同仁化学SulfoBiotics- Biotin-HPDP(WS) solution试剂货号:SB17 生物素标记蛋白质巯基标记试剂(水溶性)| 日本DOJINDO

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SulfoBiotics- Biotin-HPDP(WS) solution试剂货号:SB17
生物素标记蛋白质巯基标记试剂(水溶性)
SulfoBiotics- Biotin-HPDP(WS) solution
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硫化氢

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SulfoBiotics- SSP4试剂
3′,6′-Di(O-thiosalicyl)fluorescein

SulfoBiotics- Biotin-HPDP(WS) solution试剂货号:SB17 生物素标记蛋白质巯基标记试剂(水溶性)
SulfoBiotics- HSip-1试剂
N-​[3′,​6′-Dihydroxy-​3-​oxo-3H-spiro(isobenzofur​an-​1,​9′-​xanthen)-​5-​yl]​-​(1,​4,​7,​10-​tetraazacyclododecan​e-​1-​acetamide-​κN1, κN4, κN7, κN10) ​copper(2+) sulfate

SulfoBiotics- Biotin-HPDP(WS) solution试剂货号:SB17 生物素标记蛋白质巯基标记试剂(水溶性)
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N-[3′,6′-Bis(acetyloxy)-3-oxo-3H-spiro(isobenzofuran-1,9′-xanthen)-5-yl]-(1,4,7,10-tetraazacyclododecane-1-acetamide-κN1,κN4,κN7,κN10copper(2+)sulfate

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SulfoBiotics- Biotin-HPDP(WS) solution试剂货号:SB17 生物素标记蛋白质巯基标记试剂(水溶性)
-SulfoBiotics- Protein Redox State Monitoring Kit Plus
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同仁化学Nucleolus Bright Green试剂货号:N511 核仁荧光染色试剂-绿色| 日本DOJINDO

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Nucleolus Bright Green试剂货号:N511
核仁荧光染色试剂-绿色
Nucleolus Bright Green
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衰老

Nucleolus Bright Green试剂货号:N511 核仁荧光染色试剂-绿色

Nucleolus Bright Green试剂货号:N511 核仁荧光染色试剂-绿色

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产品概述
原理
核仁染色试剂的比较
产品特点
衰老细胞的评价例
产品实验例
核仁数分析
荧光特性
常见问题Q&A

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DNA损伤丨从实验思路到检测指标  PDF下

 

指标 关联指标干货参(点击查看) 检测指标(点击查看)
DNA损伤检测
γ-H2AX DNA损伤检测试剂盒- γH2AX(绿、红、深红)
AP位点 DNA损伤检测试剂盒(AP位点法)
核小体 Nucleolus Bright (绿、红)
细胞周期 Cell Cycle Assay Kit – PI/RNase Staining
DNA损伤关联指标 氧化损伤 DMPO
BMPO
TEMP
SOD Assay Kit
DPPH Antioxidant Assay Kit
凋亡 Annexin V, FITC Apoptosis Detection Kit/PI
Annexin V, 633 Apoptosis Detection Kit/PI
Cell Cycle Assay Solution Deep Red/Blue
JC-1 MitoMP Detection Kit
Caspase-3 Assay Kit
铁死亡 Lipid Peroxidation Probe -BDP 581/591 C11
Liperfluo
GSSG/GSH Quantification Kit II
Iron Assay Kit
Mito-FerroGreen
衰老 Cellular Senescence Detection Kit – SPiDER-βGal
Cellular Senescence Plate Assay Kit – SPiDER-βGal
SPiDER-βGal
自噬 Mitophagy Detection Kit
DALGreen – Autophagy Detection
DAPGreen – Autophagy Detection
DAPRed – Autophagy Detection

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产品概述

Nucleolus Bright是一种选择性与RNA结合并产生荧光的小分子荧光染料,只需在固定细胞中加入试剂即可成像。虽然Nucleolus Bright也会和在核仁以外存在的RNA反应,不过核仁作为细胞内RNA最多存在rRNA的产生场所,荧光尤为强烈。

