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同仁化学Iron Assay Kit -Colorimetric-试剂盒货号：I291 Iron Assay Kit -Colorimetric-组织铁离子定量试剂盒| 日本DOJINDO

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Iron Assay Kit -Colorimetric-试剂盒货号：I291
Iron Assay Kit -Colorimetric-组织铁离子定量试剂盒
Iron Assay Kit -Colorimetric-
商品信息
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特点：

● 适合组织检测

● 配有标准品，可定量二价、三价铁含量

● 吸光度法

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组织/细胞检测

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Iron Assay Kit -Colorimetric-试剂盒货号：I291 Iron Assay Kit -Colorimetric-组织铁离子定量试剂盒

Iron Assay Kit -Colorimetric-试剂盒货号：I291 Iron Assay Kit -Colorimetric-组织铁离子定量试剂盒

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试剂盒内含
产品概述
原理
金属离子选择性
加标回收实验
实验例
参考文献

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试剂盒内含

Iron Assay Kit -Colorimetric-试剂盒货号：I291 Iron Assay Kit -Colorimetric-组织铁离子定量试剂盒

产品概述

铁是生物体内最重要的金属元素之一，生物体内铁元素的含量虽少，但有着重要的生理作用。近年来，随着铁死亡概念的提出，细胞内铁离子的代谢过程的研究逐渐成为了研究热点。同仁化学研究所开发的 Iron Assay Kit-Colorimetric-试剂盒 是一套操作简便的比色法铁离子检测试剂盒。与其他市面上的检测试剂盒 相比 ，可以在更短的时间内进行快速检测。通过比较组织裂解液中的铁离子探针 3-(2-Pyridyl)-5,6-bis(5-sulfo-2-furyl)-1,2,4-triazine, disodium salt的 吸光度与还原成二价铁离子的三价铁标准品的吸光度，即可确定组织样品中的二价铁含量。同时，还可以通过试剂盒中的还原剂将样品中的三价铁还原成二价铁，以确定总铁含量，进而计算出样品中三价铁的含量。

原理

Iron Assay Kit -Colorimetric-试剂盒货号：I291 Iron Assay Kit -Colorimetric-组织铁离子定量试剂盒

金属离子选择性

Iron Assay Kit -Colorimetric-试剂盒货号：I291 Iron Assay Kit -Colorimetric-组织铁离子定量试剂盒

加标回收实验

Iron Assay Kit -Colorimetric-试剂盒货号：I291 Iron Assay Kit -Colorimetric-组织铁离子定量试剂盒

实验例

组织样品中的Fe2+和 Fe3+的检测

1. 称量 100 mg肝脏组织 。

2. 加入 1 ml冷 PBS，移液器吹打 20次， Vortex振荡 10 s 14,000 RPM离心 4 min，去除上清 。

3. 将样品转移至研钵，加入液氮充分研磨成粉末后，加入 1.3 ml Assay Buffer，回收至微管中。

4. 将含有样品的微管置于超声波水浴中 5 min。（为防止样品温度上升，每 1 min间隔置于冰浴上 20 s）。

5. 16,000 g离心 10 min，除去不溶物。

6. 取 1300 μl上清液，每管分别加入 400 μl上清液，制成二价铁样品、总铁样品、样品空白。

7. Standard管 中加入 Reducer solution。 （参考图 2 H管 30 μl、 G~C管 20 μl、 B管 40 μl、 A管 20 μl）。

二价品样品管中加入 20 μl Assay Buffer。

总铁样品管中加入 20 μl Reducer solution。

样品空白管中加入 20 μl Assay Buffer。

将所有的 Standard管、样品管、样品空白管 37 培养 15 min。

8. 参考表 1和表 2，加入至 96孔板中 37 培养 60 min，检测 593 nm处的吸光度。

9. 将酶标仪数据拷贝至 “Iron Assay Kit – Excel表 ”，自动计算 出二价铁和三价铁浓度。

Iron Assay Kit -Colorimetric-试剂盒货号：I291 Iron Assay Kit -Colorimetric-组织铁离子定量试剂盒

Iron Assay Kit -Colorimetric-试剂盒货号：I291 Iron Assay Kit -Colorimetric-组织铁离子定量试剂盒

参考文献

No.       检测对象                                           引用 (含链接) 影响因子
1 组织

(小鼠肿瘤组织)

 H.   Ren, J. Yong, Q. Yang, Z. Liu, Y. Xu, H. Wang, X. Jiang, W. Miao, X. Li, “Self-assembled FeS-based cascade   bioreactor with enhanced tumor penetration and synergistic treatments to trigger   robust cancer immunotherapy”, Acta Pharm. Sin. B, 2021,   doi:10.1016/j.apsb.2021.05.005. 7.097
2 细胞

Kasumi-1

(人急性白血病细胞)

 L.   Zhang, Y. Song, K. Cao, Y. Du, M. Han, Z. Shi, F. Yan and S. Feng, “Hepcidin-Based   Nanocomposites for Enhanced Cancer Immunotherapy by Modulating Iron   Export-Mediated N6-Methyladenosine RNA Transcript”, Adv. Funct.   Mater., 2021, doi: 10.1002/adfm.202107195. 18.808
3 细胞

(II型肺泡细胞)

 H.   Cheng, D. Feng, X. Li, L. Gao, S. Tang, W. Liu, X. Wu, S. Yue, C. Li, Z. Luo,   “Iron   deposition-induced ferroptosis in alveolar type II cells promotes the   development of pulmonary fibrosis”, Biochim. Biophys. Acta,   Mol. Basis Dis., 2021, doi: 10.1016/j.bbadis.2021.166204. 5.187
4 细胞

MV4-11; Kasumi-1; NB4

(白血病细胞)

 Y.   Du, M. Han, K. Cao, Q. Li, J. Pang, L. Dou, S. Liu, Z. Shi, F. Yan and S.   Feng, “Gold   Nanorods Exhibit Intrinsic Therapeutic Activity via Controlling N6‑Methyladenosine   Based Epitranscriptomics in Acute Myeloid   Leukemia”, ACS Nano, 2021, doi:   10.1021/acsnano.1c05547. 15.881
5 组织

(人软骨组织)

