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特点：
● 使用荧光显微镜、荧光酶标仪或流式细胞仪即可快速检测
● 简便操作即可检测氨基酸摄取能力
※注意：您选择的孔板类型会对实验结果产生重大影响。并非所有孔板都与本检测方法兼容。
您可以下拉参考网站“常见问题Q&A”，查看推荐的孔板及其对检测结果的影响。
产品解说
规格性状
产品概述
氨基酸是合成蛋白质和核酸的重要来源，对于增殖活性异常活跃的癌细胞来说尤其重要。不仅如此，癌细胞由于其自身糖酵解途径的亢进，造成乙酰辅酶A(Acetoacetyl-CoA)供应的减少，更加剧了对TCA循环来源之一的氨基酸的需求。基于此方面的研究发现，癌细胞中氨基酸转运体LAT1(L-type amino acid transporter 1)的表达明显增高，说明氨基酸的大量摄取是癌细胞的普遍特征之一。这一发现也有望成为癌症药物研发的新靶点。
在癌症免疫治疗领域，治疗效果不仅与癌细胞的代谢变化有关，免疫细胞的代谢调控也至关重要。例如，随着免疫细胞的衰老，代谢平衡的改变会导致免疫细胞对癌细胞的杀伤能力减弱。因此，通过调控免疫细胞的代谢来改善免疫治疗效果的研究也十分盛行。
氨基酸类似物(BPA)通过氨基酸转运体吸收到细胞后，探针穿透细胞膜并与氨基酸类似物结合，发出荧光(λex=360 nm，λem=460 nm)。本试剂盒可使用荧光显微镜、荧光酶标仪和流式细胞仪检测，通过可视化和数值化的检测评价细胞摄取氨基酸的能力，以及氨基酸转运体抑制剂的筛选。
本试剂盒是在日本大阪府立大学切畑光统(Kirihata Mitsunori)教授提供情报和指导下开发的产品。
运用领域
抑制氨基酸的吸收是癌症药物开发和筛选的靶点之一。此外，通过比较正常细胞和癌细胞的氨基酸吸收能力，还可以了解癌细胞的恶性程度及其细胞特征。
操作步骤
实验例
使用本试剂盒检测BCH(氨基酸转运体抑制剂)对HeLa细胞摄取氨基酸能力的阻碍作用。
＜检测条件＞
细胞：HeLa cells
培养基：MEM （5.5 mmol/l Glucose）
培养条件：1 mmol/l BCH/HBSS (Hanks’ Balanced Salt Solution), 37℃, 30 min
检测仪器：荧光酶标仪 (Ex=340-380 nm, Em: 435-485 nm)
检测仪器：荧光酶标仪 (Ex=360 nm, Em: 460 nm)
<检测条件>
检测仪器：流式细胞仪 (Ex=405 nm, Em: 425-475 nm)
与传统方法比较
与传统的同位素示踪法和代谢组学检测法相比，操作时间大幅减少。
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| 产品名 | 包装 | 价格 | 货号 |
| Glucose Uptake Assay Kit-Blue | 1 set | 3,980 | UP01 |
| Glucose Uptake Assay Kit-Green | 1 set | 3,980 | UP02 |
| Glucose Uptake Assay Kit-Red | 1 set | 3,980 | UP03 |
常见问题Q&A
| Q：推荐什么类型的微孔板？ |
| A：我们推荐以下几种微孔板
微孔板的类型对检测结果有何影响，请参考【Q&A:微孔板的类型会影响结果吗？】获取更多信息。 |
| Q：微孔板的类型会影响结果吗？ |
| A：是的。并非所有微孔板都与该测定兼容，有些微孔板可能无法进行某些测量（参见参考数据）。
建议使用以下板检测
<参考：微孔板之间的比较> 使用Ibidi板和其他制造商的微孔板，我们研究了HeLa细胞在氨基酸转运蛋白抑制剂BCH（2-氨基双环[2.2.1]庚烷-2-羧酸）存在下摄取氨基酸的能力。然而，我们无法确认BCH对吸收的抑制，因为与推荐的Ibidi板相比，在其他制造商的微孔板中观察到更高的背景。 荧光显微镜观察
荧光酶标仪检测结果
|
| Q：BPA是通过哪种转运蛋白进入细胞内的？ |
| A：有文献报道BPA是通过LAT1, LAT2, ATB0,+转运进入细胞的(Wongthai P et al., “Boronophenylalanine, a boron delivery agent for boron neutron capture therapy, is transported by ATB0,+, LAT1 and LAT2”, Cancer Sci., 2015, Mar;106(3):279-86)。此外，同仁化学也通过实验验证了BCH等LAT1的抑制剂、leucine等LAT1的底物对BPA摄取的抑制作用。 |
| Q：已经有检测实例的细胞系有哪些？ |
| A：贴壁细胞有HeLa, A549, HepG2, MCF-7, C2C12, MEF, U251；悬浮细胞有MOLT4。 |
| Q：BPA被细胞摄入后，是否会被分解或代谢掉？ |
| A：BPA的构造非常稳定，实验操作范围的过程中不会被分解。 |
| Q：BPA被细胞摄入后，能否进行固定化操作？ |
| A：由于探针会从细胞内向细胞外泄漏，所以无法进行染色后的固定化操作。 |
| Q：BPA被细胞摄入后，是否会在特定部位积累？ |
| A：被细胞摄取的BPA均匀的分布在细胞内。 |
| Q：BPA uptake solution，Working solution能否长时间保存？ |
| A： BPA uptake solution，Working solution无法长期保存，请现配现用。 |
| Q：如果荧光信号没有变化，我该怎么办？ |
| A：主要可能的原因有以下两点： ①细胞本身对BPA solution的摄入能力较低。此时建议尝试提高BPA solution
的浓度。(5~50倍稀释) ②Working solution发生变质，请重新配置Working solution，保证现配现用。 |
| Q：如果荧光背景较高， 我该怎么办？ |
| A： 检测环境中可能含有未被细胞摄入的BPA。此时建议用HBSS清洗后再检测。 |
| Q：BPA是否可以定量检测？ |
| A：无法进行定量检测，本染料是评价细胞摄取氨基酸能力高低或增减的试剂。 |
产品文献
1、T. Watanabe, Y. Sanada, Y. Hattori, and M. Suzuki, “Correlation between the expression of LAT1 in cancer cells and the potential efficacy of boron neutron capture therapy”, 2022, J. Radiat. Res., doi:10.1093/jrr/rrac077.
2、Wencan Zhang，Xu Cao，Xiancai Zhong，Hongmin Wu，Yun Shi，Mingye Feng，Yi-Chang Wang， David Ann，Yousang Gwack，Yate-Ching Yuan，Weirong Shang ，and Zuoming Sun，”SRC2 controls CD4+ T cell activation via stimulating c-Myc-mediated up-regulation of amino acid transporter Slc7a5″，2023，PNAS【11.1】，doi：10.1073/pnas.2221352120.
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