成像时,通过与核染色试剂DAPI[产品货号:D523]共染色,可以更清楚地确认核仁。有关详细信息,请参阅使用说明书中的实验例。

原理

核仁是不带膜的核内结构体,也是核糖体生物合成的起点。核仁中存在许多核糖体RNA(rRNA),并且是 rRNA基因转录以及合成加工的场所。由于蛋白质合成的早期阶段在核仁中进行,因此核仁的变化被认为与多种细胞活动有关。核仁的形态变化已被公认为判断癌症的指标之一,近年来也有一系列的报道论述了核仁应激与DNA损伤、自噬、病毒感染和细胞衰老的关系,因此核仁在这些方面的研究也受到越来越多的关注。

Nucleolus Bright Green试剂货号:N511 核仁荧光染色试剂-绿色

核仁染色试剂的比较

最大激发波长 最大发射波长 MeOH固定后染色 PFA固定后染色 活细胞染色
Nucleolus Bright Green 513 nm 538 nm △※
Nucleolus Bright Red 537 nm 605 nm △※

※希望通过活细胞进行评价时,请咨询公司技术支持。

产品特点

特点1:清晰地观察核仁

用4% PFA或MeOH固定HeLa细胞后,用PBS洗净后用1% Triton X-100进行破膜处理,加入Nucleolus Bright Green或Red和核染色

试剂 (DAPI) 并培养,然后用共聚焦荧光显微镜观察。

结果证实DAPI染色的细胞核内 (蓝色)有数个核仁存在。

Nucleolus Bright Green试剂货号:N511 核仁荧光染色试剂-绿色

<染色条件>

・PFA 固定

细胞在4%PFA室温下浸泡5 min,再用Triton X-100在室温下浸泡20 min,加入各种荧光探针后培养5 min。

・MeOH 固定

细胞在冷的MeOH中浸泡1 min,再用Triton X-100在室温下浸泡20 min,加入各种荧光探针后培养5 min。

 

<检测条件>

Nucleolus Bright Green Ex: 488 nm / Em: 500-600 nm

Nucleolus Bright Red Ex: 561 nm / Em: 565-650 nm

DAPI Ex: 405 nm / Em: 450-495 nm

特点2:核仁定位

用4%PFA固定WI-38细胞后,用抗Fibrillarin一抗和荧光标记的二抗免疫染色,并加入Nucleolus Bright Green或Red和核染色试剂

(DAPI) ,培养后,用落射式荧光显微镜 (Keyence,BZ-X710) 观察。

结果证实Nucleolus Bright Green和Nucleolus Bright Red与核仁标记物(Dense Fibrillar Component)的染色部位一致。

Nucleolus Bright Green试剂货号:N511 核仁荧光染色试剂-绿色

<检测条件>

Nucleolus Bright Green:Ex: 450-490 nm / Em: 500-550 nm

Nucleolus Bright Red:Ex: 533-548 nm / Em: 570-640 nm

DAPI:Ex: 340-380 nm / Em: 435-485 nm

Anti-Fibrillarin 抗体:Ex: 590-650 nm / Em: 668-733 nm

特点:3:与核仁相关的领域的报告示例

相关领域 概要 文献
评论(衰老)    关于各种参与细胞功能的核仁,
包括与癌症和早老症的已知关系、
特别是关于衰老的核仁功能。
V. Tiku, A.   Antebi, “Nucleolar Function in Lifespan Regulation.”, Trends Cell Biol.,   2018, 28(8), 662.
细胞衰老    由于与抑制衰老有关的蛋白质缺损、
核仁数量的减少和核仁总面积的加。
H. Tanaka,   S. Takebayashi, A. Sakamoto, T. Igata, Y. Nakatsu, N. Saitoh, S. Hino, M.   Nakao, “The SETD8/PR-Set7 Methyltransferase Functions as a Barrier to Prevent   Senescence-Associated Metabolic Remodeling.”, Cell Rep.,2017, 18(9), 2148.
细胞衰老     由于rRNA加工因子的枯竭导致
核仁肥大化,
同时SA-βGal和p16表达增加。
K.   Nishimura, T. Kumazawa, T. Kuroda, N. Katagiri, M. Tsuchiya, N. Goto, R.   Furumai, A. Murayama, J. Yanagisawa, K. Kimura, “Perturbation of ribosome   biogenesis drives cells into senescence through 5S RNP-mediated p53   activation.”, Cell Rep., 2015, 10(8), 1310.
自噬    通过抑制RNA聚合酶的转录,
确认自噬的诱导和核仁的形状变化。
N. Katagiri,   T. Kuroda, H. Kishimoto, Y. Hayashi, T. Kumazawa and K. Kimura, “The   nucleolar protein nucleophosmin is essential for autophagy induced by   inhibiting Pol I transcription”, Scientific Reports, 2015, 8903, DOI:   10.1038/srep08903.