 H.   Ren, J. Yong, Q. Yang, Z. Yang, Z. Liu, Y. Xu, H. Wang, X. Jiang, W. Miao, X.   Li, “Contribution   of ferroptosis and GPX4’s dual functions to osteoarthritis progression”,   EBioMedicine, 2022, doi: 10.1016/j.ebiom.2022.103847. 8.143
6 组织

(小鼠肺、肝脏、肾脏)

 T.   Wu, X. Wang, M. Chen, X. Zhang, J. Zhang, J. Cheng, L. Kong, M. Tang,”Respiratory exposure to graphene   quantum dots causes fibrotic effects on lung, liver and kidney of mice”,   Food Chem. Toxicol., 2022, doi: 10.1016/j.fct.2022.112971. 6.023
7 组织

(小鼠海马组织)

 T.   Wu, X. Wang, J. Cheng, X. Liang, Y. Li, M. Chen, L. Kong and M. Tang, “Nitrogen‑doped   graphene quantum dots induce ferroptosis through disrupting calcium   homeostasis in microglia”, Part. Fibre Toxicol., 2022,   doi: 10.1186/s12989-022-00464-z. 9.4
8 组织

(宫颈管粘膜)

 T.   Wang, M. Gong, Y. Cao, C. Zhao, Y. Lu, Y. Zhou, S. Yao, J. Chen, C. Zhao and   R. Ju, “Persistent   ferroptosis promotes cervical squamous intraepithelial lesion development and   oncogenesis by regulating KRAS expression in patients with high risk-HPV   infection”, 2022, Cell Death Discovery, doi:   10.1038/s41420-022-01013-5. 5.241
9 组织

(小鼠肺组织)

 M.   Li, L. Fu, B. Lv, Y. Xiang, H. Xiang, D. Xu, H. Zhao, “Arsenic   induces ferroptosis and acute lung injury through mtROS-mediated   mitochondria-associated endoplasmic reticulum membrane dysfunction”,   Ecotoxicol. Environ. Saf., 2022, doi: 10.1016/j.ecoenv.2022.113595. 6.291
10 细胞

BEL-7402, SMMC-7721

(人肝癌细胞系)

 L.   Guan, F. Wang, M. Wang, S. Han, Z. Cui, S. Xi, H. Xu and S. Li, “Downregulation of HULC   Induces Ferroptosis in Hepatocellular Carcinoma via Targeting of the   miR-3200-5p/ATF4 Axis”, 2022, Oxid. Med. Cell.   Longevity, doi: 10.1155/2022/9613095. 6.543
11 组织

(小鼠肺部组织)

 Z.   Zeng, H. Huang, J. Zhang, Y. Liu, W. Zhong, W. Chen, Y. Lu, Y. Qiao, H. Zhao,   X. Meng, F. Zou, S. Cai, H. Dong, “HDM induce airway   epithelial cell ferroptosis and promote inflammation by activating ferritinophagy in asthma”,   FASEB J., 2022, doi: 10.1096/fj.202101977RR. 5.191
12 组织

(大豆叶片)

 Y.   Cheng, H. Zhang, W. Zhu, Q. Li, R. Meng, K. Yang, Z. Guo, Y. Zhai, R. Ji, H.   Peng, D. Dou, M. Jing, “Ferroptosis   induced by the biocontrol agent Pythium oligandrum enhances   soybean resistance to Phytophthora sojae”,   Environ. Microbiol., doi: 10.1111/1462-2920.16248. 5.476
13 组织

(小鼠睾丸组织)

 Y.   Zhao, H. Zhang, J. Cui, J. Wang, M. Chen, H. Wang, X. Li, J. Li, “Ferroptosis is   critical for phthalates driving the blood-testis barrier dysfunction via   targeting transferrin receptor”, Redox Biol., 2022,   doi: 10.1016/j.redox.2022.102584. 10.787
14 组织

(小鼠结肠组织)

 F.   Yang, Y. Chen, Y. Xiao, H. Jiang, Z. Jiang, M. Yang, M. Li, Y. Su, Z. Yan, Y.   Lin, D. Li, “pH-sensitive   Molybdenum (Mo)-based polyoxometalate nanoclusters have therapeutic efficacy   in Inflammatory Bowel disease by counteracting ferroptosis”, Pharmacol.   Res., 2023, doi: 10.1016/j.phrs.2023.106645. 10.334
15 组织

(小鼠肺部组织)

 W.   Tang, J. Qin, Y. Zhou, W. Wang, F. Teng, J. Liu, L. Yi, J. Cui, X. Zhu, S.   Wang, J. Dong, Y. Wei, “Regulation of   ferroptosis and ACSL4-15LO1 pathway contributed to the anti-asthma effect of   acupuncture”, Int. Immunopharmacol., 2023, doi:   10.1016/j.intimp.2022.109670. 5.714
16 组织

(小鼠心脏组织)

 H.   Hu, L. Li, H. Zhang, Y. Zhang, Q. Liu, M. Chen, J. Ning, Y. Pang, W. Hu, Y. Niu,   R. Zhang, “Mechanism   of YY1 mediating autophagy dependent ferroptosis in PM2.5 induced cardiac fibrosis”, Chemosphere, 2023,   doi: 10.1016/j.chemosphere.2023.137749. 8.943
17 细胞

(HK-2, 人肾皮质近曲小管上皮细胞)

 L.   Kang, D. Wang, T. Shen, X. Liu, B. Dai, D. Zhou, H. Shen, J. Gong, G. Li, Y.   Hu, P. Wang, X. Mi, Y. Zhang, X. Tan, “PDIA4 confers   resistance to ferroptosis via induction of ATF4/SLC7A11 in renal cell   carcinoma”, Cell Death Dis., 2023, doi:   10.1038/s41419-023-05719-x. 9.685
18 细胞

(HK-2, 人肾皮质近曲小管上皮细胞)

 C.   Dong, C. Song, Z. He, Q. Song, T. Song, J. Liu, Y. Xiong, X. Su, J. Zhou, X.   Yang, W. Liao, “Protective   efficacy of Schizandrin B on ameliorating   nephrolithiasis via regulating GSK3β/Nrf2 signaling-mediated ferroptosis in vivo   and in vitro”, 2023, Int. Immunopharmacol.,   doi:10.1016/j.intimp.2023.110042. 5.714
19 组织

(小鼠肺部组织)

