血清与血浆的区别及制备

血清与血浆的区别及制备

并非所有科学家都知道血清和血浆之间的区别。那么让我们解释一下。除了红细胞、白细胞和营养物质外,血液还含有纤维蛋白原和凝血因子,当血液暴露在空气中时会导致凝血。这种凝血对于防止受伤后过度出血很重要。使用抗凝剂可以停止这些凝血成分的作用,从而防止形成任何凝块。

血浆和血清是不同的血液制剂,根据采集时的血样中是否添加抗凝剂而产生。添加抗凝剂以防止凝块形成很重要,例如,如果血液用于输血,以及制备用于细胞培养的血清。


血清和血浆是如何制备的?

等离子体

从全血开始,如果在采集后立即添加抗凝剂,则可以防止凝固,并且所有成分都保持悬浮状态。如果您不混合该血液样本,那么所有成分都会沉淀下来。较重的细胞会沉到底部。这会导致顶部出现透明液体。这个透明的上层是血浆,基本上是血液的所有成分减去细胞。在离心作用下,血浆和红细胞之间形成一层称为血沉棕黄层的白细胞。血浆保留纤维蛋白原。

血清

如果我们不添加任何抗凝剂,则凝血因子会促进凝块形成。这些含有纤维蛋白原作为凝血剂的凝块可以有效地从血浆中以固体形式去除红细胞。血清在血液中所占的比例比血浆更大,并且在研究中应用广泛。这至少部分是因为它可以更有效地去除不需要的红细胞,从而产生更多的每单位血液体积。

从血清和血浆中纯化外泌体。

只需通过Exo-spin™ 柱即可从血清和血浆中纯化外泌体。或者,可以在应用柱之前使用沉淀缓冲液处理血清/血浆样品。将样品与该缓冲液混合,然后离心,去除血浆和血清的许多成分,并允许在单个 Exo-spin™ 柱上纯化更多数量的外泌体。更多详细信息可以在我们的 Exo-spin™ 指南(查看各个产品)和外泌体资源页面中找到。

选购胎牛血清的常见问题和注意事项

选购胎牛血清的常见问题和注意事项

Q: 应该如何储存和解冻血清才不会使产品质量受损? A:  建议 血清应保存在-10℃及以下。若一次无法用完一瓶,无菌分装血 清至恰当的灭菌容器内,再放回冷冻。解冻时,建议将血清从冷 冻室先移至2-8℃冰箱解冻,再放置于室温进行解冻。请注 意,解冻过程中需要经常摇晃混合。严禁将FBS 37℃长时间孵 育解冻。

 

Q: 培养基中添加了血清和抗生素后,可长期保存吗? A: 一旦 您在新鲜培养基中添加了血清和抗生素时,您应该在2周内使用它。

 

Q:  如果我的FBS到达时已经部分解冻,还能使用吗? A:  所有的 依科赛生物ExCell Bio血清都在冰冻状态下由干冰运输,因此您  收到时应该仍是冰冻状态。如果只是部分解冻, FBS仍然可以使 用,但是建议先将FBS在冰箱中充分解冻,之后温和的摇晃摇匀,

再移至-10℃及以下进行储存。

 

Q: 不同批次血清颜色为什么有差异? A:  血清中含有微量的血 红蛋白,与采集血液过程中血细胞的破裂数目有关,只要血红蛋 白的含量在药典规定范围内,颜色的深浅和血清品质无关,不影

响细胞培养。中国药典规定血红蛋白含量≤200mg/L。

 

Q:  热灭活是必须的吗?A:  实验显示,热灭活对大多数的细胞 而言是不需要的。经此处理过的血清对细胞的生长只有微小的促 进,或全没有任何作用,甚至通常因为高温处理影响了血清的 质量,而造成细胞生长速率的降低。而经过热灭活的血清,会增 加沉淀产生的概率,这些沉淀物在倒置显微镜下观察,像是“小 黑点“,常常会让研究者误以为是血清遭受污染。热灭活过程中 局部温度过高,摇晃不均匀,灭活时间过长,都会造成血清品质 下降。若非必须,可以不需要做热灭活这一步。不但节省时间更确保血清的质量!

 Q: 血清使用前是否有必要热灭活,如何热灭活? A:  请先确认 细胞培养实验方案是否需要对血清进行热灭活。 一般不建议热灭 活,热灭活处理会损失血清中部分营养成分,并且容易发生蛋白 质聚集沉淀;少数对补体敏感的实验需要(如某些免疫学实验,

腺病毒包装,某些PS培养等),可酌情使用热灭活血清。热灭活方法:血清全解冻充分摇匀后置于56°水浴中30分钟

Q:  细胞培养中出现黑点是污染吗?如何处理? A:  一旦您在细 胞培养的过程中发现有黑点生成,首先,要肉眼观察培养基是否 浑浊,然后在镜下观察培养细胞生长的状态,黑点是否游动。如 果细胞被污染,微生物则会大量繁殖,培养基就会迅速变黄、变 浑浊。污染包括细菌污染、支原体污染等。如果在镜下观察细胞,生长状态良好,与黑点出现前相比,没有任何变化,那么,

