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BCECF试剂货号:B031
2′,7′-Bis(carboxyethyl)-4 or 5-carboxyfluorescein
CAS号:85138-49-4
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注意事项
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参考文献
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性质

  5-羧基荧光素是一种通过将染料掺入细胞来研究细胞内pH变化的方法,但是当用于pKa = 7.0的细胞(如淋巴细胞)中时,染料会从细胞中洗脱出来,很难快速测定。 BCECF引入了两个羧乙基基团以减少从细胞中的洗脱。 适用于研究细胞内pH变化(λex= 490 nm,λem= 526 nm)。

注意事项

  ・如果将本产品以粉末形式取出并使用,由于其性质,静电等因素,它可能会粘附在容器内部,从而难以完全取出。

・对于粘附在容器上且无法取出的粉末,请在使用前将要使用的溶剂倒入容器中并溶解。

溶解例

2 mg / ml(甲醇)

参考文献

1) R. A. Steinhardt and D. Mazia, “Development of K+-conductance and Membrane Potentials in Unfertilized Sea Urchin Eggs After Exposure to NH4OH”, Nature1973241, 400.
2) T. J. Rink, R. Y. Tsien and T. Pozzan, “Cytoplasmic pH and Free Mg2+ in Lymphocytes”, J. Cell Biol.198295, 189.
3) A. M. Paradiso, R. Y. Tsien and T. E. Machen, “Na+ -H+ Exchange in Gastric Glands as Measured with a Cytoplasmic-trapped, Fluorescent pH Indicator”, Proc. Natl. Acad. Sci. USA198481, 7436.
4) S. Grinstein, B. Elder and W. Furuya, “Phorbol Ester-induces Changes of Cytoplasmic pH in Neutrophils: Role of Exocytosis in Na+ – H+ Exchange”, Am. J. Physiol.1985248, C379.
5) G. B. Zavoico, E. J. Cragoe and M. B. Feinstein, “Regulation of Intracellular pH in Human Platelets”, J. Biol. Chem.1986261(28), 13160.
6) G. R. Bright, W. Fisher, J. Rogowska and L. Taylor, “Fluorescence Ratio Imaging Microscopy: Temporal and Spatial Measurements of Cytoplasmic pH”, J. Cell Biol.1987104, 1019.
7) C. Aalkjaer and E. J. Gragoe Jr, “Intracellular pH Regulation in Resting and Contracting Segments of Rat Mesenteric Resistance Vessels”, J. Physiol.1988402, 391.
8) K. Tsujimoto, M. Semadeni, M. Huflejt and L. Packer, “Intracellular pH of Halobacteria Can Be Determined by the Fluorescent Dye 2′,7′-bis(carboxyethyl)-5(6)-carboxyfluorescein”, Biochem. Biophys. Res. Commun.1988155, 123.
9) M. A. Kolber, R. R. Quinones, R. E. Gress and P. A. Henkart, “Measurament of Cytotoxicity by Target Cell Release and Retention of the Fluorescent Dye Bis-carboxyethyl-carboxyfluorescein(BCECF)”, J. Immunol. Methods, 1988108, 255.
10) H. Harada, Y. Kanai, M. Anzai and Y. Suketa, “cAMP Activates Cl/HCO3 Exchange for Regulation of Intracellular pH in Renal Epithelial Cells”, Biochim. Biophys. Acta, 1991, 1092, 404.
11) C. C. Freudenrich, E. Murphy, L. A. Levy, R. E. London and M. Lieberman, “Intracellular pH Modulates Cytosolic Free Magnesium in Cultured Chicken Heart Cells”, Am. J. Physiol., 1992, 262(4), C1024.
12) K. Khodakhah and D. Ogden, “Functional Heterogeneity of Calcium Release by Inositol Triphosphate in Single Purkinje Neurones, Cultured Cerebellar Astorocytes, and Peripheral Tissues”, Proc. Natl. Acad. Sci. USA, 1993, 90, 4976.
13) G. Boyarsky, C. Hanssen and L. A. Clyne, “Superiority of in vitro Over in vivo Calibrations of BCECF in Vascular Smooth Muscle Cells”, FASEB J., 1996, 10, 1205.
14) S. A. Weston and C. R. Parish, “New Fluorescent Dyes for Lymphocyte Migration Studies Analysis by Flow Cytometry and Fluorescent Microscopy”, J. Immunol. Methods, 1990, 133, 87.
15) L. S. D. Clerck, C. H. Bridts, A. M. Mertens, M. M. Moens and W. J. Stevens, “Use of Fluorescent Dyes in the Determination of Adherence of Human Leucocytes to Endothelial Cells and the Effects of Fluorochromes on Cellular Function”, J. Immunol. Methods, 1994, 172, 115.

