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MSU440 Chemically Competent Cell 农杆菌化学感受态细胞

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JPU440 Chemically Competent Cell 农杆菌化学感受态细胞

货号： MF2451-1000UL 品牌： Jinpan 标签： 分子生物学

描述

JPU440 Chemically Competent Cell 农杆菌化学感受态细胞

产品标签：

JPU440；K599；Agrobacterium rhizogenes发根农杆菌；pCAMBIA2301；Streptomycin 链霉素；Rifampicin利福平；

 

产品订购：更大包装或产品技术问题，请来电/在线咨询，电话：021-50837765 。

货号 产品名称 规格 价格（元）     
MF2451-1000UL    JPU440 Chemically Competent Cell 农杆菌化学感受态细胞     10×100μl      430
MF2451-5000UL JPU440 Chemically Competent Cell 农杆菌化学感受态细胞 50×100μl 1830

【好消息】：见我司金畔生物整理的根癌（发根）农杆菌感受态细胞技术专题。

 

产品组分：

组分编号 组分名称 货号（规格）
MF2451-1000UL     MF2451-5000UL    
MF2451-A      JPU440Chemically Competent Cell 10×100μl MF2451-A
MF2451-B pCAMBIA2301 Control Vector (10ng/μl)     10μl MF2451-B

 

产品描述

发根农杆菌（Agrobacterium rhizogenes）是根瘤菌科农杆属的一种革兰氏阴性土壤细菌，能够侵染大多数双子叶植物和少数单子叶植物以及个别裸子植物。起关键作用的是其携带的Ri质粒，含有负责发根自主性生长和冠瘿碱合成的基因。结构上与Ti质粒类似，主要有致毒区（Vir），T-DNA区以及冠瘿碱合成功能区等。

根据合成冠瘿碱的不同，Ri质粒分为4种类型：1）甘露碱型；2）黄瓜碱型；3）农杆碱型；4）米奇矛型。

 

发根农杆菌菌株JPU440含天然农杆碱型Ri质粒，具有广泛的宿主范围（玉米，茶树、青蒿、烟草等），同时具有链霉素抗性。 

我司（金畔生物）提供的JPU440化学转化感受态细胞经特殊工艺制作，基因型为Agrobacterium rhizogenes (strR) JPU440 Ri (agropine type)，经pCAMBIA2301质粒（卡那霉素抗性）检测转化效率>104cfu/μg DNA。

 

保存与运输条件：

保存：-80℃保存，一年有效。

运输：干冰运输。

 

注意事项

1）   感受态细胞应保存在-80℃，不可反复冻融和放置时间过长，以免降低感受态细胞的转化效率。

2）   整个转化操作，严格根据相应温度及无菌条件要求进行。

3）   加入质粒的体积不应大于感受态体积的1/10。质粒不纯或存在乙醇等有机物污染，会导致转化效率急剧下降。质粒增大一倍，转化效率下降一个数量级。

4）   混匀质粒时应用手指快速拨打管底或用枪吹吸混匀，务必使质粒快速、均匀分散开，与感受态细胞充分接触。

5）   转化高浓度的质粒可相应减少最终涂板用量。

6）   平板上克隆密度过大时，由于营养不足，克隆生长变慢，菌落变小。为获得大菌落，应减少质粒用量或降低涂板的菌量。

7）   JPU440具有链霉素抗性，不可用于具链霉素抗性质粒的转化。

8）   为了保证最佳的转化效率，发根农杆菌的培养务必使用TY培养基（配方见附表1）。

9）   为了您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作。

使用方法

1)        取-80℃保存的感受态细胞于室温或手心片刻待其部分融化，达到冰水混合状态时插入冰浴中使其完全融化。

2)        往100μl感受态细胞悬液中加入0.01~1μg质粒DNA（转化效率较高，第一次使用前最好做预实验确定所加质粒的量），用手快速、剧烈拨打管底混匀或用枪吹吸混匀，依次放于冰中间静置5min，液氮5min，37℃水浴5min，冰浴5min。

