同仁化学BCECF试剂货号:B031 CAS号:85138-49-4| 日本DOJINDO

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BCECF试剂货号:B031
2′,7′-Bis(carboxyethyl)-4 or 5-carboxyfluorescein
CAS号:85138-49-4
商品信息
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5mg

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荧光探针检测方案

性质
注意事项
溶解例
参考文献
规格性状

性质

  5-羧基荧光素是一种通过将染料掺入细胞来研究细胞内pH变化的方法,但是当用于pKa = 7.0的细胞(如淋巴细胞)中时,染料会从细胞中洗脱出来,很难快速测定。 BCECF引入了两个羧乙基基团以减少从细胞中的洗脱。 适用于研究细胞内pH变化(λex= 490 nm,λem= 526 nm)。

注意事项

  ・如果将本产品以粉末形式取出并使用,由于其性质,静电等因素,它可能会粘附在容器内部,从而难以完全取出。

・对于粘附在容器上且无法取出的粉末,请在使用前将要使用的溶剂倒入容器中并溶解。

溶解例

2 mg / ml(甲醇)

参考文献

1) R. A. Steinhardt and D. Mazia, “Development of K+-conductance and Membrane Potentials in Unfertilized Sea Urchin Eggs After Exposure to NH4OH”, Nature1973241, 400.
2) T. J. Rink, R. Y. Tsien and T. Pozzan, “Cytoplasmic pH and Free Mg2+ in Lymphocytes”, J. Cell Biol.198295, 189.
3) A. M. Paradiso, R. Y. Tsien and T. E. Machen, “Na+ -H+ Exchange in Gastric Glands as Measured with a Cytoplasmic-trapped, Fluorescent pH Indicator”, Proc. Natl. Acad. Sci. USA198481, 7436.
4) S. Grinstein, B. Elder and W. Furuya, “Phorbol Ester-induces Changes of Cytoplasmic pH in Neutrophils: Role of Exocytosis in Na+ – H+ Exchange”, Am. J. Physiol.1985248, C379.
5) G. B. Zavoico, E. J. Cragoe and M. B. Feinstein, “Regulation of Intracellular pH in Human Platelets”, J. Biol. Chem.1986261(28), 13160.
6) G. R. Bright, W. Fisher, J. Rogowska and L. Taylor, “Fluorescence Ratio Imaging Microscopy: Temporal and Spatial Measurements of Cytoplasmic pH”, J. Cell Biol.1987104, 1019.
7) C. Aalkjaer and E. J. Gragoe Jr, “Intracellular pH Regulation in Resting and Contracting Segments of Rat Mesenteric Resistance Vessels”, J. Physiol.1988402, 391.
8) K. Tsujimoto, M. Semadeni, M. Huflejt and L. Packer, “Intracellular pH of Halobacteria Can Be Determined by the Fluorescent Dye 2′,7′-bis(carboxyethyl)-5(6)-carboxyfluorescein”, Biochem. Biophys. Res. Commun.1988155, 123.
9) M. A. Kolber, R. R. Quinones, R. E. Gress and P. A. Henkart, “Measurament of Cytotoxicity by Target Cell Release and Retention of the Fluorescent Dye Bis-carboxyethyl-carboxyfluorescein(BCECF)”, J. Immunol. Methods, 1988108, 255.
10) H. Harada, Y. Kanai, M. Anzai and Y. Suketa, “cAMP Activates Cl/HCO3 Exchange for Regulation of Intracellular pH in Renal Epithelial Cells”, Biochim. Biophys. Acta, 1991, 1092, 404.
11) C. C. Freudenrich, E. Murphy, L. A. Levy, R. E. London and M. Lieberman, “Intracellular pH Modulates Cytosolic Free Magnesium in Cultured Chicken Heart Cells”, Am. J. Physiol., 1992, 262(4), C1024.
12) K. Khodakhah and D. Ogden, “Functional Heterogeneity of Calcium Release by Inositol Triphosphate in Single Purkinje Neurones, Cultured Cerebellar Astorocytes, and Peripheral Tissues”, Proc. Natl. Acad. Sci. USA, 1993, 90, 4976.
13) G. Boyarsky, C. Hanssen and L. A. Clyne, “Superiority of in vitro Over in vivo Calibrations of BCECF in Vascular Smooth Muscle Cells”, FASEB J., 1996, 10, 1205.
14) S. A. Weston and C. R. Parish, “New Fluorescent Dyes for Lymphocyte Migration Studies Analysis by Flow Cytometry and Fluorescent Microscopy”, J. Immunol. Methods, 1990, 133, 87.
15) L. S. D. Clerck, C. H. Bridts, A. M. Mertens, M. M. Moens and W. J. Stevens, “Use of Fluorescent Dyes in the Determination of Adherence of Human Leucocytes to Endothelial Cells and the Effects of Fluorochromes on Cellular Function”, J. Immunol. Methods, 1994, 172, 115.

