGY48 Chemically Competent Cell          -80℃ 10×100μl 50×100μl
MF2358-B pGBKT7 Control Vector (10ng/μl) -80℃ 10μl   10μl  
MF2358-C Carrier DNA (10μg/μl) -20℃ 100μl  500μl 
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保存与运输方法

保存：其中感受态细胞按标签注明置于-80℃保存，三个月有效。其他组分按照标签注明保存，一年有效。

运输：干冰运输。

产品描述

酵母双杂交系统是用于体内研究蛋白相互作用的一种非常便利的工具，目前采用的有LexA系统和GAL4系统。在LexA系统中，DNA结合域（DNA- BD）由一个完整的原核蛋白LexA构成，转录激活域（AD）由一个大肠杆菌来源的含88个氨基酸残基的酸性肽B42构成），在酵母中能活化基因的转录。正常情况，BD和AD不会结合，将待检测的蛋白质分别与BD和AD融合，形成诱饵融合蛋白（bait-DNA）和诱捕融合蛋白（prey-DNA），只有当诱饵和诱捕蛋白发生相互作用，促使BD和AD的相互接近，才能激活报告基因的转录。

EGY48是LexA系统酵母双杂交用实验菌株，MATα型，能直接转化质粒进行蛋白相互作用验证或双杂交文库筛选和构建。转化标记为ura3，his3，trp1。报告基因为LEU2。EGY48-LexA酵母双杂交系统需要三种质粒配套使用，分别为pLexA、pB42AD和p8op-LacZ。质粒pLexA的筛选标志为HIS3，用于表达诱饵融合蛋白。pB42AD的筛选标志为TRP1，用于表达诱捕融合蛋白。报告质粒p8op-LacZ的筛选标志为URA3，报告基因为LacZ，报告基因UAS来源于LexA op (x6)，只有当诱饵（Bait）和诱捕（Prey）相互作用才能启动LacZ表达。

本品为经特殊工艺制备的EGY48酵母菌化学感受态细胞，用pGBKT7质粒检测转化效率＞104cfu/μg DNA。且在-80℃能稳定保存三个月。

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MATα, ura3, his3, trp1, LexAop (x6)-LEU2

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2）   转化高浓度质粒可相应减少用于涂板的菌量。同时转化2-3种质粒可适当增加质粒的用量。

3）   EGY48对高温敏感，最适生长温度为27-30℃，一旦高于31℃，生长速度和转化率都呈指数下降。

4）   菌落变粉红色并不是污染，而是酵母细胞生长中的一种常见现象。当酵母细胞在平板上培养几天，将平板内的腺嘌呤消耗殆尽，那时酵母试图通过自身代谢途径合成腺嘌呤以供利用。然而，某些菌株ADE2基因被破坏，腺嘌呤合成受阻。且ADE4，5，6，7，8基因均正常。由此，造成中间产物P-ribosylamino imidazole（AIR）在细胞的积累使得菌落变为粉红色。

5）   酵母菌在缺陷培养基上生长速度比YPDA培养基慢，营养缺陷成分越多，生长越慢，以转化涂板为例：涂YPDA平板于29℃，48h培养可见直径1mm克隆；涂SD单缺平板于29℃，48-60h培养可见直径1mm克隆；涂SD双缺平板于29℃，60-80h培养可见直径1mm克隆；涂SD三缺或四缺平板于29℃，80-90h培养可见直径1mm克隆；

6）   为了您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作。

使用方法

1）   取100 µl冰上融化的EGY48化学感受态细胞，依次加入预冷的目的质粒2-5 µg，Carrier DNA （95-100℃ 孵育5 min，快速冰浴。重复一次。）10 µl，PEG/LiAc 500µl，用枪吹打几次充分混匀，30℃水浴30 min（在15min时翻转6-8次混匀）。

2）   之后将管子放42℃水浴15 min（在7.5min时翻转6-8次混匀）。

3）   5000 rpm离心40s弃上清，用400 µl ddH2O重悬沉淀，离心30s弃上清。

4）   用50 µl ddH2O重悬，涂板，放入29℃培养48-96 h。

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规格信息

品牌：

Jinpan
CAS:

N/A
规格：

10×100μl
货期：

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AH109 Chemically Competent Cell 酵母菌化学感受态细胞

发表于由

AH109 Chemically Competent Cell 酵母菌化学感受态细胞

货号： MF2356-5000UL 品牌： Jinpan 标签： 分子生物学

描述

AH109 Chemically Competent Cell 酵母菌化学感受态细胞

温馨提示

见我司（金畔生物）整理的酵母双杂交（Yeast two-hybrid assay）产品专题。

产品标签

Matchmarker GAL4双杂交系统；Y2HGold；pGBKT7；Y187；pGADT7；AUR1-C；Aureobasidin A（AbA）；金担子素；

产品信息

产品名称 产品编号 规格             价格（元）   
AH109 Chemically Competent Cell 酵母菌化学感受态细胞    MF2356-1000UL   10×100μl    290
MF2356-5000UL 50×100μl 1320