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该产品为橙色至红棕色粉末,可溶于甲醇。

纯度(HPLC):85.0%以上

溶于甲醇:测试合格

荧光光谱:测试合格

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NMR光谱:测试一致

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1-[2-Amino-5-(2,7-difluoro-6-acetoxymethoxy-3-oxo-9-xanthenyl)phenoxy]-2-(2-amino-5-methylphenoxy)ethane-N,N,N’,N’-tetraacetic acid, tetra(acetoxymethyl)ester

BCECF试剂货号:B031 CAS号:85138-49-4
Rhod 2-AM试剂
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BCECF试剂货号:B031 CAS号:85138-49-4
Fluo 3-AM试剂
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BCECF试剂货号:B031 CAS号:85138-49-4
Fura2-AM试剂
1-[6-Amino-2-(5-carboxy-2-oxazolyl)-5-benzofuranylo

同仁化学BCECF-AM试剂货号:B262 3′-O-Acetyl-2′,7′-bis(carboxyethyl)-4 or 5-carboxyfluorescein, diacetoxymethyl ester CAS号:117464-70-7| 日本DOJINDO

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BCECF-AM试剂货号:B262
3′-O-Acetyl-2′,7′-bis(carboxyethyl)-4 or 5-carboxyfluorescein, diacetoxymethyl ester
CAS号:117464-70-7
商品信息
储存条件:-20度保存,避光
运输条件:室温
分子式:

C35H28O15

分子量:

688.59

特点:

 

● 水溶性好,可进入细胞膜

● 荧光强度高

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1mg

现货

荧光探针检测方案

BCECF-AM试剂货号:B262 3′-O-Acetyl-2′,7′-bis(carboxyethyl)-4 or 5-carboxyfluorescein, diacetoxymethyl ester CAS号:117464-70-7

BCECF-AM试剂货号:B262 3′-O-Acetyl-2′,7′-bis(carboxyethyl)-4 or 5-carboxyfluorescein, diacetoxymethyl ester CAS号:117464-70-7

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规格性状

规格

 

特性:该产物为浅橙色至浅橙色棕色粉末或固体,可溶于DMSO和乙腈。

纯度(HPLC):90%以上

荧光光谱:试验成功

NMR光谱:试验成功

产品概述

BCECF被广泛地用于细胞内pH的测定。Tsien博士和其他人通过加入2个额外的羧化物基团改进了这种羧基荧光素。加入的两个羧基使得它能更好地被固定在细胞内。BCECF具有很好的水溶性,是因为它在中性pH时带有4-5个负电荷。但是BCECF却很难穿过细胞膜进入到细胞内。它的pKa值为6.97,高于其它的羧基荧光素。BCECF在激发光谱439nm处有等吸收点,因此它能和Fura 2一样可用比率法测定。505nm和439nm通常是非常有用的用于比率测量的波长,一般会将490nm和450nm的滤光片加在激发光源的前面。而530nm的滤光片则是用来查看它的荧光信号的。这里要注意的是激发光谱与吸收光谱有一些细微的区别。BCECF-AM是乙酰甲酯化的BCECF。它能够轻易地进入到细胞内。就和其他的乙酰甲酯类一样,BCECF-AM只需要通过孵育就能进入细胞。BCECF-AM对潮湿非常敏感,所以要小心保存。如果DMSO储存液的颜色从浅黄色变为深橙色就代表了AM的分解。所以通过对颜色变化的观测,能判断AM酯的水解情况。