3)        冰浴中拿出放室温，加入700μl无抗生素的TY液体培养基，于28℃振荡培养2h。

4)        6,000rpm离心1min，吸掉600ul上清，之后用枪轻轻吹打重悬菌体。之后加到含相应抗生素的TY平板上，用无菌玻棒轻轻的将细胞均匀涂开。室温正置10 min，待液体被吸收后，倒置平板，28℃培养2-3天。

附表1 固体和液体TY培养基配方

附表2 常见发根农杆菌对抗生素敏感性总表

农杆菌菌株  羧苄（carb） 链霉素（strep） 利福平（rif） 庆大霉素（gent） 卡那霉素（kan）
Ar A4 S S S S R
Ar Qual S R S R S
Ar 1193 R R R S S
K599 S R S S S
C58C1 S R R S S
JPU440 S R S S S
【备注】：S代表敏感，R代表抗性。

附表3 常见农杆菌抗生素配制方法

抗生素 配方 母液              工作液       
羧苄青霉素 去离子水溶解，0.22μm滤膜除菌 50mg/ml 50μg/ml
硫酸卡那霉素          去离子水溶解，0.22μm滤膜除菌 50mg/ml 50μg/ml
链霉素 去离子水溶解，0.22μm滤膜除菌 10mg/ml 50μg/ml
庆大霉素 去离子水溶解，0.22μm滤膜除菌 20mg/ml 40μg/ml
利福平 DJPO溶解，0.22μm有机相滤膜除菌 10mg/ml 20μg/ml
氯霉素 无水乙醇溶解，0.22μm有机相滤膜除菌           34mg/ml 34μg/ml

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货号 名称 规格             
MF2451-1000UL     JPU440 Chemically Competent Cell农杆菌化学感受态细胞     10×100μl
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MF2457-1000UL Ar A4 Chemically Competent Cell农杆菌化学感受态细胞 10×100μl
MF2459-1000UL Ar Qual Chemically Competent Cell农杆菌化学感受态细胞 10×100μl
MF2461-1000UL Ar 1193 Chemically Competent Cell农杆菌化学感受态细胞 10×100μl
JP0021-10G Chloramphenicol, USP Grade氯霉素 10g
JP0018-10G Ampicillin, Sodium Salt氨苄青霉素钠 10g
JP0017-5G Carbenicillin, Disodium Salt羧苄青霉素二钠盐 5g
JP0019-10G Kanamycin Sulfate硫酸卡那霉素 10g
JP0014-1G Rifampicin, USP Grade利福平 1g

 

 

 

 

规格信息

品牌：

Jinpan
CAS:

N/A
规格：

10×100μl
货期：

咨询客服

Y190 Chemically Competent Cell 酵母菌化学感受态细胞

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Y190 Chemically Competent Cell 酵母菌化学感受态细胞

货号： MF2364-5000UL 品牌： Jinpan 标签： 分子生物学

描述

Y190 Chemically Competent Cell 酵母菌化学感受态细胞

产品关键词：

Y190-GAL4酵母单杂交系统；Y1HGold；pGBKT7；pGADT7；Ar Qual；X-α-Gal；Aureobasidin A （AbA）；金担子素；

 

产品订购：更大包装或产品技术问题，请来电/在线咨询，电话：021-50837765 。

货号 产品名称 规格 价格（元） 
MF2364-1000UL     Y190 Chemically Competent Cell 酵母菌化学感受态细胞      10×100μl       290
MF2364-5000UL Y190 Chemically Competent Cell 酵母菌化学感受态细胞 50×100μl 1320

 

产品组分：

组分编号 组分名称 保存               货号（规格）
MF2364-1000UL       MF2364-5000UL     
MF2364-A         Y190 Chemically Competent Cell       -80℃ 10×100μl 50×100μl
MF2364-B pGADT7 Control Vector (10ng/μl) -80℃ 10μl   10μl  
MF2364-C Carrier DNA (10μg/μl) -20℃ 100μl  500μl 
MF2364-D PEG/LiAC Solution +4℃ 5ml 25ml

 