 B.   Guo, Z. Zuo, X. Di, Y. Huang, G. Gong, B. Xu, L. Wang, X. Zhang, Z. Liang, Y.   Hou, X. Liu, Z. Hu, “Salidroside   attenuates HALI via IL-17A-mediated ferroptosis of alveolar   epithelial cells by regulating Act1-TRAF6-p38 MAPK pathway”, 2022,   Cell Commun. Signaling, doi: 10.1186/s12964-022-00994-1. 7.525
20 组织

(小鼠睾丸组织)

 J.   Ding, B. Lu, L. Liu, Z. Zhong, N. Wang, B. Li, W. Sheng, Q. He, “Guilu-Erxian-Glue   alleviates Tripterygium wilfordii polyglycoside-induced oligoasthenospermia in rats by   resisting ferroptosis via the Keap1/Nrf2/GPX4 signaling pathway”, Pharm.   Biol., 2023, doi:10.1080/13880209.2023.2165114. 3.889
21 细胞

(人髓核细胞)

 X.   Yang, Y. Chen, J. Guo, J. Li, P. Zhang, H. Yang, K. Rong, T. Zhou, J. Fu, J.   Zhao, “Polydopamine   Nanoparticles Targeting Ferroptosis Mitigate Intervertebral Disc Degeneration   Via Reactive Oxygen Species Depletion, Iron Ions Chelation, and GPX4   Ubiquitination Suppression”, Adv. Sci., 2023, doi:10.1002/advs.202207216. 17.521
22 组织

(小鼠心脏组织)

 J.   Pan, W Xiong, A. Zhang, H. Zhang, H. Lin, L. Gao, J. Ke, S. Huang, J. ZHang,   J. Gu, A. Chang, C. Wang, “The   Imbalance of p53–Park7 Signaling Axis Induces Iron Homeostasis Dysfunction in   Doxorubicin-Challenged Cardiomyocytes”, Adv. Sci, 2023,   doi:10.1002/advs.202206007. 17.521
23 细胞

(H9c2, 4T1)

 T.   Chen, Y. Qin, Y. Li, Y. Li, J. Luo, L. Fan, M. Feng, Z. Wang and Y. Zhao, “Chiral Polymer Micelles   Alleviate Adriamycin Cardiotoxicity via Iron Chelation and Ferroptosis   Inhibition”, Adv. Funct. Mater., 2023, doi:10.1002/adfm.202300689. 19.923
24 细胞

(乳腺癌细胞)

 Z.   ZHu, H. Shen, J. Xu, Z. Fang, G. Wo, Y. Ma, K. Yang, Y. Wang, Q. Yu, J.   Tang., “GATA3   mediates doxorubicin resistance by inhibiting CYB5R2-catalyzed iron reduction   in breast cancer cells”, Drug Resistance Updates, 2023,   doi:10.1016/j.drup.2023.100974. 22.841
25 组织

（the brains of 3 × Tg-AD mice）

 Xinlu Li, Jianfeng Chen, Wennuo Feng ,Chao Wang, Minyu Chen, Yifan Li, Jinghong Chen, Xinwei Liu, Qiong Liu, Jing Tian,“Berberine ameliorates iron levels and ferroptosis in the brain of 3 × Tg-AD mice”2023, PHYTOMEDICINE, doi:10.1016/j.phymed.2023.154962

 

 7.9
26 组织

（Testicular tissues）

 Lipeng Li , Zijie Pei , Ruiting Wu , Yaling Zhang , Yaxian Pang , Huaifang Hu , Wentao Hu , Zihan Geng , Tengfei Feng , Yujie Niu , Guimin Hao , Rong Zhang“FDX1 regulates leydig cell ferroptosis mediates PM2.5-induced testicular dysfunction of mice”，Ecotoxicology and Environmental Safety，2023，doi.org/10.1016/j.ecoenv.2023.115309 6.8
27 细胞（macrophage） Wenlin Yuan , Yuting Yang , Yingming Wei , Xufei Yu , Jiaqi Bao , Jiahui Zhong , Zhongxiu Wang , Lili Chen“Macrophage ferroptosis promotes MMP2/9 overexpression induced by hemin in hemorrhagic plaque”，Thromb Haemost，2023，doi.org/10.1016/j.intimp.2023.110916 6.7
28 细胞（HT-22） Zixuan Yuan,ORCID,Xiaoming Zhou ,Yan Zou ,Bingtao Zhang ,Yao Jian ,Qi Wu ,Shujuan Chen and Xin Zhang“Hypoxia Aggravates Neuron Ferroptosis in Early Brain Injury Following Subarachnoid Hemorrhage via NCOA4-Meditated Ferritinophagy”，Antioxidants，2023，doi.org/10.3390/antiox12122097 7.0

同仁化学Lipid Droplet Assay Kit-Deep Red试剂货号：LD06 脂滴荧光检测（深红色）| 日本DOJINDO

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Lipid Droplet Assay Kit-Deep Red试剂货号：LD06
脂滴荧光检测（深红色）
Lipid Droplet Assay Kit-Deep Red
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特点：

 

● 高特异性脂滴定位

● 可流式定量检测

● 多种颜色可供选择

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1set

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Lipid Droplet Assay Kit-Deep Red试剂货号：LD06 脂滴荧光检测（深红色）

Lipid Droplet Assay Kit-Deep Red试剂货号：LD06 脂滴荧光检测（深红色）

产品解说
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试剂盒内含
概述
原理
特点
实验例
脂肪滴产品选择指南
参考文献

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凑单关联产品TOP5

NO.1.    Annexin V, FITC Apoptosis Detection Kit    细胞凋亡检测

NO.2.    GSSG/GSH Quantification Kit II    氧化型/还原型谷胱甘肽定量

NO.3.    Iron Assay Kit -Colorimetric-    组织总铁含量及二价铁含量检测

NO.4.    Lipid Droplet Assay Kit-Blue    脂滴荧光检测（蓝色）

NO.5.    Mitophagy Detection Kit    线粒体自噬检测

 

试剂盒内含

Lipid Droplet Assay Kit-Deep Red试剂货号：LD06 脂滴荧光检测（深红色）

概述

同仁化学研究所研发的Lipid Droplet Assays Kit-Blue＆Deep Red试剂盒，与油红O和尼罗红不同，只需简单操作即可选择性的检测LDs。与尼罗红相比试剂盒中的染色剂，具有更好的选择性，从而将荧光背景降低到最小值。此外，试剂盒中的Loading Buffer可维持检测过程中细胞的状态完好。本试剂盒可使用流式细胞仪检测活细胞或固定细胞，也可用于荧光酶标仪进行高通量检测。