BCECF-AM试剂货号:B262 3′-O-Acetyl-2′,7′-bis(carboxyethyl)-4 or 5-carboxyfluorescein, diacetoxymethyl ester CAS号:117464-70-7

产品特性

BCECF-AM是一种对细胞内pH敏感的新型荧光探针,分别用490nm和440nm波长激发BCECF所得到的发射荧光之比与pH有很好的线性关系。BCECF-AM是乙酰甲酯化的BCECF,BCECF-AM是一种可以穿透细胞膜的荧光染料,BCECF-AM没有荧光,进入细胞后被细胞内的酯酶水解成BCECF,从而被留在细胞内。BCECF在适当的pH值情况下可以被激发形成绿色荧光。BCECF-AM不仅被广泛用于哺乳动物细胞的研究,也有报道用于动物组织、植物细胞、细菌和酵母等的细胞内pH水平检测。在有细胞内pH变化的细胞毒性、细胞凋亡、细胞粘附、药物抵抗、细胞趋化等过程中BCECF AM被广泛应用。BCECF-AM(pH荧光探针)需用无水DMSO(anhydrous DMSO)配制。

BCECF-AM试剂货号:B262 3′-O-Acetyl-2′,7′-bis(carboxyethyl)-4 or 5-carboxyfluorescein, diacetoxymethyl ester CAS号:117464-70-7

操作说明

试剂 (溶解方法):   

1.45 mM的BCECF-AM/DMSO溶液(将1 mg 的BCECF-AM溶于1mlDMSO)HEPES缓冲液(20mM HEPES,153mM NaCl,5mM KCl,5mM glucose,pH7.4)

操作:

1.用HEPES制备细胞悬液,细胞浓度为4×107个/ml。

2.将1.45 mM的BCECF-AM/DMSO溶液加入细胞悬液中 (细胞悬液的1/300体积),BCECF-AM终浓度为3mM。

3.37℃培养30min。

4.用HEPES缓冲液清洗细胞3次,制成3×106个/ml的细胞悬液。

5.使用荧光显微镜或带有图像分析系统的激光共聚焦显微镜检测细胞的荧光强度。

*标记的条件因细胞种类而异,在每次实验前,请先确定最佳条件。以上方法仅供参考。

BCECF-AM试剂货号:B262 3′-O-Acetyl-2′,7′-bis(carboxyethyl)-4 or 5-carboxyfluorescein, diacetoxymethyl ester CAS号:117464-70-7

文献

1.R.A.Steinhardt, et al.,Development of K+-conductance and Membrane Potentials in Unfertilized Sea Urchin Eggs After Exposure to NH4OH. Nature.1973;241:400-401.

2.T.J.Rink, et al.,Cytoplasmic pH and Free Mg2+ in Lymphocytes.J Cell Biol.1982;95:189-196.

3.A.M.Paradiso,et al.,Na+ -H+ Exchange in Gastric Glands as Measured with a Cytoplasmic-trapped, Fluorescent pH Indicator. PNAS.1984;81:7436-7440.

4.S.Grinstein,et al.,Phorbol Ester-induces Changes of Cytoplasmic pH in Neutrophils:Role of Exocytosis in Na+ – H+ Exchange.Am J Physiol.1985;248:C379-C386.

5.G.B.Zavoico, et al.,Regulation of intracellular pH in human platelets.Effects of thrombin,A23187,and ionomycin and evidence for activation of Na+/H+ exchange and its inhibition by amiloride analogs.J Biol Chem.1986;261:13160-13167.

6.G.R.Bright,et al.,Fluorescence Ratio Imaging Microscopy: Temporal and Spatial Measurements of Cytoplasmic pH.J Cell Biol.1987;104:1019-1033.

7.C.Aalkjaer,et al.,Intracellular pH Regulation in Resting and Contracting Segments of Rat Mesenteric Resistance Vessels. J Physiol.1988;402:391-410.

8.K.Tsujimoto,et al.,Intracellular pH of Halobacteria Can Be Determined by the Fluorescent Dye 2 E 7 Ebis(carboxyethyl)-5(6)-carboxyfluorescein.Biochem Biophys Res Commun.1988;155:123-129.