衰老细胞的评价例

将不同传代数的WI-38细胞用4% PFA固定后,用PBS洗净并用1% Triton X-100进行破膜处理,然后加入Nucleolus Bright Green或

Red和核染色试剂 (DAPI),培养后用共聚焦荧光显微镜观察。

结果证实第3代细胞 (P3) 中的一个细胞核内存在多个核仁,而第18代细胞 (P18) 中核仁变大并成为一体。

Nucleolus Bright Green试剂货号:N511 核仁荧光染色试剂-绿色

<染色条件>

细胞在4% PFA室温下浸泡5 min,再用Triton X-100在室温下浸泡20 min,加入各种荧光探针后培养5 min。

<检测条件>

Nucleolus Bright Green Ex: 488 nm / Em: 500-600 nm

Nucleolus Bright Red Ex: 561 nm / Em: 565-650 nm

DAPI Ex: 405 nm / Em: 450-495 nm

产品实验例

实验例:通过共聚焦定量细胞成像仪进行定量分析

使用共聚焦定量细胞成像仪 (横河电机株式会社 CQ1)对衰老细胞的定量分析。

将传代数不同的WI-38细胞固定后,分别用Nucleolus Bright Green和DAPI染色核仁,并用共聚焦定量细胞成像仪进行定量分析

通过图像对核仁进行分析

用共聚焦定量细胞成像仪在405nm处拍摄细胞核图像,在488nm处拍摄核仁体像,通过分析软件Cell Pathfinder识别各个细胞核内的核仁,并计算出其数量。

Nucleolus Bright Green试剂货号:N511 核仁荧光染色试剂-绿色

横河电机CQ1拍摄条件

使用板:96孔板

物镜:40倍

激发波长:

405nm(DAPI):蓝色

488nm(Nucleolus Bright Green):绿色

视野:16视野

<解析图像>

蓝框线:核

红框线:核仁

核仁数分析

在传代数较多的细胞中,得到了一个细胞核中只有一个核仁的比例增加,而两个及以上核仁的比例减少的结果。该结果与下述论文中衰老的WI-38细胞中核仁数的减少(论文中的Table3)*1,以及通过SETD8敲低诱导衰老的细胞核仁的变化(论文中的Figure4D)*2得到了相同的结果。

Nucleolus Bright Green试剂货号:N511 核仁荧光染色试剂-绿色

*1 P. M. Bemiller, L. Lee, “Nucleolar changes in senescing WI-38 cells”, Mech. Ageing Dev., 1978, 8 , 417.

*2 H. Tanaka, S. Takebayashi, A. Sakamoto, T. Igata, Y. Nakatsu, N. Saitoh, S. Hino, M. Nakao, “The SETD8/PR-Set7 Methyltransferase Functions as a Barrier to Prevent Senescence-Associated Metabolic Remodeling.”, Cell Rep., 2017, 18(9), 2148.