原理

脂滴(脂肪滴，Lipid droplets, LDs)由中性脂肪组成，主要包括甘油三酯和胆固醇酯，其外层被一层单层磷脂分子包裹。而且脂滴不仅在脂肪细胞中存在，在真核生物中也普遍存在。最新的研究表明，以前认为脂滴仅是一个简单的脂质储存器，但最近的研究表明其在调节脂质代谢1)，自噬2)和细胞衰老3)等方面都起着重要作用，因此需要进一步详细地研究脂滴形成·成长·融合·分解的机制。Lipi系列探针是高脂肪亲油性小分子探针，可在疏水环境例如脂滴中发出强荧光。Lipi探针染色后，无须洗涤即可观察到脂滴。

Lipid Droplet Assay Kit-Deep Red试剂货号：LD06 脂滴荧光检测（深红色）

1) T. Fujimoto et al., “Lipid droplets: a classic organelle with new outfits.” Histochem Cell Biol., 2008, 130(2), 263.

2) R. Singh et al., “Autophagy regulates lipid metabolism.” Nature, 2009, 458(7242), 1131.

3) M. Yokoyama et al., “Inhibition of endothelial p53 improves metabolic abnormalities related to dietary obesity.” Cell Reports, 2014, 7(5), 1691.

特点

特点1：定量专用试剂盒

试剂盒包含所需的工作液和缓冲液、可以简便实现定量脂滴。

Lipid Droplet Assay Kit-Deep Red试剂货号：LD06 脂滴荧光检测（深红色）

特点2：大幅度缩短操作，活细胞也可以使用

Lipid Droplet Assay Kit中使用的荧光染料可用于活细胞和固定细胞。因此，与使用比色法试剂相比可以大大缩短检测所需的时间。此外，由于染料不会沉积在孔板上，所以可以提高实验的重现性。

Lipid Droplet Assay Kit-Deep Red试剂货号：LD06 脂滴荧光检测（深红色）

实验例

实验例1：孔板检测实验例

将油酸或Triacsin C(acyl-CoA synthetase抑制剂）分别加入到A549细胞中，并使用Lipid Droplet Assay Kit对脂滴的变化进行定量。结果表明，与对照和加入Triacsin C的细胞相比，加入油酸的细胞中脂滴量有所增加。

Lipid Droplet Assay Kit-Deep Red试剂货号：LD06 脂滴荧光检测（深红色）

<检测条件>

Blue：Ex: 376 – 386 nm、 Em: 435 – 455 nm

Deep Red ：Ex: 623 – 633 nm、 Em: 649 – 669 nm

实验例2：流式细胞术的实验例

将油酸或Triacsin C(acyl-CoA synthetase抑制剂）分别加入到HeLa细胞中，并使用Lipid Droplet Assay Kit对脂滴的变化进行定量。结果表明，与对照和加入Triacsin C的细胞相比，加入油酸的细胞中脂滴量有所增加。

Lipid Droplet Assay Kit-Deep Red试剂货号：LD06 脂滴荧光检测（深红色）

< 检测条件>

Blue：Ex: 405 nm、 Em: 425 – 475 nm

Deep Red ：Ex: 640 nm、 Em: 650 – 670 nm

脂肪滴产品选择指南

产品名称 规格 货号
成像(成像)

脂滴荧光探针

 Lipi-Blue 10 nmol LD01
Lipi-Green 10 nmol LD02
Lipi-Red 100 nmol LD03
Lipi-Deep Red 10 nmol LD04
定量（荧光酶标仪，FCM）
脂滴荧光检测试剂盒		 Lipid Droplet Assay Kit – Blue 1 set LD05
Lipid Droplet Assay Kit – Deep Red 1 set LD06

参考文献

1. Fujimoto,T.et al., “Lipid droplets: a classic organelle with new outfits”Histochem Cell Biol., 2008, 130(2), 263.

2. Singh,R.et al., “Autophagy regulates lipid metabolism”Nature, 2009, 458(7242), 1131.

3. Yokoyama, M.et al., “Inhibition of endothelial p53 improves metabolic abnormalities related to dietary obesity”Cell Reports, 2014, 7(5), 1691.

4. Oka, M.et al.,  “Exogenous Cytokine-Free Differentiation of Human Pluripotent Stem Cells into Classical Brown Adipocytes”, Cells., 2019, 8, (4), 373.

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同仁化学Lipid Droplet Assay Kit-Blue试剂货号：LD05 脂滴荧光检测（蓝色）| 日本DOJINDO

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Lipid Droplet Assay Kit-Blue试剂货号：LD05
脂滴荧光检测（蓝色）
Lipid Droplet Assay Kit-Blue
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特点：

 

● 高特异性脂滴定位

● 可流式定量检测

● 多种颜色可供选择

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Lipid Droplet Assay Kit-Blue试剂货号：LD05 脂滴荧光检测（蓝色）

Lipid Droplet Assay Kit-Blue试剂货号：LD05 脂滴荧光检测（蓝色）

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概述
原理
特点
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NO.1.    Annexin V, FITC Apoptosis Detection Kit    细胞凋亡检测

NO.2.    Lipid Droplet Assay Kit-Blue    脂滴荧光检测（蓝色）

NO.3.    Lipid Droplet Assay Kit-Deep Red    脂滴荧光检测（深红色）

NO.4.    Glucose    葡萄糖摄取检测

NO.5.    Lactate Assay Kit-WST    乳酸检测

 

试剂盒内含

Lipid Droplet Assay Kit-Blue试剂货号：LD05 脂滴荧光检测（蓝色）

概述

同仁化学研究所研发的Lipid Droplet Assays Kit-Blue＆Deep Red试剂盒，与油红O和尼罗红不同，只需简单操作即可选择性的检测LDs。与尼罗红相比试剂盒中的染色剂，具有更好的选择性，从而将荧光背景降低到最小值。此外，试剂盒中的Loading Buffer可维持检测过程中细胞的状态完好。本试剂盒可使用流式细胞仪检测活细胞或固定细胞，也可用于荧光酶标仪进行高通量检测。

原理

脂滴(脂肪滴，Lipid droplets, LDs)由中性脂肪组成，主要包括甘油三酯和胆固醇酯，其外层被一层单层磷脂分子包裹。而且脂滴不仅在脂肪细胞中存在，在真核生物中也普遍存在。最新的研究表明，以前认为脂滴仅是一个简单的脂质储存器，但最近的研究表明其在调节脂质代谢1)，自噬2)和细胞衰老3)等方面都起着重要作用，因此需要进一步详细地研究脂滴形成·成长·融合·分解的机制。Lipi系列探针是高脂肪亲油性小分子探针，可在疏水环境例如脂滴中发出强荧光。Lipi探针染色后，无须洗涤即可观察到脂滴。

Lipid Droplet Assay Kit-Blue试剂货号：LD05 脂滴荧光检测（蓝色）

1) T. Fujimoto et al., “Lipid droplets: a classic organelle with new outfits.” Histochem Cell Biol., 2008, 130(2), 263.