9.M.A.Kolber,et al.,Measurament of Cytotoxicity by Target Cell Release and Retention of the Fluorescent Dye Bis-carboxyethylcarboxyfluorescein(BCECF).J Immunol Methods.1988;108:255-264.

10.H.Harada,et al.,cAMP Activates Cl-/HCO3 – Exchange for  Regulation of Intracellular pH in Renal Epithelial Cells. Biochim Biophys  Acta. 1991;1092:404-407.11.C.C. Freudenrich, et al.,Intracellular pH Modulates  Cytosolic Free Magnesium in Cultured Chicken Heart Cells.Am J Physiol.1992;262:C1024-C1030.

12.K.Khodakhah,et al.,Functional Heterogeneity of Calcium  Release by Inositol Triphosphate in Single Purkinje Neurones, Cultured  Cerebellar Astorocytes, and Peripheral Tissues. PNAS. 1993;90:4976-4980.

13.G.Boyarsky,et al.,Superiority of in vitro Over in vivo Calibrations of BCECF in Vascular Smooth Muscle Cells. FASEB J.1996;10:1205-1212.

14.S.A. Weston,et al., New Fluorescent Dyes for Lymphocyte  Migration Studies Analysis by Flow Cytometry and Fluorescent Microscopy.J Immunol Methods.1990;133:87-97.

15.L.S.De Clerck,et al.,Use of Fluorescent Dyes in the Determination of Adherence of Human Leucocytes to Endothelial Cells and the Effects of Fluorochromes on Cellular Function.J Immunol Methods.1994;172:115-124.

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2′,7′-Bis(carboxyethyl)-4 or 5-carboxyfluorescein
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  5-羧基荧光素是一种通过将染料掺入细胞来研究细胞内pH变化的方法,但是当用于pKa = 7.0的细胞(如淋巴细胞)中时,染料会从细胞中洗脱出来,很难快速测定。 BCECF引入了两个羧乙基基团以减少从细胞中的洗脱。 适用于研究细胞内pH变化(λex= 490 nm,λem= 526 nm)。

注意事项

  ・如果将本产品以粉末形式取出并使用,由于其性质,静电等因素,它可能会粘附在容器内部,从而难以完全取出。

・对于粘附在容器上且无法取出的粉末,请在使用前将要使用的溶剂倒入容器中并溶解。

溶解例

2 mg / ml(甲醇)