荧光特性

Nucleolus Bright Green试剂货号:N511 核仁荧光染色试剂-绿色

常见问题Q&A

Q1:可以染色活细胞吗?
A1:本试剂建议用于固定细胞染色,不建议用活细胞染色。如果您想用活细胞染色,请联系我们的技术支持。

同仁化学脂肪酸摄取测定试剂盒——Fatty Acid Uptake Assay Kit UP07 脂肪酸摄取检测| 日本DOJINDO

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细胞内代谢系统(糖酵解系统,TCA回路和电子转移系统)的分析对于理解细胞状态非常重要。

脂肪酸摄取测定试剂盒——Fatty Acid Uptake Assay Kit UP07 脂肪酸摄取检测
Lipi-Blue试剂 LD01 脂滴检测(蓝色)
Lipi-Green试剂 LD02 脂滴检测(绿色)
Lipi-Red试剂 LD03 脂滴检测(红色)
Lipi-Deep Red试剂 LD04 脂滴检测(深红色)
Lipid Droplet Assay Kit-Blue试剂 LD05 脂滴荧光检测(蓝色)
Lipid Droplet Assay Kit-Deep Red试剂 LD06 脂滴荧光检测(深红色)

同仁化学Lipi-Blue试剂货号:LD01 脂滴检测(蓝色)| 日本DOJINDO

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Lipi-Blue试剂货号:LD01 脂滴检测(蓝色)
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特点:

 

● 高特异性脂滴定位

● 可进行组织脂滴成像

● 多种颜色可供选择

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10 nmol

现货

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Lipi-Blue试剂货号:LD01 脂滴检测(蓝色)

Lipi-Blue试剂货号:LD01 脂滴检测(蓝色)

产品解说
概述
原理
脂滴的染色例
与竞争品比较
产品特点
实验例
Lipi系列荧光图谱
脂肪滴产品种类的检测方法
常用问题Q&A
参考文献
参考文献

产品解说

 

概述

 Lipi系列探针是高脂肪亲脂性小分子探针,其在疏水环境例如脂滴中发出强荧光。活细胞和固定细胞中的脂滴都可以使用本试剂清楚地观察。

原理

脂滴(脂肪滴,Lipid droplets, LDs)由中性脂肪组成,主要包括甘油三酯和胆固醇酯,其外层被一层单层磷脂分子包裹。而且脂滴不仅在脂肪细胞中存在,在真核生物中也普遍存在。最新的研究表明,以前认为脂滴仅是一个简单的脂质储存器,但最近的研究表明其在调节脂质代谢1),自噬2)和细胞衰老3)等方面都起着重要作用,因此需要进一步详细地研究脂滴形成·成长·融合·分解的机制。Lipi系列探针是高脂肪亲油性小分子探针,可在疏水环境例如脂滴中发出强荧光。Lipi探针染色后,无须洗涤即可观察到脂滴。

Lipi-Blue试剂货号:LD01 脂滴检测(蓝色)

1) T. Fujimoto et al., “Lipid droplets: a classic organelle with new outfits.” Histochem Cell Biol., 2008, 130(2), 263.

2) R. Singh et al., “Autophagy regulates lipid metabolism.” Nature, 2009, 458(7242), 1131.

3) M. Yokoyama et al., “Inhibition of endothelial p53 improves metabolic abnormalities related to dietary obesity.” Cell Reports, 2014, 7(5), 1691.

脂滴的染色例

在活细胞状态下,用油酸诱导HeLa细胞后,用不同颜色的Lipi系列荧光探针检测

Lipi-Blue试剂货号:LD01 脂滴检测(蓝色)

检测条件:

* Lipi-Blue :Ex:405 nm, Em:450–500 nm

* Lipi-Green:Ex:488 nm, Em:500–550 nm

* Lipi-Red:Ex:561 nm, Em:565–650 nm

* Lipi-Deep Red:Ex:640 nm, Em:650–700 nm

染色条件:

 

在HeLa细胞培养基中加入200 μmol/l油酸,过夜培养后,用PBS清洗细胞,并分别加入不同颜色的Lipi探针(Lipi-Blue/Green/Deep Red:0.1 μmol/l、Lipi-Red:1 μmol/l) 染色15 min后观察。

如何制备油酸溶液

请参考Q&A“油酸溶液的制备和加入细胞的方法”。

与竞争品比较

Lipi系列荧光探针大幅度地改善了现有脂滴染色试剂存在的问题 (如选择性,滤波器的适应性,荧光滞留性)。而且 Lipi系列荧光探针也适用于多重染色实验,可选颜色更多。

 