产品描述

酵母双杂交系统是用于体内研究蛋白相互作用的一种非常便利的工具，常用的如GAL4为基础的双杂交系统，使用酵母转录因子GAL4来检测转录激活后的蛋白相互作用。工作原理为：一个完整的酵母转录因子GAL4由两个可以分开，功能上相互独立的结构域组成，N端有一个147个氨基酸组成的DNA结合域（DNA- BD），C端有一个由113个氨基酸组成的转录激活域（AD）。DB可以识别并结合上游激活序列（UAS），而AD能激活UAS下游基因进行转录，单独的BD或AD不能激活基因转录。正常情况，BD和AD不会结合，将待检测的蛋白质分别与BD和AD融合，形成诱饵融合蛋白（bait-DNA）和诱捕融合蛋白（prey-DNA），只有当诱饵和诱捕蛋白发生相互作用，促使BD和AD的相互接近，形成完整的GAL4，从而激活报告基因的转录。

Y190是GAL4系统酵母双杂交用实验菌株，MATa型，能直接转化质粒或与MATα型酵母菌株Y187通过接合（mating）操作进行蛋白相互作用验证或筛库实验。转化标志为trp1，leu2，cyh2。报告基因为lacZ，HIS3，MEL1。Y190-GAL4酵母双杂交系统需要两种质粒配套使用，pGB&pACT2或pGBKT7& pGADT7。pGB由或pGBKT7改造而来，筛选标志为Trp，用于表达DNA-BD与诱饵蛋白（bait）的融合蛋白；pACT2和pGADT7的结构和功能类似，筛选标志为Leu，用于表达AD与诱捕蛋白（prey）的融合蛋白。

本品为经特殊工艺制备的Y190酵母菌化学感受态细胞，用pGADT7质粒检测转化效率＞104cfu/μg DNA。且在-80℃能稳定保存三个月。

基因型

MATa, ura3-52, his3-200, ade2-101, lys2-801, trp1-901, leu2-3, 112, gal4Δ, gal80Δ, cyhr2, LYS2 : : GAL1UAS-HIS3TATA-HIS3, MEL1 URA3 : : GAL1UAS-GAL1TATA-lacZ

 

保存与运输方法

保存：其中感受态细胞按标签注明置于-80℃保存，三个月有效。其他组分按照标签注明保存，一年有效。

运输：干冰运输。

 

注意事项

1）   最好在冰上融化感受态细胞。

2）   转化高浓度质粒可相应减少用于涂板的菌量。同时转化2-3种质粒可适当增加质粒的用量。

3）   Y190对高温敏感，最适生长温度为27-30℃，一旦高于31℃，生长速度和转化率都呈指数下降。

4）   菌落变粉红色并不是污染，而是酵母细胞生长中的一种常见现象。当酵母细胞在平板上培养几天，将平板内的腺嘌呤消耗殆尽，那时酵母试图通过自身代谢途径合成腺嘌呤以供利用。然而，某些菌株ADE2基因被破坏，腺嘌呤合成受阻。且ADE4，5，6，7，8基因均正常。由此，造成中间产物P-ribosylamino imidazole（AIR）在细胞的积累使得菌落变为粉红色。

5）   酵母菌在缺陷培养基上生长速度比YPDA培养基慢，营养缺陷成分越多，生长越慢，以转化涂板为例：涂YPDA平板于29℃，48h培养可见直径1mm克隆；涂SD单缺平板于29℃，48-60h培养可见直径1mm克隆；涂SD双缺平板于29℃，60-80h培养可见直径1mm克隆；涂SD三缺或四缺平板于29℃，80-90h培养可见直径1mm克隆；

6）   为了您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作。

使用方法

1）   Carrier DNA于使用前通过加热处理使其变性为单链状态，方法如下：95-100℃ 水浴或金属浴3min，快速插入冰中，静置3min。重复一次。

2）   取100 µl冰上融化的Y190化学感受态细胞，依次加入预冷的目的质粒0.5-3 µg，单链Carrier DNA 10 µl，PEG/LiAc 500µl，用枪吹打几次充分混匀，30℃水浴30 min（在15min时翻转6-8次混匀）。