参考文献

1) R. A. Steinhardt and D. Mazia, “Development of K+-conductance and Membrane Potentials in Unfertilized Sea Urchin Eggs After Exposure to NH4OH”, Nature1973241, 400.
2) T. J. Rink, R. Y. Tsien and T. Pozzan, “Cytoplasmic pH and Free Mg2+ in Lymphocytes”, J. Cell Biol.198295, 189.
3) A. M. Paradiso, R. Y. Tsien and T. E. Machen, “Na+ -H+ Exchange in Gastric Glands as Measured with a Cytoplasmic-trapped, Fluorescent pH Indicator”, Proc. Natl. Acad. Sci. USA198481, 7436.
4) S. Grinstein, B. Elder and W. Furuya, “Phorbol Ester-induces Changes of Cytoplasmic pH in Neutrophils: Role of Exocytosis in Na+ – H+ Exchange”, Am. J. Physiol.1985248, C379.
5) G. B. Zavoico, E. J. Cragoe and M. B. Feinstein, “Regulation of Intracellular pH in Human Platelets”, J. Biol. Chem.1986261(28), 13160.
6) G. R. Bright, W. Fisher, J. Rogowska and L. Taylor, “Fluorescence Ratio Imaging Microscopy: Temporal and Spatial Measurements of Cytoplasmic pH”, J. Cell Biol.1987104, 1019.
7) C. Aalkjaer and E. J. Gragoe Jr, “Intracellular pH Regulation in Resting and Contracting Segments of Rat Mesenteric Resistance Vessels”, J. Physiol.1988402, 391.
8) K. Tsujimoto, M. Semadeni, M. Huflejt and L. Packer, “Intracellular pH of Halobacteria Can Be Determined by the Fluorescent Dye 2′,7′-bis(carboxyethyl)-5(6)-carboxyfluorescein”, Biochem. Biophys. Res. Commun.1988155, 123.
9) M. A. Kolber, R. R. Quinones, R. E. Gress and P. A. Henkart, “Measurament of Cytotoxicity by Target Cell Release and Retention of the Fluorescent Dye Bis-carboxyethyl-carboxyfluorescein(BCECF)”, J. Immunol. Methods, 1988108, 255.
10) H. Harada, Y. Kanai, M. Anzai and Y. Suketa, “cAMP Activates Cl/HCO3 Exchange for Regulation of Intracellular pH in Renal Epithelial Cells”, Biochim. Biophys. Acta, 1991, 1092, 404.
11) C. C. Freudenrich, E. Murphy, L. A. Levy, R. E. London and M. Lieberman, “Intracellular pH Modulates Cytosolic Free Magnesium in Cultured Chicken Heart Cells”, Am. J. Physiol., 1992, 262(4), C1024.
12) K. Khodakhah and D. Ogden, “Functional Heterogeneity of Calcium Release by Inositol Triphosphate in Single Purkinje Neurones, Cultured Cerebellar Astorocytes, and Peripheral Tissues”, Proc. Natl. Acad. Sci. USA, 1993, 90, 4976.
13) G. Boyarsky, C. Hanssen and L. A. Clyne, “Superiority of in vitro Over in vivo Calibrations of BCECF in Vascular Smooth Muscle Cells”, FASEB J., 1996, 10, 1205.
14) S. A. Weston and C. R. Parish, “New Fluorescent Dyes for Lymphocyte Migration Studies Analysis by Flow Cytometry and Fluorescent Microscopy”, J. Immunol. Methods, 1990, 133, 87.
15) L. S. D. Clerck, C. H. Bridts, A. M. Mertens, M. M. Moens and W. J. Stevens, “Use of Fluorescent Dyes in the Determination of Adherence of Human Leucocytes to Endothelial Cells and the Effects of Fluorochromes on Cellular Function”, J. Immunol. Methods, 1994, 172, 115.

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规格性状:

该产品为橙色至红棕色粉末,可溶于甲醇。

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BCECF AM, Cell Permeant pH荧光探针

BCECF AM, Cell Permeant pH荧光探针 货号: JP4501-25MG 品牌: Jinpan 标签: 细胞生物学研究

描述

BCECF, AM pH荧光探针

 

产品信息

产品名称 产品编号 规格 价格(元)
BCECF, AM pH荧光探针 JP4501-1MG 1mg 1269
BCECF, AM pH荧光探针 JP4501-5MG 5mg 4449
BCECF, AM pH荧光探针 JP4501-25MG 25mg 9549

产品描述

BCECF, AM是一种广泛使用的检测细胞质pH值的荧光探针。具有细胞膜渗透性,进入细胞后被胞内酯酶水解生成BCECF,一种极性荧光衍生物从而被保留在细胞内。BCECF在细胞内很稳定,排出半衰期超过2小时。胞内pH测定通过比率成像实现,通过确定pH依赖性的发射光强度比率(Ex=535nm),分别用490nm激发光激发和440nm激发光激发,使用荧光分光光度法(spectrofluorometry)或流式细胞仪检测皆可。

BCECF,AM虽然主要用于哺乳动物细胞,也有报道用于植物细胞、细菌和酵母等的细胞pH水平检测。BCECF, AM还被广泛用于各种功能实验,如细胞活力和毒性、凋亡、粘附、趋化、药物抗性等引起的细胞pH变化检测。BCECF, AM还能用于包括钾离子在内的其他离子的胞内变化检测。

产品特性

1)CAS NO:117464-70-7

2)化学名:3′,6′-bis(acetyloxy)-5(or 6)-[[(acetyloxy)methoxy]carbonyl]-3-oxo-spiro[isobenzofuran-1(3H),9′- [9H]xanthene]-2′,7′-dipropanoic acid, 2′,7′-bis[(acetyloxy)methyl] ester

3)同义名:BCECF Acetoxymethyl ester; 2′,7′-Bis-(2-Carboxyethyl)-5-(and-6)-Carboxyfluorescein, Acetoxymethyl Ester;