同仁化学试剂 其他品牌(T公司)
Lipi-Blue Lipi-Green Lipi-Red Lipi-Deep Red Oil Red O

(比色)

Nile Red 试剂B
活细胞染色 ×
固定细胞染色
对脂肪滴的选择性
(低背景)
× ×
与其他试剂的共染色*1 *2 n.d. ×*3
活细胞内的滞留性(24h) × × n.d. × ×

*1. 与绿色荧光共染时,推荐使用550 nm以下的绿色荧光滤光片。

*2. 关于共染时推荐的荧光滤光片,您可以参考网页下方Q&A“共染时推荐的荧光滤光片”。

*3. 用GFP的滤光片(500~540 nm)时会串色。

产品特点

特点1:与抗体检测方法高度相似

4%PFA固定HepG2细胞后,用100 nmol/l Lipi-Blue染色。 然后在脂滴膜上用抗ADFP抗体荧光标记,免疫染色, 该抗体可以特异性标记脂滴膜上的蛋白质 (Adipophilin; ADFP)。 实验证明Lipi-Blue与脂滴上蛋白质ADFP的定位高度相关。

Lipi-Blue试剂货号:LD01 脂滴检测(蓝色)

<检测条件> 

Lipi-Blue:Ex:405 nm / Em:450-500 nm,

抗ADFP抗体(Alexa Fluor 647):Ex:640 nm / Em:650-700 nm

特点2:高特异性定位脂滴

在HeLa活细胞中加入油酸,并用100 nmol/l Lipi-Blue和100 nmol/l Nile Red(T公司)染色。该结果显示Nile Red会染上脂滴以外的其它细胞质。

Lipi-Blue试剂货号:LD01 脂滴检测(蓝色)

<检测条件> 

Lipi-Blue:Ex:405 nm / Em:450-500 nm,

Nile Red:Ex:561 nm / Em:565-650 nm

特点3:荧光在细胞中滞留时间长

分别用Lipi系列、Nile Red和市售的试剂B染色HepG2细胞,观察在培养30 min和24 h时的荧光图像。

Lipi-Blue试剂货号:LD01 脂滴检测(蓝色)

实验证实Lipi-Blue和Lipi-Green在培养24 h后虽然荧光强度有所降低,但仍有荧光。 而Lipi-Red,Lipi-Deep Red,Nile Red和市售试剂B在培养24 h后几乎无荧光,不适合长时间的实时成像观察。

实验例

实验例1:脂肪细胞的脂滴成像

用Lipi系列染色3T3-L1前脂肪细胞,可以清楚地检测出脂肪细胞中的脂质。

Lipi-Blue试剂货号:LD01 脂滴检测(蓝色)

<脂肪细胞染色实验例>

(1)将3T3-L1细胞(1.5×104cells/孔)接种在µ-Plate 96孔板(ibidi)的各孔中,并在37℃ 5% CO2培养箱内培养。

(2)按照常规方法诱导分化为脂肪细胞。

(3) 去除上清液,用DMEM(25 mmol/l葡萄糖, 10% FBS, 无酚红)洗涤两次。

(4)加入用DMEM(25 mmol/l葡萄糖,10%FBS,无酚红)制备的每种染料的工作溶液,并在37℃下培养24 h。

(5)用荧光显微镜观察。

※试剂浓度:各2.5 µmol/l

实验例2:脂肪组织的脂滴成像

用4%PFA固定小鼠肝脏脂肪组织(冰冻切片)后用Lipi系列染色,比较幼鼠(6周龄)和老年小鼠(31周龄)的脂滴成像图像,发现肝脏脂肪组织中的脂滴量有很大差异。

Lipi-Blue试剂货号:LD01 脂滴检测(蓝色)

<组织样品的染色实验例>

(1)向小鼠肝脏脂肪组织(冰冻切片)中加入4%PFA(PBS),在室温下静置5 min。

(2)用PBS清洗后,加入各浓度的Lipi系列working solution(PBS),在4℃下静置24 h。

(3)用PBS清洗后,用落射型荧光显微镜进行荧光观察。

※工作液浓度:2.5 µmol/l(Lipi-Blue、Lipi-Green、Lipi-Deep Red)、25 µmol/l(Lipi-Red)