规格性状

规格性状:

该产品为橙色至红棕色粉末,可溶于甲醇。

纯度(HPLC):85.0%以上

溶于甲醇:测试合格

荧光光谱:测试合格

红外光谱:测试合格

NMR光谱:测试一致

处理条件:

1.储存方法:避光

关联产品

BCECF试剂货号:B031 CAS号:85138-49-4
Fluo 4-AM special packaging试剂
1-[2-Amino-5-(2,7-difluoro-6-acetoxymethoxy-3-oxo-9-xanthenyl)phenoxy]-2-(2-amino-5-methylphenoxy)ethane-N,N,N’,N’-tetraacetic acid, tetra(acetoxymethyl)ester

Fluo 4-AM试剂
1-[2-Amino-5-(2,7-difluoro-6-acetoxymethoxy-3-oxo-9-xanthenyl)phenoxy]-2-(2-amino-5-methylphenoxy)ethane-N,N,N’,N’-tetraacetic acid, tetra(acetoxymethyl)ester

BCECF试剂货号:B031 CAS号:85138-49-4
Rhod 2-AM试剂
1-[2-Amino-5-(3-dimethylamino-6-dimethylammonio-9-xanthenyl)phenoxy]-2-(2-amino-5-methylphenoxy)ethane-N,N,N’,N’-tetraacetic acid, tetraacetoxymethyl ester, chloride

BCECF试剂货号:B031 CAS号:85138-49-4
Fluo 3-AM试剂
Fluo3-AM1-[2-Amino-5-(2,7-dichloro-6-acetoxymethoxy-3-oxo-9-xanthenyl)phenoxy]-2-(2-amino-5-methylphenoxy)ethane-N,N,N’,N’-tetraacetic acid, tetra(acetoxymethyl)ester

BCECF试剂货号:B031 CAS号:85138-49-4
Fura2-AM试剂
1-[6-Amino-2-(5-carboxy-2-oxazolyl)-5-benzofuranylo

同仁化学SulfoBiotics- SSP4试剂货号:SB10| 日本DOJINDO

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SulfoBiotics- SSP4试剂货号:SB10
3′,6′-Di(O-thiosalicyl)fluorescein
SulfoBiotics- SSP4
商品信息
储存条件:-20度保存,避光
运输条件:室温
分子式:

C34H20O7S2

分子量:

604.65

特点:

 

● 荧光背景低

● 灵敏度高

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产品文献
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1mg

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硫化氢

同仁化学SulfoBiotics- GYY4137试剂货号:SB06 CAS号:106740-09-4| 日本DOJINDO

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SulfoBiotics- GYY4137试剂货号:SB06
(4-Methoxyphenyl)morpholinylphosphinodithioic acid, morpholine salt
CAS号:106740-09-4
商品信息
储存条件:0-5度保存
运输条件:室温
分子式:

C15H25N2O3PS2

分子量:

376.47

特点:

 

● 缓慢释放H2S的供体

● 水溶性好

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选择规格:
10mg

期货 

同仁化学FSB solution试剂货号:F308| 日本DOJINDO

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FSB solution试剂货号:F308
1-Fluoro-2,5-bis(3-carboxy-4-hydroxystyryl)benzene, 1% DMSO solution
FSB solution
商品信息
储存条件:0-5度保存,避光
运输条件:室温