4)分子式:C42H40O21

5)分子量:880.7

6)纯度:≥95%(HPLC)

7)外观:黄色薄膜

8)溶解性:溶于乙腈,DJPO,DMF

9)化学结构式:BCECF AM, Cell Permeant pH荧光探针

保存与运输方法

保存:-20℃避光干燥保存,2年有效。

运输:冰袋运输。

使用方法

1、 储存液制备

实验前将低温保存的BCECF, AM置于室温回温至少20min。用高质量的无水DJPO溶解粉末,使其充分溶解,配制成1-10mM储存液。按照单次用量分装后置于≤-20℃避光干燥保存,六个月稳定。

【注意】:用水溶性缓冲液或培养基稀释储存液到需要浓度的工作液,现配现用,不可保存。正常的BCECF, AM溶液无色且无荧光(浅色和弱荧光可接受)。

2、 BCECF, AM的加载(哺乳动物细胞)

大多数哺乳动物细胞不需透化,直接用稀释的细胞膜渗透BCECF, AM探针孵育即可加载。一旦进入细胞,非特异酯酶水解非荧光AM前体,产生荧光且pH灵敏的探针。阳离子探针BCECF的低泄露率和小的细胞内体积使得探针在胞内的终浓度明显高于胞外孵育浓度。总体而言,与钙离子探针比如Fura-2相比,以AM形式加载的BCECF更少出现胞内区域化。大量的实验数据表明BCECF在细胞质内是自由流动和解离的。

以下步骤仅作为参考,具体可根据实际情况调整。

1) 制备活细胞悬浮液(~106个细胞/ml)。

【注意】:贴壁细胞的加载条件基本类似于制备悬液的细胞。培养皿内的贴壁细胞可用生理盐稀释的BCECF AM探针浸没。对于生长在盖玻片上的细胞,轻轻洗掉维持培养基后,只需将盖玻片转入一含有BCECF AM染色液的培养皿内即可。

2) 将适量1mMBCECF, AM储存液用生理盐缓冲液如HBSS稀释100~500倍。通常情况,使用能够获得足够荧光信号的最低浓度BCECF AM来加载(也许低至0.1µM的加载浓度足够),这样可以降低AM水解的副产物生成,且有利于更充分的水解。加载培养基必须无氨基酸或缓冲液不含伯胺或仲胺,因其有可能切割AM阻止加载。血清的存在,有可能含内源性酯酶活性,也需避免使用,直至探针已经完全加载好。

3) 取等体积的BCECF AM稀释液到制备好的细胞悬液中。于4℃-37℃孵育15-60min。

【注意】:某些研究者报道生理温度比室温孵育产生更高程度的区域化。

4) 用新鲜培养基清洗细胞两次。

注意事项

为了您的安全和健康,请穿实验服并戴一次性手套操作。

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JP4455-1MG Dihydrorhodamine 123 (DHR 123) 二氢罗丹明123 1mg
JP4505-50UG Fluo-8 AM, Cell Permeant 钙离子荧光探针,超级纯 50μg
JP4509-100UG SBFI AM ( Na+Indicator) 钠离子指示探针 100μg
JP4606-500UG Coelenterazine Native 天然腔肠素 500μg

规格信息

品牌:

Jinpan

CAS:

117464-70-7

规格:

25mg

货期:

咨询客服

BCECF AM, Cell Permeant pH荧光探针

BCECF AM, Cell Permeant pH荧光探针 货号: JP4501-25MG 品牌: Jinpan 标签: 细胞生物学研究

描述

BCECF, AM pH荧光探针

 

产品信息

产品名称 产品编号 规格 价格(元)
BCECF, AM pH荧光探针 JP4501-1MG 1mg 1269
BCECF, AM pH荧光探针 JP4501-5MG 5mg 4449
BCECF, AM pH荧光探针 JP4501-25MG 25mg 9549