实验例3:使用细胞成像仪进行定量分析

将油酸或Triacsin C(acyl-CoA synthetase抑制剂)分别加入到HepG2细胞中,并比较脂滴的变化。在分析中,我们使用共聚焦定量细胞成像仪(横河电机株式会社 CQ1)获得每个细胞脂滴数量和面积的数据。

脂肪滴和细胞核的成像

使用共聚焦定量细胞成像仪在447/60 nm处拍摄脂滴图像,在525/50 nm处拍摄细胞核图像,在分析软件CellPathfinder中识别单个脂滴和细胞核,并计算其数量和面积。

Lipi-Blue试剂货号:LD01 脂滴检测(蓝色)

横河电机CQ1拍摄条件

使用板:96 well plate,物镜:20倍

激发波长 :405 nm (Lipi-Blue):蓝色、488 nm (SYBR Green): 绿色

黄框线:细胞核、红框线:脂滴

脂滴数量及面积的分析

根据细胞核和脂滴的检测数据,每个细胞的脂滴的数量和面积如图所示。结果,加入油酸的脂滴增加了7-10倍,而加入Triacsin C抑制了脂滴的形成,脂滴数量减少到Control组的50-60%。

Lipi-Blue试剂货号:LD01 脂滴检测(蓝色)

细胞处理及脂滴染色条件

将HepG2细胞(1×103cells)接种到96孔板中过夜培养。除去培养上清液后,加入未处理(仅含FBS的DMEM培养基)、油酸(含200 μmol/l油酸和FBS的DMEM培养基)或Triacsin C(含5 µmol/l Triacsin C和FBS的DMEM培养基)过夜培养。之后用PBS 清洗2次,用4%的PFA在室温下固定5 min后,用PBS 清洗2次。最后,加入0.5 μmol/l Lipi-Blue working solution在室温、避光下染色2 h后,用共聚焦定量细胞成像仪进行定量分析。

Lipi系列荧光图谱

Lipi-Blue试剂货号:LD01 脂滴检测(蓝色)

脂肪滴产品种类的检测方法

产品名称 规格 货号
成像(成像)

脂滴荧光探针

Lipi-Blue 10 nmol LD01
Lipi-Green 10 nmol LD02
Lipi-Red 100 nmol LD03
Lipi-Deep Red 10 nmol LD04
定量(荧光酶标仪,FCM)
脂滴荧光检测试剂盒
Lipid Droplet Assay Kit – Blue 1 set LD05
Lipid Droplet Assay Kit – Deep Red 1 set LD06

常用问题Q&A

Q1:油酸溶液的制备和加入细胞的方法
A1:我们按照以下步骤制备和使用油酸溶液。
<油酸储存溶液>
必要的试剂
·BSA(牛血清白蛋白)
·油酸
·0.1 mol/l Tris-HCl(pH8.0)
制备步骤
1)在0.1 mol/l Tris-HCl(pH8.0)中加入BSA并溶解(BSA:浓度0.14 g/ml)。
2)在容器(一次性的离心管)中加入油酸后,加入步骤1)得到的BSA溶液,使用涡旋振荡器进行混合(油酸浓度:4 mmol/l)。*1
3)用孔径为0.22 µm的注射式过滤器(PTFE)过滤步骤2)的混合溶液。
4)每次使用后冷藏保存。*2
* 1   油酸和BSA溶液混合可能导致液体混浊,继续摇动让油酸和BSA形成复合物使混浊会消失。
* 2 将所需量的油酸储备溶液加入到实验使用的培养基中,用于将油酸加入到细胞中。
<加入细胞的方法>
1)将细胞在37℃ 5%CO2培养箱内培养24 h。
2)用加入了油酸储备溶液的培养基(油酸的终浓度200 µmol/L)替换,再培养24 h。
3)然后按照说明书对脂滴进行荧光染色观察。
Q2:共染时推荐的荧光滤光片。
Lipi-Blue试剂货号:LD01 脂滴检测(蓝色)

 