2) R. Singh et al., “Autophagy regulates lipid metabolism.” Nature, 2009, 458(7242), 1131.

3) M. Yokoyama et al., “Inhibition of endothelial p53 improves metabolic abnormalities related to dietary obesity.” Cell Reports, 2014, 7(5), 1691.

特点

特点1：定量专用试剂盒

试剂盒包含所需的工作液和缓冲液、可以简便实现定量脂滴。

Lipid Droplet Assay Kit-Blue试剂货号：LD05 脂滴荧光检测（蓝色）

特点2：大幅度缩短操作，活细胞也可以使用

Lipid Droplet Assay Kit中使用的荧光染料可用于活细胞和固定细胞。因此，与使用比色法试剂相比可以大大缩短检测所需的时间。此外，由于染料不会沉积在孔板上，所以可以提高实验的重现性。

Lipid Droplet Assay Kit-Blue试剂货号：LD05 脂滴荧光检测（蓝色）

实验例

实验例1：孔板检测实验例

将油酸或Triacsin C(acyl-CoA synthetase抑制剂）分别加入到A549细胞中，并使用Lipid Droplet Assay Kit对脂滴的变化进行定量。结果表明，与对照和加入Triacsin C的细胞相比，加入油酸的细胞中脂滴量有所增加。

Lipid Droplet Assay Kit-Blue试剂货号：LD05 脂滴荧光检测（蓝色）

<检测条件>

Blue：Ex: 376 – 386 nm、 Em: 435 – 455 nm

Deep Red ：Ex: 623 – 633 nm、 Em: 649 – 669 nm

实验例2：流式细胞术的实验例

将油酸或Triacsin C(acyl-CoA synthetase抑制剂）分别加入到HeLa细胞中，并使用Lipid Droplet Assay Kit对脂滴的变化进行定量。结果表明，与对照和加入Triacsin C的细胞相比，加入油酸的细胞中脂滴量有所增加。

Lipid Droplet Assay Kit-Blue试剂货号：LD05 脂滴荧光检测（蓝色）

< 检测条件>

Blue：Ex: 405 nm、 Em: 425 – 475 nm

Deep Red ：Ex: 640 nm、 Em: 650 – 670 nm

脂肪滴产品选择指南

产品名称 规格 货号
成像(成像)

脂滴荧光探针

 Lipi-Blue 10 nmol LD01
Lipi-Green 10 nmol LD02
Lipi-Red 100 nmol LD03
Lipi-Deep Red 10 nmol LD04
定量（荧光酶标仪，FCM）
脂滴荧光检测试剂盒		 Lipid Droplet Assay Kit – Blue 1 set LD05
Lipid Droplet Assay Kit – Deep Red 1 set LD06

参考文献

1. Fujimoto,T.et al., “Lipid droplets: a classic organelle with new outfits”Histochem Cell Biol., 2008, 130(2), 263.

2. Singh,R.et al., “Autophagy regulates lipid metabolism”Nature, 2009, 458(7242), 1131.

3. Yokoyama, M.et al., “Inhibition of endothelial p53 improves metabolic abnormalities related to dietary obesity”Cell Reports, 2014, 7(5), 1691.

4. Oka, M.et al.,  “Exogenous Cytokine-Free Differentiation of Human Pluripotent Stem Cells into Classical Brown Adipocytes”, Cells., 2019, 8, (4), 373.

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同仁化学α-Ketoglutarate Assay Kit-Fluorometric货号：K261 α-酮戊二酸(α-KG)检测试剂盒(荧光法)| 日本DOJINDO

发表于由

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α-Ketoglutarate Assay Kit-Fluorometric货号：K261
α-酮戊二酸(α-KG)检测试剂盒(荧光法)
α-Ketoglutarate Assay Kit-Fluorometric
商品信息
储存条件：0-5度保存
运输条件：常温

特点：

 

● 检测结果的重现性好

● 可作为线粒体活性的指标

● 多角度了解细胞代谢变化

下载说明书

选择规格：
100tests

现货

α-Ketoglutarate Assay Kit-Fluorometric货号：K261 α-酮戊二酸(α-KG)检测试剂盒(荧光法)

α-Ketoglutarate Assay Kit-Fluorometric货号：K261 α-酮戊二酸(α-KG)检测试剂盒(荧光法)

产品解说
规格性状
产品概述
检测原理
检测操作
标准曲线的作成例
实验例
常见问题Q&A

产品解说

 

规格性状

100 tests     ・Fluorescent Dye
・α-KG   Standard
・Enzyme Mix
・Coenzyme
・Assay Buffer
・lysis Solution
・Control Buffer
・ALT   Solution
・Reaction Buffer		 ×1
300 μl×1
×1
×1
6.5 ml×1
2 ml×1
25 ml×1
35 μl×1
5 ml×1

产品概述

α-酮戊二酸(α-KG)是TCA循环中重要的中间体。它被作为进入TCA循环的葡萄糖代谢物增加的指标以及谷氨酰胺代谢(Glutaminolysis,一种谷氨酰胺底物与α-KG反应的通路)增加的指标。α-KG在神经递质谷氨酸和γ-氨基丁酸（GABA）的产生中起着重要作用，不仅如此它还担负着一定的清除细胞内的活性氧的功能，是非常重要的细胞代谢指标之一。

检测原理

α-Ketoglutarate Assay Kit-Fluorometric可以定量检测α-酮戊二酸(α-KG)。通过检测反应生成的试卤灵(Resorufin)的荧光(Ex：530 – 560 nm、Em：580 – 600 nm)对细胞内的α-KG进行定量。另外，本试剂盒还可以通过使用96孔板进行多样品检测。