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100μl

期货

 
细胞染色

概述
产品使用步骤
病理切片染色实例
参考文献
常见问题Q&A

概述

淀粉样变性病被卫生部门确定为一种特殊的疾病,是一种具有β折叠结构的称为淀粉样物质的不正常蛋白质,它聚集成纤维,并沉淀在内部器官和系统的外面,抑制这些器官和系统的功能。日本人中这样的疾病包括免疫细胞淀粉样变性病 (AL 淀粉样变性病)、敏感性AA淀粉样变性病、家族性淀粉样多发性神经病 (FAP) 和透析淀粉样变性病(DRA),并且据估计在日本有几百个这样的患者。淀粉样变性病大致可分为两类:沉积在全身各器官内的淀粉样物质[系统性淀粉样变性病],例如上文中提到的病症;以及淀粉样物质沉积于特定器官中的 [局部淀粉样变性病],例如在阿尔茨海默病中淀粉样物质沉积于大脑中。

1-溴-2,5-双(3-羧基-4-羟基苯乙烯基)苯 (BSB)用于检测淀粉样变性病,因为它与β-淀粉样肽 (Aβ)—与阿尔茨海默病相 关的淀粉样物质,具有高亲和力。Skovronsky 证实,在静脉注射 BSB 18 小时之后,该染料在转基因小鼠 Tg2576 脑组 织的老年斑中积累,该种转基因小鼠表达Aβ的淀粉样前体蛋白 (APP)。1) 不仅限于Aβ,Ando 以及其他研究者已宣布各种系统性淀粉样变性病 (AA、AL、ATTR、Ascr 及 Aβ2M) 中沉积的淀粉样物质用BSB比用刚果红 (一种常用于β折叠染 色的染料) 染色更敏感。BSB的荧光强度是刚果红的两倍。此外,BSB 不仅是染色的染料,还能够阻断FAP的淀粉样物 质前体TTR形成淀粉样物质。

产品使用步骤

样品的固定法

乙醇固定或福尔马林固定

染色操作方法

*本品是由 1 %w/vDMSO 溶液制成可配制 0.01%浓度溶液 10 ml,可配制 0.000 1%浓度溶液 1000 ml

1. FSB染色液配制

向产品中加入50 %的乙醇 并稀释成浓度为0.01-0.0001 %的 FSB溶液

2. 染色

将切片在 FSB 中浸泡 30 min。再浸入饱和碳酸锂 中然后用50%乙醇洗涤

3. 检测

紫外光(V 激发) 下检测染色区域

* 如果使用 MRI 法参考如下文献

M. Higuchi, N. Iwata, Y. Matsuba, K. Sato, K. Sasamoto, T. C.Saido, 19F and 1H MRI detection of amyloid β plaques in vivo, Nature Neuroscience, 2005, 8(4), 527-33

病理切片染色实例

1、一个患有阿尔茨海默病患者的前皮质截面染色图。该组织用乙醇固定。发光部分为淀粉样物质。

Sub-adjacent 切片图中的数字对应于每个老年斑。

FSB solution试剂货号:F308

(图片由日本理化学研究所脑科学综合研究中心 Higuchi博 士和 Saido 博士慷慨提供)

2、患有AL淀粉样变性病患者的心脏组织切 片(刚果红是赤褐色的,BSB和FSB的发光部分为淀粉样物质)。Sub-adjacent切片。可以用FSB检测良好的部分,并且这些部分与淀粉样沉淀部分的对比是清晰的。

FSB solution试剂货号:F308

(图像由Ando博士慷慨提供:熊本大学 医学院,实验医学部)

3、FSB在静脉内注射,通过 in vivo MRI图像技术,检测患阿尔茨海默病小鼠脑部照片,可观察到淀粉样沉淀物 (老年斑)。

图像 A:19F-MRI图像、图像B:1H-MRI T2 放大图像、图像C:荧光显微镜下的荧光图像 (exvivo) 图像B中可观查到老人斑低信号 (黑) 部分。FSB的分布情况可在荧光显微镜下确认 (图像C),但相同检测部位通过19F-MRI现象检测 (图像A),可以更清晰的检测出 (图像B) 中检测不到或不清晰的部分。