Q3:检测不到荧光信号的应对方法是什么?
  Q4如果没有检测到荧光信号,可能会有几个因素。
请确认以下内容,并根据情况考虑优化条件。
1.激发·发射波长与染料的荧光特性不一致。
确认说明书上的荧光图谱和您仪器的激发和发射波长是否匹配。
2.染色条件不是最合适的。
[试剂浓度]
确认工作液的浓度是否在以下范围内。
Lipi-Blue,Lipi-Green:0.1-0.5μmol/l
Lipi-Red:1-5μmol/l
*如果在上述条件下仍未检测到荧光信号,请提高染色浓度。
Lipi-Blue,Lipi-Green:1-2μmol/l
Lipi-Red:10-20μmol/l
[染色时间]
-一般是30min,如没有荧光信号可以延长染色时间至1-2 h。
3.固定条件不适合。
根据细胞种类不同,染色前后的固定操作可能会导致无法染色或灵敏度减弱。
在这种情况下,“请参考Q&A:是否可以对固定细胞进行染色?。
4.脂滴小,难以确认。
根据细胞的不同,可能会有脂滴很小难以确认的情况。
这种情况下,我们建议在高倍率的显微镜下确认,或用油酸处理细胞作为阳性对照进行评估。
Q4:是否可以对固定细胞进行染色?
A4:可以染色,固定细胞的染色步骤有以下注意事项:
※请用多聚甲醛 (PFA) 固定细胞,不建议用甲醇等醇类固定细胞,因为可能会影响脂滴的结构。
※部分细胞种类染色后,如果在固定细胞过程中出现无染色或染色强度不够的情况,需要摸索最佳固定条件。
○细胞染色后固定实验例 (以HepG2细胞为例)
1. 将HepG2细胞接种在µ-Slide 8孔板上,并在37℃ 5% CO2培养箱中过夜培养。
2. 去除培养基,用PBS清洗2次。
3. 在细胞中加入用PBS配制的Lipi工作液,在37℃培养箱中培养15 min。
4. 去除上清液,用PBS清洗2次。
5. 加入4% PFA (在PBS中),在室温固定5 min。
6. 去除上清液,用PBS清洗后,在荧光显微镜下观察。
○细胞染色前固定实验例 (以HeLa细胞为例)
1. 将HeLa细胞接种在µ-Slide 8孔板上,并在37℃ 5% CO2培养箱中过夜培养。
2. 去除培养基,用PBS清洗2次。
3. 加入4% PFA (在PBS中),在室温固定5 min。
4. 去除上清液,用PBS清洗2次。
5. 在细胞中加入用PBS配制的Lipi工作液,在37℃培养箱中培养30 min。
6. 去除上清液,用PBS清洗后,在荧光显微镜下观察。

参考文献

1) Y. Tatenaka, H. Kato, M. Ishiyama, K. Sasamoto, M. Shiga, H. Nishitoh and Y. Ueno, “Monitoring Lipid Droplet Dynamics in Living Cells by Using Fluorescent Probes”, Biochemistry., 2019, DOI: 10.1021/acs.biochem.8b01071 .

参考文献

1) Y. Tatenaka, H. Kato, M. Ishiyama, K. Sasamoto, M. Shiga, H. Nishitoh and Y. Ueno, “Monitoring Lipid Droplet Dynamics in Living Cells by Using Fluorescent Probes”, Biochemistry., 2019, DOI: 10.1021/acs.biochem.8b01071 .

同仁化学NOR 3试剂货号:N390 (±)-(E)-4-乙基-2-[(E)-羟基氨基]-5-硝基-3-己烯胺((±)-(E)-4-Ethyl-2-[(E)-hydroxyimino]-5-nitro-3-hexenamide) CAS号:138472-01-2| 日本DOJINDO

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NOR 3试剂货号:N390
(±)-(E)-4-乙基-2-[(E)-羟基氨基]-5-硝基-3-己烯胺((±)-(E)-4-Ethyl-2-[(E)-hydroxyimino]-5-nitro-3-hexenamide)
CAS号:138472-01-2
商品信息
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 C8H13N3O4

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