产品包装

组分编号         组分名称 保存               

货号（规格）
MF2356-1000UL     MF2356-5000UL 
MF2356-A AH109 Chemically Competent Cell     -80℃ 10×100μl 50×100μl
MF2356-B pGADT7 Control Vector (10ng/μl) -80℃ 10μl   10μl  
MF2356-C Carrier DNA (5μg/μl) -20℃ 100μl  500μl 
MF2356-D PEG/LiAC Solution +4℃ 5ml 25ml

保存与运输方法

保存：其中感受态细胞按标签注明置于-80℃保存，三个月有效。其他组分按照标签注明保存，一年有效。

运输：干冰运输。

产品描述

酵母双杂交系统是用于体内研究蛋白相互作用的一种非常便利的工具，常用的如GAL4为基础的双杂交系统，使用酵母转录因子GAL4来检测转录激活后的蛋白相互作用。工作原理为：一个完整的酵母转录因子GAL4由两个可以分开，功能上相互独立的结构域组成，N端有一个147个氨基酸组成的DNA结合域（DNA- BD），C端有一个由113个氨基酸组成的转录激活域（AD）。DB可以识别并结合上游激活序列（UAS），而AD能激活UAS下游基因进行转录，单独的BD或AD不能激活基因转录。正常情况，BD和AD不会结合，将待检测的蛋白质分别与BD和AD融合，形成诱饵融合蛋白（bait-DNA）和诱捕融合蛋白（prey-DNA），只有当诱饵和诱捕蛋白发生相互作用，促使BD和AD的相互接近，形成完整的GAL4，从而激活报告基因的转录。

AH109是GAL4系统酵母双杂交用实验菌株，来源于PJ69-2A酵母菌株，引入lacZ报告基因从而产生AH109。AH109是MATa型，能直接转化质粒或与MATα型酵母菌株Y187通过接合（mating）操作进行蛋白相互作用验证或双杂交文库筛选和构建。AH109-GAL4酵母双杂交系统需要两种质粒配套使用，分别为pGBKT7和pGADT7。前者筛选标志为Trp，用于表达DNA-BD与诱饵蛋白（bait）的融合蛋白；后者筛选标志为Leu，用于表达AD与诱捕蛋白（prey）的融合蛋白。AH109有四个报告基因：lacZ，HIS3, ADE2, MEL1，分别由三个完全异源的Gal4反应启动元件-G1，G2，M1调控，这三种启动子只有GAL4识别的17bp核心区相同，其余部分都不同。这一特征有效缩减假阳性发生的概率。因为，任何诱捕蛋白单独结合引起假阳性都需要识别3个不同序列，激活4个报告基因表达。

本品为经特殊工艺制备的AH109酵母菌化学感受态细胞，用pGADT7质粒检测转化效率＞104cfu/μg DNA。且在-80℃能稳定保存三个月。

基因型

MATa, trp1-901, leu2-3, 112, ura3-52, his3-200, gal4Δ, gal80Δ, LYS2::GAL1UAS-Gal1TATA-His3, MEL1GAL2UAS-Gal2TATA-Ade2, URA3::MEL1UAS-MEL1TATA-lacZ

注意事项

1. 最好在冰上融化感受态细胞。

2. 转化高浓度质粒可相应减少用于涂板的菌量。同时转化2-3种质粒可适当增加质粒的用量。

3. AH109对高温敏感，最适生长温度为27-30℃，一旦高于31℃，生长速度和转化率都呈指数下降。

4. 菌落变粉红色并不是污染，而是酵母细胞生长中的一种常见现象。当酵母细胞在平板上培养几天，将平板内的腺嘌呤消耗殆尽，那时酵母试图通过自身代谢途径合成腺嘌呤以供利用。然而，某些菌株ADE2基因被破坏，腺嘌呤合成受阻。且ADE4，5，6，7，8基因均正常。由此，造成中间产物P-ribosylamino imidazole（AIR）在细胞的积累使得菌落变为粉红色。

5. 酵母菌在缺陷培养基上生长速度比YPDA培养基慢，营养缺陷成分越多，生长越慢，以转化涂板为例：涂YPDA平板于29℃，48h培养可见直径1mm克隆；涂SD单缺平板于29℃，48-60h培养可见直径1mm克隆；涂SD双缺平板于29℃，60-80h培养可见直径1mm克隆；涂SD三缺或四缺平板于29℃，80-90h培养可见直径1mm克隆；

6. 为了您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作。

使用方法

1. 取100 µl冰上融化的AH109化学感受态细胞，依次加入预冷的目的质粒2-5 µg，Carrier DNA（95-100℃孵育5 min，快速冰浴。重复一次。）10 µl，PEG/LiAc 500µl，用枪吹打几次充分混匀，30℃水浴30 min（在15min时翻转6-8次混匀）。

2. 之后将管子放42℃水浴15 min（在7.5min时翻转6-8次混匀）。

3. 5000 rpm离心40s弃上清，用400 µl ddH2O重悬沉淀，离心30s弃上清。

4. 用50 µl ddH2O重悬，涂板，放入29℃培养48-96 h。

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Jinpan
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N/A
规格：

50×100μl
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