FSB solution试剂货号:F308

注意事项:购买后根据自己的用量分装保存

参考文献

1. 19F and 1H MRI detection of amyloid β plaques in vivo, Nature Neuroscience, 2005, 8(4), 527-33

2. An aberrant sugar modification of BACE1 blocks its lysosomal targeting in Alzheimer’s disease,

EMBO Molecular Medicine, 2015, 7, 175-189

3. Imaging of Peripheral Benzodiazepine Receptor Expression as Biomarkers of Detrimental versus Beneficial Glial Responses in

Mouse Models of Alzheimer’s and Other CNS Pathologies, The Journal of Neuroscience, 2008, 28(47), 12255-12267

4. Longitudinal, quantitative assessment of amyloid, neuroinflammation, and anti-amyloid treatment in a living mouse model of

Alzheimer’s disease enabled by positron emission tomography, The Journal of Neuroscience, 2007, 27(41), 10957-10968

常见问题Q&A

Q1:FSB荧光观察时的激发波长和发射波长。
A1:激发波长:390 nm, 发射波长:511 nm

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FSB solution试剂货号:F308
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活死细胞双染试剂盒

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同仁化学Cellstain- PI试剂货号:P346 CAS号:25535-16-4| 日本DOJINDO

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Cellstain- PI试剂货号:P346
3,8-二氨基-5-[3-(二乙基家氨基)丙基]-6-苯基啡啶二碘(3,8-Diamino-5-[3-(diethylmethylammonio)propyl]-6-phenylphenanthridinium diiodide)
CAS号:25535-16-4
商品信息
储存条件:0-5度保存,避光
运输条件:室温

分子式:

C27H34I2N4

分子量:

668.39

特点:

 

● 与死细胞DNA结合

● 常用于细胞凋亡检测

● 可与Calcein-AM或者FDA等荧光探针一起使用

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1 mg

现货

 
细胞染色

Cellstain- PI试剂货号:P346 CAS号:25535-16-4

Cellstain- PI试剂货号:P346 CAS号:25535-16-4

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规格性状
产品概述
荧光特性
操作说明
文献
常见问题Q&A

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凑单关联产品TOP5

NO.1.    Calcein-AM    细胞质染色

NO.2.    GSSG/GSH Quantification Kit II    氧化型/还原型谷胱甘肽

NO.3.    Amine Coupling Kit    自组装单分子膜SAM

NO.4.    Annexin V, FITC Apoptosis Detection Kit    细胞凋亡检测

NO.5.    Annexin V, 633 Apoptosis Detection Kit    细胞凋亡检测

 

规格性状

规格

特性:该产品为红棕色粉末或固体,易溶于水和稀盐酸。

水溶性:试验成功

NMR光谱:试验成功

产品概述

荧光染料PI(碘化丙啶)是一种可对DNA染色的细胞核染色试剂,常用于细胞凋亡检测,英文全称是Propidium  Iodide。它是一种溴化乙啶的类似物,在嵌入双链DNA后释放红色荧光。尽管PI不能通过活细胞膜,但却能穿过破损的细胞膜而对核染色。PI经常被用来与Calcein-AM或者FDA等荧光探针一起使用,能同时对活细胞和死细胞染色。PI-DNA复合物的激发和发射波长分别为535nm和615nm。

Cellstain- PI试剂货号:P346 CAS号:25535-16-4

荧光特性

λex=530 nm, λem=620 nm

操作说明

1.用PBS或适当的缓冲液制备10-50μMPI溶液。a)

2.在细胞培养基中加入体积为细胞培养基1/10的PI溶液。b)

3.将细胞在37oC下孵育10-20分钟。

4.用PBS或适当的缓冲液清洗细胞两次。

5.在带有535 nm激发光和615 nm发射滤光片的荧光显微镜下观察细胞。

a)由于PI可能致癌,因此在处理过程中必须格外小心。

b)或者您可以用1/10浓度的PI缓冲溶液代替培养基。

文献

1) I. W.  Taylor and B. K. Milthorpe, “An Evaluation of DNA Fluochromes, Staining  Techniques, and Analysis for Flow Cytometry. I. Unperturebed  Cellpopulations”, J. Histochem. Cytochem., 1980, 28(11), 1224.