α-Ketoglutarate Assay Kit-Fluorometric货号：K261 α-酮戊二酸(α-KG)检测试剂盒(荧光法)

检测操作

整个操作过程，从细胞的前处理到荧光酶标仪检测，只需要按照操作说明书的步骤添加试剂即可检测细胞内α-酮戊二酸(α-KG)的浓度。而且，本试剂盒专门针对同类型检测方法中普遍存在的结果重现性差的问题进行了优化，即使是第一次做α-KG检测实验的科研人员也可以放心使用。

► 结果重现性高的两个秘诀

1) 样品的前处理

α-Ketoglutarate Assay Kit-Fluorometric货号：K261 α-酮戊二酸(α-KG)检测试剂盒(荧光法)

同类型的检测试剂盒在样品前处理时需要微量的pH调节、过滤膜过滤等操作，这是导致结果重现性差的原因之一。而同仁化学研究所的α-KG检测试剂盒，只需要按照说明书添加试剂，可以大幅减少前处理过程中产生的操作误差。

2) α-Ketoglutarate的检测

α-Ketoglutarate Assay Kit-Fluorometric货号：K261 α-酮戊二酸(α-KG)检测试剂盒(荧光法)

其他检测试剂盒使用与上图相同的原理，但是由于①和②的两步反应同时在96孔板里进行，这是造成误差的另一个重要原因。而同仁化学研究所的试剂盒将这两步反应分开进行，进一步降低了误差。

标准曲线的作成例

本试剂盒附带α-KG的标准品，可以通过制作标准曲线来定量的检测样品中的α-KG浓度。如果样品中的α-KG浓度高于20 μmol/l，请预先稀释样品再检测。

α-Ketoglutarate Assay Kit-Fluorometric货号：K261 α-酮戊二酸(α-KG)检测试剂盒(荧光法)

实验例

Doxorubicin(DOX)刺激引起的细胞内代谢变化

阿霉素(Doxorubicin, DOX)可以作用于 细胞周期的G2/M期，停止细胞的增殖并且细胞衰老，利用DOX作用于A549细胞，会导致胞内α-KG浓度增加。另外通过SG 03 Cellular Senescence Detection Kit – SPiDER-βGal检测细胞衰老、C548 Cell Cycle Assay Solution Deep Red / C549 Cell Cycle Assay Solution Blue检测细胞周期、MT09 JC-1 MitoMP Detection Kit检测线粒体膜电位的结果如下：

α-Ketoglutarate Assay Kit-Fluorometric货号：K261 α-酮戊二酸(α-KG)检测试剂盒(荧光法)

α-Ketoglutarate Assay Kit-Fluorometric货号：K261 α-酮戊二酸(α-KG)检测试剂盒(荧光法)

 

α-Ketoglutarate Assay Kit-Fluorometric货号：K261 α-酮戊二酸(α-KG)检测试剂盒(荧光法)α-Ketoglutarate Assay Kit-Fluorometric货号：K261 α-酮戊二酸(α-KG)检测试剂盒(荧光法)

Sulfasalazine(SSZ)引起的细胞内代谢变化

Sulfasalazine(SSZ)可以抑制细胞的胱氨酸/谷氨酸转运体(xCT)。用SSZ刺激A549细胞后，细胞内的α-KG、ATP、GSH、细胞放出的谷氨酸等变化用下列方法进行了检测。结果发现，SSZ刺激后细胞内的ATP、谷胱甘肽(GSH)、谷氨酸的放出量均减少，而细胞内的α-KG和ROS水平增加。α-Ketoglutarate Assay Kit-Fluorometric货号：K261 α-酮戊二酸(α-KG)检测试剂盒(荧光法)

<使用产品>

・细胞内ATP：CK18 Cell Counting Kit-Luminescence

・细胞内GSH：G263 GSSG/GSH Quantification Kit II

・细胞内ROS：R252 ROS Assay Kit -Highly Sensitive DCFH-DA-

・胞外谷氨酸：G269 Glutamate Assay Kit-WST

 

 

<实验条件>

细胞：A549细胞(1 x 106 cells) 暴露时间： 48 h

 

α-Ketoglutarate Assay Kit-Fluorometric货号：K261 α-酮戊二酸(α-KG)检测试剂盒(荧光法)α-Ketoglutarate Assay Kit-Fluorometric货号：K261 α-酮戊二酸(α-KG)检测试剂盒(荧光法)

α-Ketoglutarate Assay Kit-Fluorometric货号：K261 α-酮戊二酸(α-KG)检测试剂盒(荧光法)α-Ketoglutarate Assay Kit-Fluorometric货号：K261 α-酮戊二酸(α-KG)检测试剂盒(荧光法)α-Ketoglutarate Assay Kit-Fluorometric货号：K261 α-酮戊二酸(α-KG)检测试剂盒(荧光法)

参考文献) Shogo Okazaki et al., “Glutaminolysis-related genes determine sensitivity to xCT-targeted therapy in head and neck squamous cell carcinoma”. Cancer Sci., 2019, doi:10.1111/cas.14182.

NASH诱导小鼠的肝脏组织的代谢变化

NASH(非酒精性脂肪肝)的病变组织中有ATP、α-KG、NAD的量减少的特点。使用4周龄的高脂肪食物投喂(引发NASH)的1型糖尿病模型小鼠(STAM模型)的肝脏组织，检测其中的ATP、α-KG、NAD水平的变化。结果显示，NASH诱导后10周龄的小鼠组中ATP、α-KG、NAD的浓度降低。

α-Ketoglutarate Assay Kit-Fluorometric货号：K261 α-酮戊二酸(α-KG)检测试剂盒(荧光法)

※详细的实验步骤请参考FAQ“是否有检测组织的实验例

 

<使用产品>

 

・组织内ATP：CK18 Cell Counting Kit-Luminescence

・组织内NAD：N509 NAD/NADH Assay Kit-WST

 

<实验参考文献>

 

ATP Francesco   Bellanti, et al., “Synergistic   interaction of fatty acids and oxysterols impairs mitochondrial function and   limits liver adaptation during nafld   progression”, Redox Biology, 2018, 15, 86-96.
α-KG Jianjian   Zhao, et al., “The   mechanism and role of intracellular α-ketoglutarate reduction in hepatic   stellate cell activation”, Bioscience Reports, 2020, 40, (3).
Ali Canbay, et al., “L‑Ornithine   L‑Aspartate (LOLA) as a Novel Approach for Therapy of Non‑alcoholic Fatty   Liver Disease”, Drugs, 2019, 79, 39-44.
NAD Jinhan   He, et al., “Activation   of the Aryl Hydrocarbon Receptor Sensitizes Mice to Nonalcoholic   Steatohepatitis by Deactivating Mitochondrial Sirtuin Deacetylase   Sirt3”, Mol.   and Cell. Biol., 2013, 33, (10),   2047-55.