3）   之后将管子放42℃水浴15 min（在7.5min时翻转6-8次混匀）。

4）   5000 rpm离心40s弃上清，用400 µl ddH2O重悬沉淀，离心30s弃上清。

5）  用50 µl ddH2O重悬，涂板，放入29℃培养48-96 h。

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MF2353-300UL Y187 Yeast Strain酵母双杂交用甘油菌 300μl
MF2354-1000UL Y187 Chemically Competent Cell酵母菌化学感受态细胞 10×100μl
MF2355-300UL AH109 Yeast Strain酵母双杂交用甘油菌 300μl
MF2356-1000UL AH109 Chemically Competent Cell酵母菌化学感受态细胞 10×100μl
MF2357-300UL EGY48 Yeast Strain 酵母双杂交用甘油菌 300μl
MF2358-1000UL EGY48 Chemically Competent Cell酵母菌化学感受态细胞 10×100μl
MF2359-300UL NMY51 Yeast Strain 酵母双杂交用甘油菌 300μl
MF2360-1000UL NMY51 Chemically Competent Cell酵母菌化学感受态细胞 10×100μl
MF2363-300UL Y190 Yeast Strain酵母单杂交用甘油菌 300μl
MF2364-1000UL Y190 Chemically Competent Cell酵母菌化学感受态细胞 10×100μl
MF2501-200T Yeast Transformation Kit酵母转化试剂盒 200T

 

 

 

规格信息

品牌：

Jinpan
CAS:

N/A
规格：

50×100μl
货期：

咨询客服

Y190 Chemically Competent Cell 酵母菌化学感受态细胞

发表于由

Y190 Chemically Competent Cell 酵母菌化学感受态细胞

货号： MF2364-1000UL 品牌： Jinpan 标签： 分子生物学

描述

Y190 Chemically Competent Cell 酵母菌化学感受态细胞

产品关键词：

Y190-GAL4酵母单杂交系统；Y1HGold；pGBKT7；pGADT7；Ar Qual；X-α-Gal；Aureobasidin A （AbA）；金担子素；

 

产品订购：更大包装或产品技术问题，请来电/在线咨询，电话：021-50837765 。

货号 产品名称 规格 价格（元） 
MF2364-1000UL     Y190 Chemically Competent Cell 酵母菌化学感受态细胞      10×100μl       290
MF2364-5000UL Y190 Chemically Competent Cell 酵母菌化学感受态细胞 50×100μl 1320

 

产品组分：

组分编号 组分名称 保存               货号（规格）
MF2364-1000UL       MF2364-5000UL     
MF2364-A         Y190 Chemically Competent Cell       -80℃ 10×100μl 50×100μl
MF2364-B pGADT7 Control Vector (10ng/μl) -80℃ 10μl   10μl  
MF2364-C Carrier DNA (10μg/μl) -20℃ 100μl  500μl 
MF2364-D PEG/LiAC Solution +4℃ 5ml 25ml

 

产品描述

酵母双杂交系统是用于体内研究蛋白相互作用的一种非常便利的工具，常用的如GAL4为基础的双杂交系统，使用酵母转录因子GAL4来检测转录激活后的蛋白相互作用。工作原理为：一个完整的酵母转录因子GAL4由两个可以分开，功能上相互独立的结构域组成，N端有一个147个氨基酸组成的DNA结合域（DNA- BD），C端有一个由113个氨基酸组成的转录激活域（AD）。DB可以识别并结合上游激活序列（UAS），而AD能激活UAS下游基因进行转录，单独的BD或AD不能激活基因转录。正常情况，BD和AD不会结合，将待检测的蛋白质分别与BD和AD融合，形成诱饵融合蛋白（bait-DNA）和诱捕融合蛋白（prey-DNA），只有当诱饵和诱捕蛋白发生相互作用，促使BD和AD的相互接近，形成完整的GAL4，从而激活报告基因的转录。

Y190是GAL4系统酵母双杂交用实验菌株，MATa型，能直接转化质粒或与MATα型酵母菌株Y187通过接合（mating）操作进行蛋白相互作用验证或筛库实验。转化标志为trp1，leu2，cyh2。报告基因为lacZ，HIS3，MEL1。Y190-GAL4酵母双杂交系统需要两种质粒配套使用，pGB&pACT2或pGBKT7& pGADT7。pGB由或pGBKT7改造而来，筛选标志为Trp，用于表达DNA-BD与诱饵蛋白（bait）的融合蛋白；pACT2和pGADT7的结构和功能类似，筛选标志为Leu，用于表达AD与诱捕蛋白（prey）的融合蛋白。

