C58C1 Chemically Competent Cell 农杆菌化学感受态细胞

C58C1 Chemically Competent Cell 农杆菌化学感受态细胞

货号: MF2453-1000UL 品牌: Jinpan 标签: 分子生物学

描述

C58C1 Chemically Competent Cell 农杆菌化学感受态细胞

产品标签:

C58C1;JPU440;K599;Agrobacterium rhizogenes发根农杆菌;pCAMBIA2301;Streptomycin 链霉素;Rifampicin利福平;

 

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货号 产品名称 规格 价格(元)   
MF2453-1000UL   C58C1 Chemically Competent Cell农杆菌化学感受态细胞    10×100μl      430
MF2453-5000UL C58C1 Chemically Competent Cell农杆菌化学感受态细胞 50×100μl 1830

【好消息】:见我司金畔生物整理的根癌(发根)农杆菌感受态细胞技术专题

产品组分 

组分编号 组分名称 货号(规格)
MF2453-1000UL     MF2453-1000UL   
MF2453-A    C58C1Chemically Competent Cell 10×100μl 50×100μl
MF2453-B pCAMBIA2301 Control Vector (10ng/μl)     10μl 10μl

 

产品描述

发根农杆菌(Agrobacterium rhizogenes)是根瘤菌科农杆属的一种革兰氏阴性土壤细菌,能够侵染大多数双子叶植物和少数单子叶植物以及个别裸子植物。起关键作用的是其携带的Ri质粒,含有负责发根自主性生长和冠瘿碱合成的基因。结构上与Ti质粒类似,主要有致毒区(Vir),T-DNA区以及冠瘿碱合成功能区等。

根据合成冠瘿碱的不同,Ri质粒分为4种类型:1)甘露碱型;2)黄瓜碱型;3)农杆碱型;4)米奇矛型。

发根农杆菌菌株C58C1含pRiA4b农杆碱型Ri质粒,具有广泛的宿主范围(蔷薇科,夹竹桃科,豆科,茄科,黄芩,烟草等),同时具有链霉素、利福平抗性。

我司(金畔生物)提供的C58C1化学转化感受态细胞经特殊工艺制作,基因型为Agrobacterium rhizogenes (strR,rifR) pRiA4b (agropine type),经pCAMBIA2301质粒(卡那霉素抗性)检测转化效率>104cfu/μg DNA。

 

保存与运输条件:

保存:-80℃保存,一年有效。

运输:干冰运输。

 

注意事项

1)   感受态细胞应保存在-80℃,不可反复冻融和放置时间过长,以免降低感受态细胞的转化效率。

2)   整个转化操作,严格根据相应温度及无菌条件要求进行。

3)   加入质粒的体积不应大于感受态体积的1/10。质粒不纯或存在乙醇等有机物污染,会导致转化效率急剧下降。质粒增大一倍,转化效率下降一个数量级。

4)   混匀质粒时应用手指快速拨打管底或用枪吹吸混匀,务必使质粒快速、均匀分散开,与感受态细胞充分接触。

5)   转化高浓度的质粒可相应减少最终涂板用量。

6)   平板上克隆密度过大时,由于营养不足,克隆生长变慢,菌落变小。为获得大菌落,应减少质粒用量或降低涂板的菌量。

7)   C58C1具有链霉素、利福平抗性,不可用于具链霉素或者利福平抗性质粒的转化。

8)   为了保证最佳的转化效率,发根农杆菌的培养务必使用TY培养基(配方见附表1)。

9)   为了您的安全和健康,请穿实验服并戴一次性手套操作。

使用方法

1)        取-80℃保存的感受态细胞于室温或手心片刻待其部分融化,达到冰水混合状态时插入冰浴中使其完全融化。

2)        往100μl感受态细胞悬液中加入0.01~1μg质粒DNA(转化效率较高,第一次使用前最好做预实验确定所加质粒的量),用手快速、剧烈拨打管底混匀或用枪吹吸混匀,依次放于冰中间静置5min,液氮5min,37℃水浴5min,冰浴5min。

3)        冰浴中拿出放室温,加入700μl无抗生素的TY液体培养基,于28℃振荡培养2h。

4)        6,000rpm离心1min,吸掉600ul上清,之后用枪轻轻吹打重悬菌体。之后加到含相应抗生素的TY平板上,用无菌玻棒轻轻的将细胞均匀涂开。室温正置10 min,待液体被吸收后,倒置平板,28℃培养2-3天。

附表1 固体和液体TY培养基配方

附表2 常见发根农杆菌对抗生素敏感性总表

农杆菌菌株  羧苄(carb) 链霉素(strep) 利福平(rif) 庆大霉素(gent) 卡那霉素(kan)
Ar A4 S S S S R
Ar Qual S R S R S
Ar 1193 R R R S S
K599 S R S S S
C58C1 S R R S S
JPU440 S R S S S
【备注】:S代表敏感,R代表抗性。

附表3 常见农杆菌抗生素配制方法

抗生素 配方 母液              工作液       
羧苄青霉素 去离子水溶解,0.22μm滤膜除菌 50mg/ml 50μg/ml
硫酸卡那霉素          去离子水溶解,0.22μm滤膜除菌 50mg/ml 50μg/ml
链霉素 去离子水溶解,0.22μm滤膜除菌 10mg/ml 50μg/ml
庆大霉素 去离子水溶解,0.22μm滤膜除菌 20mg/ml 40μg/ml
利福平 DJPO溶解,0.22μm有机相滤膜除菌 10mg/ml 20μg/ml
氯霉素 无水乙醇溶解,0.22μm有机相滤膜除菌           34mg/ml 34μg/ml

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货号 名称 规格             
MF2451-1000UL     JPU440 Chemically Competent Cell农杆菌化学感受态细胞     10×100μl
MF2453-1000UL C58C1 Chemically Competent Cell农杆菌化学感受态细胞 10×100μl
MF2455-1000UL K599 Chemically Competent Cell农杆菌化学感受态细胞 10×100μl
MF2457-1000UL Ar A4 Chemically Competent Cell农杆菌化学感受态细胞 10×100μl
MF2459-1000UL Ar Qual Chemically Competent Cell农杆菌化学感受态细胞 10×100μl
MF2461-1000UL Ar 1193 Chemically Competent Cell农杆菌化学感受态细胞 10×100μl
JP0021-10G Chloramphenicol, USP Grade氯霉素 10g
JP0018-10G Ampicillin, Sodium Salt氨苄青霉素钠 10g
JP0017-5G Carbenicillin, Disodium Salt羧苄青霉素二钠盐 5g
JP0019-10G Kanamycin Sulfate硫酸卡那霉素 10g
JP0014-1G Rifampicin, USP Grade利福平 1g

 

 

 

 

规格信息

品牌:

Jinpan

CAS:

N/A

规格:

10×100μl

货期:

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