2) W. M. J. Vuist, F. V.  Buitenen, M. A. De Rie, A. Hekman, P. Ruemke and C. J. M. Melief,  “Potentiation by Interleukin 2 of Burkitt’s Lymphoma Therapy with  Anti-Pan B (Anti-CD19) Monoclonal Antibodies in a Mouse Xenotransplantation  Model”, Cancer Res., 1989, 49, 3783.

3) A. K. El-Naggar, J. G.  Batsakis, K. Teague, L. Garnsey and B. Barlogie, “Single- and  Double-stranded RNA Measurements by Flow Cytometry in Solid  Neoplasms”, Cytometry, 1991, 12, 330.

4) C. Souchier, M. Ffrench,  M. Benchaib, R. Catallo and P. A. Bryon, “Methods for Cell Proloferation  Analysis by Fluorescent Image Cytometry”, Cytometry, 1995, 20, 203.

5) T. Irino, T. Kitoh, K.  Koami, T. Kashima, K. Mukai, E. Takeuchi, T. Hongo, T. Nakahata, S. M.  Schuster and M. Osaka, “Establishment of Real-Time Polymerase Chain  Reaction Method for Quantitative Analysis of Asparagine Synthetase  Expression”, Mol. Diagn., 2004, 6,  217.

常见问题Q&A

Q1:核染色中所用染料的特征和区别是什么?

 

 

 

 

 

 

A1:

这里引入的染料具有通过与核酸相互作用而发出荧光或增加荧光强度的特性。

除荧光波长以外的差异如下。

[EB]

它没有碱基特异性,可与所有DNA和RNA结合。

它没有活细胞的膜通透性,并且可以染色死细胞。

[PI]

像EB一样,它没有基础特异性。它是一种更广泛使用的染料,因为插入时它的荧光强度比EB高。

它没有活细胞的膜通透性,并且可以染色死细胞。

[DAPI]

与双链小槽结合。它与腺嘌呤-胸苷簇具有高度结合。

它没有活细胞的膜通透性,并且可以染色死细胞。

[AO]

通过利用插入双链时和与单链磷酸结合时荧光波长不同的事实,可以在双链和单链之间进行区分。

它渗透到活细胞的细胞膜上。

[Hoechst33342,33258]

它与DNA的腺嘌呤胸苷部分特异性结合。

它是一种颜料,可以渗透到活细胞的细胞膜上并染色活细胞的DNA。

 

 

Q2:细胞染料的激发波长和发射波长是多少。

A2:

Cellstain- PI试剂货号:P346 CAS号:25535-16-4

Q3:如何使用PI进行核染色?

 

 

 

 

 

 

 

 

A3:一个例子如下所示。根据细胞类型和观察条件,考虑细胞固定和试剂浓度。

[使用示例①]

Vollenweider等人进行了PI染色,并在荧光素激活的杀伤(LAK)细胞增殖试验中使用了荧光板读数器进行了测量。

此时的浓度为0.5 mg / mL PBS(-)。所用浓度为5μg/ mL柠檬酸钠溶液,每孔100μL用于荧光染色。

·I.Vollenweider,P.Groscurth,J.Immunol.Methods,149,133(1992)。

[用法示例(2)]

(1)对于包含实体瘤或团块的样品,请用0.02%tripsin EDTA处理。

在37°C下孵育30分钟后,以1500 rpm进行5分钟,然后弃去上清液。

(2)在-20℃用50%甲醇固定后,以1500rpm进行5分钟,并弃去上清液。

(3)在-20℃下用30%甲醇洗涤后,以1500rpm进行5分钟,弃去上清液。

(4)用0.2 mol / L磷酸盐缓冲液(pH 7.2)洗涤后,以1500 rpm进行5分钟,并弃去上清液。

(5)每106个细胞RNase 0.2 mol / L磷酸盐缓冲液(pH 7.2)溶液(1 mg / mL)

加入0.2 mL,并在37°C下孵育30分钟。

(6)用0.2 mol / L磷酸盐洗涤后,以1500 rpm进行5分钟,并弃去上清液。

(7)加入10 mL PI溶液(50μg/ mL),在黑暗中于4°C染色2小时。

・医学院出版《流式细胞仪入门》