 

 

常见问题Q&A

Q1：每个试剂盒可以检测所少个样品？
A1：如果标准曲线和样品都采用3个复孔来计算，可以检测12个样品。具体的96孔板的样品孔排列实例请见说明书。

 

Q2：是否可以用黑色孔板以外的孔板（透明板或白色板）？
A2：用透明板或白色板无法准确的绘制标准曲线，请使用黑色96孔板进行实验

 

Q3：检测时样品没有显色，可能的原因有哪些？
A3：本试剂盒对α-KG的检测范围是0.2 μmol/l以上，样品中的α-KG浓度如果低于0.2 μmol/l无法检测出来。可以尝试降低样品前处理时的稀释倍率。
Q：配置好的Working Solution能否保存？
A：配置好的Working solution无法保存，请现配现用。另外，Working solution遇光不稳定，配制好后请用铝箔纸包裹避光。※避光、室温的条件下可保存2小时左右。
Q：检测样品是否可以保存？
A：操作说明书上的“—定量细胞内α-KG的样品制备—”的步骤5中得到的前处理样品在-20℃可以保存10天。冷冻保存后的样品会发生沉淀，请离心后取上清作为检测样品。※加入20 μl Lysis solution, 吹打混匀后8,000xg离心10 min，取上清。
Q：是否有组织样品的检测实例？
A：有小鼠肝脏组织的检测实例。

具体的实验步骤如下：

 

碱性提取法提取的肝脏样品中的代谢指标检测

 

1.取大约100 mg小鼠肝脏组织样品加至500μl预冷的0.5 mol/ KOH水溶液中。

※必须使用经过灌流操作完全脱血的组织样品，否则残留的血液会影响检测结果。

2.用Dounce型组织研磨器研磨肝脏组织。

3.将研磨后的样品回收至微管中，用500μl预冷的0.5 mol/ KOH水溶液清洗研磨器，并将清洗后的液体也

一起转移到回收样品的微管中(共约1 ml)。

4.向回收样品的微管中加入1 ml预冷的超纯水，充分混合后在冰浴上静置5 min(共约2 ml)。

※由于溶液的粘性较高，有时会出现离心后难以分离的情况。此时，用25 g左右的细针头注射器不断

吸取/推出(大约20-30次)，直到可以顺畅的吹打溶液为止。

5.离心机12,000xg，4 ℃离心5 min。

α-KG检测用样品的制备

 

6.取900μl上一步操作(步骤5)得到的溶液，加入200μl 1mol/l KH2PO4水溶液进行中和，混匀后在冰浴上

静置5 min。

7.离心机12,000xg，4 ℃离心5 min，取1 ml上清液至新的微管中作为检测样品。

 

<检测时的注意事项>

※组织提取的样品无法保存，请在当天内完成检测。

※枪头中残留的样品溶液时造成误差的原因之一，吸取样品溶液时尽量缓慢，减少枪头中残留的样品溶液。

※在稀释标准品和样品的时候，使用0.5 mol/l KOH水溶液和1mol/l KH2PO4水溶液按照9:5比率混合的溶液。

 

<检测实例>

诱导非酒精性脂肪肝的小鼠肝脏组中α-KG量的变化

α-Ketoglutarate Assay Kit-Fluorometric货号：K261 α-酮戊二酸(α-KG)检测试剂盒(荧光法)

同仁化学Glucose Assay Kit-WST试剂盒货号：G264| 日本DOJINDO

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上海金畔社生物科技有限公司日本同仁化学dojindo全线产品代理 中国代理商

Glucose Assay Kit-WST试剂盒货号：G264
葡萄糖检测试剂盒
Glucose Assay Kit-WST
商品信息
储存条件：0-5度保存，避光防潮
运输条件：室温

特点：

 

● 细胞上清液和细胞样品均适用

● 稳定性好

●可使用酶标仪高通量筛选

下载说明书
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代谢宣传资料
葡萄糖乳酸检测

选择规格：
50 tests
200 tests

现货

代谢

Glucose(葡萄糖)摄取能力检测试剂盒

Glucose Assay Kit-WST试剂盒货号：G264

Glucose Assay Kit-WST试剂盒货号：G264
Glucose Assay Kit-WST试剂盒货号：G264

产品解说
活动进行中
试剂盒内含
概述
原理
操作步骤
制作葡萄糖标准曲线
实验例
常见问题Q&A
参考文献

产品解说

 

活动进行中

订购满5000元，200元礼品等你拿

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NO.5.    Liperfluo    细胞脂质过氧化物检测

 

试剂盒内含

50 tests 200 tests
Dye Mixture ×1 ×1
葡萄糖标准品（10 mmol/l）(红盖) 150 μl×1 600 μl×1
酶(绿盖) ×1 ×1
Assay Buffer 3.5 ml×1 14 ml×1
Reconstitution Buffer(蓝盖) 350 μl×1 1.4 ml×1

概述

葡萄糖是一种提供体内能量来源的最重要的物质，也是一种主要能量代谢指标。它不仅是糖尿病和肥胖研究的糖代谢指标，在癌症研究中，也常和乳酸一起作为体内细胞代谢的检测指标。最新的研究表明，抑制与葡萄糖代谢和脂质代谢有关的酶的活性，可以抑制癌细胞的生长。

葡萄糖检测试剂盒（Glucose Assay Kit-WST）可以定量检测能量代谢的底物-葡萄糖，通过测定WST反应的吸光度来定量细胞培养基上清液中的葡萄糖。检测限可达浓度为0.02 mmol/l的葡萄糖，适合用96孔板检测，可以同时检测多个样品。