本品为经特殊工艺制备的Y190酵母菌化学感受态细胞，用pGADT7质粒检测转化效率＞104cfu/μg DNA。且在-80℃能稳定保存三个月。

基因型

MATa, ura3-52, his3-200, ade2-101, lys2-801, trp1-901, leu2-3, 112, gal4Δ, gal80Δ, cyhr2, LYS2 : : GAL1UAS-HIS3TATA-HIS3, MEL1 URA3 : : GAL1UAS-GAL1TATA-lacZ

 

保存与运输方法

保存：其中感受态细胞按标签注明置于-80℃保存，三个月有效。其他组分按照标签注明保存，一年有效。

运输：干冰运输。

 

注意事项

1）   最好在冰上融化感受态细胞。

2）   转化高浓度质粒可相应减少用于涂板的菌量。同时转化2-3种质粒可适当增加质粒的用量。

3）   Y190对高温敏感，最适生长温度为27-30℃，一旦高于31℃，生长速度和转化率都呈指数下降。

4）   菌落变粉红色并不是污染，而是酵母细胞生长中的一种常见现象。当酵母细胞在平板上培养几天，将平板内的腺嘌呤消耗殆尽，那时酵母试图通过自身代谢途径合成腺嘌呤以供利用。然而，某些菌株ADE2基因被破坏，腺嘌呤合成受阻。且ADE4，5，6，7，8基因均正常。由此，造成中间产物P-ribosylamino imidazole（AIR）在细胞的积累使得菌落变为粉红色。

5）   酵母菌在缺陷培养基上生长速度比YPDA培养基慢，营养缺陷成分越多，生长越慢，以转化涂板为例：涂YPDA平板于29℃，48h培养可见直径1mm克隆；涂SD单缺平板于29℃，48-60h培养可见直径1mm克隆；涂SD双缺平板于29℃，60-80h培养可见直径1mm克隆；涂SD三缺或四缺平板于29℃，80-90h培养可见直径1mm克隆；

6）   为了您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作。

使用方法

1）   Carrier DNA于使用前通过加热处理使其变性为单链状态，方法如下：95-100℃ 水浴或金属浴3min，快速插入冰中，静置3min。重复一次。

2）   取100 µl冰上融化的Y190化学感受态细胞，依次加入预冷的目的质粒0.5-3 µg，单链Carrier DNA 10 µl，PEG/LiAc 500µl，用枪吹打几次充分混匀，30℃水浴30 min（在15min时翻转6-8次混匀）。

3）   之后将管子放42℃水浴15 min（在7.5min时翻转6-8次混匀）。

4）   5000 rpm离心40s弃上清，用400 µl ddH2O重悬沉淀，离心30s弃上清。

5）  用50 µl ddH2O重悬，涂板，放入29℃培养48-96 h。

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货号 名称 规格                
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规格信息

品牌：

Jinpan
CAS:

N/A
规格：

10×100μl
货期：

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Y1HGold Chemically Competent Cell 酵母菌化学感受态细胞

发表于由

Y1HGold Chemically Competent Cell 酵母菌化学感受态细胞

货号： MF2362-1000UL 品牌： Jinpan 标签： 分子生物学

描述

Y1HGold Chemically Competent Cell  酵母菌化学感受态细胞

 

产品关键词：

GAL4-AbA酵母单杂交系统；Y1HGold；pAbAi；pGADT7；Ar Qual；X-α-Gal ；Aureobasidin A （AbA）；金担子素；

 

产品订购：更大包装或产品技术问题，请来电/在线咨询，电话：021-50837765 。

货号 产品名称 规格            价格（元）   
MF2362-1000UL    Y1HGold Chemically Competent Cell酵母菌化学感受态细胞    10×100μl 290
MF2362-5000UL Y1HGold Chemically Competent Cell酵母菌化学感受态细胞 50×100μl 1320

 

产品组分：

组分编号        组分名称 保存             

货号（规格）
MF2362-1000UL      MF2362-5000UL    
MF2362-A Y1HGoldCompetent Cell -80℃ 10×100μl 50×100μl
MF2362-B pGADT7 Control Vector (10ng/μl)     -80℃ 10μl   10μl  
MF2362-C Carrier DNA (5μg/μl) -20℃ 100μl  500μl 
MF2362-D PEG/LiAC Solution +4℃ 5ml 25ml