产品描述

BCECF, AM是一种广泛使用的检测细胞质pH值的荧光探针。具有细胞膜渗透性,进入细胞后被胞内酯酶水解生成BCECF,一种极性荧光衍生物从而被保留在细胞内。BCECF在细胞内很稳定,排出半衰期超过2小时。胞内pH测定通过比率成像实现,通过确定pH依赖性的发射光强度比率(Ex=535nm),分别用490nm激发光激发和440nm激发光激发,使用荧光分光光度法(spectrofluorometry)或流式细胞仪检测皆可。

BCECF,AM虽然主要用于哺乳动物细胞,也有报道用于植物细胞、细菌和酵母等的细胞pH水平检测。BCECF, AM还被广泛用于各种功能实验,如细胞活力和毒性、凋亡、粘附、趋化、药物抗性等引起的细胞pH变化检测。BCECF, AM还能用于包括钾离子在内的其他离子的胞内变化检测。

产品特性

1)CAS NO:117464-70-7

2)化学名:3′,6′-bis(acetyloxy)-5(or 6)-[[(acetyloxy)methoxy]carbonyl]-3-oxo-spiro[isobenzofuran-1(3H),9′- [9H]xanthene]-2′,7′-dipropanoic acid, 2′,7′-bis[(acetyloxy)methyl] ester

3)同义名:BCECF Acetoxymethyl ester; 2′,7′-Bis-(2-Carboxyethyl)-5-(and-6)-Carboxyfluorescein, Acetoxymethyl Ester;

4)分子式:C42H40O21

5)分子量:880.7

6)纯度:≥95%(HPLC)

7)外观:黄色薄膜

8)溶解性:溶于乙腈,DJPO,DMF

9)化学结构式:BCECF AM, Cell Permeant pH荧光探针

保存与运输方法

保存:-20℃避光干燥保存,2年有效。

运输:冰袋运输。

使用方法

1、 储存液制备

实验前将低温保存的BCECF, AM置于室温回温至少20min。用高质量的无水DJPO溶解粉末,使其充分溶解,配制成1-10mM储存液。按照单次用量分装后置于≤-20℃避光干燥保存,六个月稳定。

【注意】:用水溶性缓冲液或培养基稀释储存液到需要浓度的工作液,现配现用,不可保存。正常的BCECF, AM溶液无色且无荧光(浅色和弱荧光可接受)。

2、 BCECF, AM的加载(哺乳动物细胞)

大多数哺乳动物细胞不需透化,直接用稀释的细胞膜渗透BCECF, AM探针孵育即可加载。一旦进入细胞,非特异酯酶水解非荧光AM前体,产生荧光且pH灵敏的探针。阳离子探针BCECF的低泄露率和小的细胞内体积使得探针在胞内的终浓度明显高于胞外孵育浓度。总体而言,与钙离子探针比如Fura-2相比,以AM形式加载的BCECF更少出现胞内区域化。大量的实验数据表明BCECF在细胞质内是自由流动和解离的。

以下步骤仅作为参考,具体可根据实际情况调整。

1) 制备活细胞悬浮液(~106个细胞/ml)。

【注意】:贴壁细胞的加载条件基本类似于制备悬液的细胞。培养皿内的贴壁细胞可用生理盐稀释的BCECF AM探针浸没。对于生长在盖玻片上的细胞,轻轻洗掉维持培养基后,只需将盖玻片转入一含有BCECF AM染色液的培养皿内即可。

2) 将适量1mMBCECF, AM储存液用生理盐缓冲液如HBSS稀释100~500倍。通常情况,使用能够获得足够荧光信号的最低浓度BCECF AM来加载(也许低至0.1µM的加载浓度足够),这样可以降低AM水解的副产物生成,且有利于更充分的水解。加载培养基必须无氨基酸或缓冲液不含伯胺或仲胺,因其有可能切割AM阻止加载。血清的存在,有可能含内源性酯酶活性,也需避免使用,直至探针已经完全加载好。

3) 取等体积的BCECF AM稀释液到制备好的细胞悬液中。于4℃-37℃孵育15-60min。

【注意】:某些研究者报道生理温度比室温孵育产生更高程度的区域化。

4) 用新鲜培养基清洗细胞两次。

注意事项

为了您的安全和健康,请穿实验服并戴一次性手套操作。

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其他信息

品牌:

Jinpan

CAS:

117464-70-7

规格:

25mg

货期:

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