原理

*本试剂盒可以检测细胞上清液＊的葡萄糖的含量，通过检测WST甲赞的吸光度来测定。另外，试剂盒里有葡萄糖标准液，可以制作标准曲线，测定样品中的葡萄糖浓度。

Glucose Assay Kit-WST试剂盒货号：G264

*要测定细胞上清液以外的样品，请事先查看常见问题FAQ“是否有检测细胞上清液以外的实验例?”。

操作步骤

Glucose Assay Kit-WST试剂盒货号：G264

制作葡萄糖标准曲线

可以用试剂盒中的葡萄糖标准液制作出葡萄糖标准曲线，然后通过标准曲线求出样品中的葡萄糖浓度。当葡萄糖浓度在0.5 mmol/l以上时，可以通过稀释样品进行检测。

Glucose Assay Kit-WST试剂盒货号：G264

实验例

用Phloretin抑制葡萄糖的摄取

1. 制备所需浓度Phloretin的Jurkat细胞悬液 (5×105 cells/ml，在RPMI培养基中含有10%的胎牛血清和1%的青霉素-链霉素)。

2. 在6孔板中接种1×106 cells/孔的细胞悬液，在37℃，5% CO2培养箱中过夜培养。

3. 将细胞悬液转移到锥形管中，在1,500 rpm离心5 min。

4. 吸取100 µl上清液至1.5 ml微型管中，用超纯水稀释30倍。

5. 按照葡萄糖标准液的制备方法制备葡萄糖标准液。

6. 在96孔板中分别加入50 µl的样品或葡萄糖标准液。

7. 在每孔中加入50 µl工作液。

8. 在37℃培养箱中培养30 min。

9. 用酶标仪检测450 nm处的吸光度，根据葡萄糖的标准曲线计算样品的葡萄糖浓度。

Glucose Assay Kit-WST试剂盒货号：G264

Phloretin抑制葡萄糖的摄取

实验证实，细胞培养基上清液中的葡萄糖摄入量减少与Phloretin (一种葡萄糖转运抑制剂)浓度之间有依存关系。

常见问题Q&A

Q1：是否可以检测2-Deoxy-D-glucose？
A1：可以检测2-Deoxy-D-glucose。
Q2：Working Solution的稳定性如何？
A2：Working   Solution无法保存，请现配现用。由于对光不稳定，因此配制后请避光，在室温和避光条件下可保存4小时（当Working   Solution在曝光下，溶液颜色会由红色变为橙色，背景升高）。
Q3：当有还原性物质存在时是否还可以用这个试剂盒检测？
A3：如果样品中含有还原性的物质，则也会和WST染料发生显色，此时无法准确定量葡萄糖浓度。实验中如遇到以上情况，可以设定药物对照（不含细胞含药物的培养基+试剂）作为背景对照，并从标准曲线和样品的吸光度中减去它。
Q4：是否有检测细胞上清液以外的实验例?
A4：有测定细胞内葡萄糖的实验例。操作详情，请参考常见问题FAQ“Q5”。其他的样品没有实验例。
Q5：是否可以检测细胞内葡萄糖？
A5：细胞内葡萄糖也可以检测，请参考下面的样品制备步骤。
 

请准备「0.1%Triton X-100水溶液」和「滤膜（分子量：10KD ）」

（1）将细胞*1悬液收于1.5 ml微量管中。

※测定所需的细胞数，需要根据细胞种类进行调整。
HepG2细胞和Jurkat细胞的测量结果如下图所示
（2）在300×g下离心5分钟，去除上清液。
(3)加入300 µl PBS，重悬细胞，在300×g下离心5分钟，除去上清液。
(4)加入250 µl细胞溶解液*2(0.1%Triton-X)，裂解细胞后，在12,000×g离心5分钟。
(5)将操作(4)的上清液200 µl转移到超滤膜过滤管(分子量：10K)中，以12,000×g离心10分钟。
※当测定样品为n=3时，总共需要150 µl以上(50 µl×3)。
※离心后的滤液不超过150 µl时，请延长离心时间。
(6)将通过操作(5)得到的滤液作为测定样品。
然后按照使用说明书，测定葡萄糖浓度。
※测定试样在标准曲线范围内(0-0.5 mmol/l)内，请适当用细胞溶解液稀释，用于测定。
*1 为了检测0.02 mmol/l以上的葡萄糖，HepG2细胞数量为1×105cells以上，Jurket细胞需要2×106 cells以上的细胞数量。
*2 细胞溶解液中含有SDS会抑制显色，因此不能使用含有SDS的缓冲液。

 

Q6:一个试剂盒可以检测样品的数量。
A6：制备标准曲线和样品（n=3）时，可以检测的样品数量如下所示。

Glucose Assay Kit-WST试剂盒货号：G264

标准曲线：8个点(0, 0.0157, 0.0313, 0.0625, 0.125, 0.25, 0.5, 1 mmol/l)(n=3)

Glucose Assay Kit-WST试剂盒货号：G264

96孔板排列示意图（n=3）
Q7:可以测量L-Glucose吗？
A7：本产品用于β-D-Glucose测量，不能测量L-Glucose。

参考文献

No 检测对象 文献
1 小鼠血清 Increased levels of Aβ42 decrease the lifespan of ob/ob mice with dysregulation of microglia and astrocytes, FASEB   J., 2019,DOI: 10.1096/fj.201901028RR
2 链霉菌 Enhancement of metabolic flux toward ε-poly-l-lysine biosynthesis by targeted inactivation of concomitant polyene macrolide biosynthesis in Streptomyces albulus, J. Biosci.Bioeng., 2020,DOI: 10.1016/j.jbiosc.2019.12.002
3 HCT116细胞 Serine racemase enhances growth of colorectal cancer by producing pyruvate from serine, Nat. Metab., 2020, 2(1), 81
4 P388白血病细胞 2-Deoxy-D-glucose enhances the anti-cancer effects of idarubicin on idarubicin-resistant P388 leukemia cell, Oncol. Lett., 2020, 20(1), 962-966
5 小鼠精子细胞 Macrophage ubiquitin‑specific protease 2 contributes to motility, hyperactivation,   capacitation, and in vitro fertilization activity of mouse sperm, Cellular and Molecular Life Sciences, 2020, doi:   10.1007/s00018-020-03683-9

 

*要测定细胞培养上清液以外的样品，请事先查看常见问题FAQ“是否有除检测细胞上清液以外的样品检测实验例”。