 

产品描述

酵母单杂交是在酵母双杂交的基础上发展起来，不同于双杂交用来研究蛋白-蛋白间的相互作用，单杂交主要用于研究蛋白和DNA的相互作用。

Y1HGold是Clontech GAL4-AbA酵母单杂交系统用的菌株，MATα型，能直接转化质粒进行文库筛选。Y1HGold-GAL4酵母单杂交系统需要两种质粒配套使用，分别为pAbAi和pGADT7。前者筛选标志为Ura，用于表达pBait-AbAi构建子（通过将bait-DNA 单拷贝或串联重复序列克隆到pAbAi载体所得）；后者筛选标志为Leu，用于表达GAL4 AD与诱捕蛋白（prey）的融合蛋白。Y1HGold-GAL4酵母单杂交系统的工作原理在于：基因组整合有pBait-AbAi的酵母报告菌株，当诱捕蛋白（prey）结合到诱饵序列（bait-DNA），GAL4 AD会激活AUR1-C报告基因的表达，这一表达使得细胞能够在含筛选抗生素金担子素（Aureobasidin A，AbA）的培养基上生长。与传统的营养缺陷报告基因相比，AUR1-C（AbAr）在很低浓度（100-200 ng/ml）下即可以有效杀死非抗性克隆，大大降低背景克隆生长。这一优势也可降低酵母单杂交假阳性发生的概率。

本品为经特殊工艺制备的Y1HGold酵母菌化学感受态细胞，用pGADT7质粒检测转化效率＞104cfu/μg DNA。且在-80℃能稳定保存三个月。

基因型

MATα, ura3-52, his3-200, ade2-101, trp1-901, leu2-3, 112, gal4Δ, gal80Δ, met-, MEL1

 

保存与运输方法

保存：其中感受态细胞按标签注明置于-80℃保存，三个月有效。其他组分按照标签注明保存，一年有效。

运输：干冰运输。

 

注意事项

1）   最好在冰上融化感受态细胞。

2）   转化高浓度质粒可相应减少用于涂板的菌量。同时转化2-3种质粒可适当增加质粒的用量。

3）   Y1HGold对高温敏感，最适生长温度为27-30℃，一旦高于31℃，生长速度和转化率都呈指数下降。

4）   菌落变粉红色并不是污染，而是酵母细胞生长中的一种常见现象。当酵母细胞在平板上培养几天，将平板内的腺嘌呤消耗殆尽，那时酵母试图通过自身代谢途径合成腺嘌呤以供利用。然而，某些菌株ADE2基因被破坏，腺嘌呤合成受阻。且ADE4，5，6，7，8基因均正常。由此，造成中间产物P-ribosylamino imidazole（AIR）在细胞的积累使得菌落变为粉红色。

5）   酵母菌在缺陷培养基上生长速度比YPDA培养基慢，营养缺陷成分越多，生长越慢，以转化涂板为例：涂YPDA平板于29℃，48h培养可见直径1mm克隆；涂SD单缺平板于29℃，48-60h培养可见直径1mm克隆；涂SD双缺平板于29℃，60-80h培养可见直径1mm克隆；涂SD三缺或四缺平板于29℃，80-90h培养可见直径1mm克隆；

6）   为了您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作。

使用方法

1）   取100 µl冰上融化的Y1HGold化学感受态细胞，依次加入预冷的目的质粒2-5 µg，Carrier DNA （95-100℃ 孵育5 min，快速冰浴。重复一次。）10 µl，PEG/LiAc 500µl，用枪吹打几次充分混匀，30℃水浴30 min（在15min时翻转6-8次混匀）。

2）   之后将管子放42℃水浴15 min（在7.5min时翻转6-8次混匀）。

3）   5000 rpm离心40s弃上清，用400 µl ddH2O重悬沉淀，离心30s弃上清。

4）   用50 µl ddH2O重悬，涂板，放入恒温培养箱29℃培养48-96 h。

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规格信息

品牌：

Jinpan
CAS:

N/A
规格：

10×100μl
货期：

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