黑点的出现可能与以下几种情况有关:①细胞生长过老,破碎的 细胞残骸;②配制培养基的pH 值偏高,不宜细胞生长;③培养 原代细胞中出现小黑点,可能是原代组织中的杂质,多次传代可以消除;④血清等级不足以维持细胞良好的生长。

 

Q:FBS 中含有的絮状物是什么东西? A:FBS  中的絮状物可能由 很多种原因造成,其中最常见的沉淀主要成分是纤维蛋白和脂蛋 白,不会影响血清品质,沉淀若需去除,视沉淀大小500-1000×g,离心5-10min去除,也可不做处理。

 

Q: 为什么要使用正规进口的血清? A:① 有的血清缺乏检验检 疫监管,冷链运输无法保障,严重影响血清批内和批间稳定性, 实验数据结果不可控;②正规的血清来源于中华人民共和国海关 总署允许进口的非疫区国家,防止未经检疫的血液制品中可能携带传染性物质, 一旦流入境内,可能会对试者和研究人员的生命健康造成威胁。


南美血清Fetal Bovine Serum(Defined)简介

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1.澳洲品质,南美价格
2.细胞培养生长迅速,倍增时间短、克隆效率高
3.无病毒及支原体污染,内毒素水平低
4.对标澳洲胎牛血清,适合部分原代、干细胞等难养细胞的培养与扩增

南美血清Fetal Bovine Serum(Defined)简介

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应用:抗体药、细胞治疗、基因治疗、病毒包装、细胞免疫及基因工程药物、疫苗研究及生产、IVD试剂封闭稀释及保存液等。

储存条件 -20可保存五年


常见问题及解答

1. 保存血清好的方法?  需长期保存的血清必须储存于-20℃或更低温冰箱中,研究表明储存在-80℃下的血清在性能方面没 有任何变化,但解冻时巨大的温差会导致更多沉淀的产生,故建议-80℃储存。血清在 4℃冰箱存放时间 切勿超过 1 个月。若一次无法用完 1 瓶,建议分装后保存,避免反复冻融,另血清结冰体积会增加约 10%, 请预留一定的体积空间。 

2. 如何解冻血清才不会使产品质量受损?  将冷冻血清先置于 4℃冰箱中融解,然后再移入室温全部。在融解过程中需规则地摇晃均匀,使温度 与成分均一,减少沉淀的发生。 

3. 血清解冻后发现絮状沉淀,该如何处理?  血清中的沉淀物主要是血清中的脂蛋白变性和纤维蛋白析出造成,它不会影响血清本身的质量,可 以 500-1000×g 离心 5-10 min 去除,也可不处理。 

4. 血清热灭活的作用?  加热可灭活补体系统。补体参与反应有:细胞毒作用,平滑肌细胞收缩,细胞和血小板释放组胺, 增加吞噬作用,促进淋巴细胞和巨噬细胞发生化学趋化和活化。培养 ES 细胞、昆虫细胞和平滑肌细胞 时推荐热灭活血清。 

5. 如何区分血清的沉淀与污染?  前者静置一段时间后,血清上层是澄清的,而后者始终浑浊。 

6. 澳洲的血清质量是不是比南美的好?  不一定,血清的质量与产地没有必然的联系。另外,没有好的血清,只有适合的血清。 

7. 血清中沉淀是什么物质? 用于细胞培养的胎牛血清及其他血清产品均存在各种类型的沉淀,常见的有纤维蛋白和磷酸钙。纤 维蛋白通常为肉眼可见的较大物质(可达 1-2mm),即絮状沉淀;磷酸钙在显微镜观察为小黑点,由于 布朗运动,通常被误认为是微生物污染。血清中的沉淀往往比较难以预测和控制,但幸运的是这些沉淀 不会影响血清的质量。

新生牛血清(特征级)概述

新生牛血清(特征级)概述

澳洲新生牛血清采自出生2天内的新生牛,是指新生牛血液凝固后,去除血浆中纤维蛋白原及某些凝血因子后分离出的淡黄色有乳光液体。

新生牛血清是细胞培养中用量较大的天然培养基,含有丰富的细胞生长必须的营养成分,具有极为重要的功能,一般添加比例为:5-20%。血清中含有各种氨基酸、维生素、无机物、脂类物质等这些维持细胞生长必须的营养物质,也含有胰岛素、氢化可的松、地塞米松、bFGFEGFPDGF、转铁蛋白等可促进细胞生长的激素、生长因子及结合蛋白。此外,血清还有解毒、缓冲、抑制蛋白酶活性等作用保护细胞不受伤害。

依科赛新生牛血清均采自非疫区的健康牛,经无菌采集、批量混合、3100 nm过滤器过滤分装而成,不含支原体和BVDVPI3BPV等牛源病毒。

100ml   -20℃可保存五年

50ml    -20℃可保存五年

应用

免疫反应中封闭液和稀释液的配制

病毒和疫苗的生产

胎牛血清 Fetal Bovine Serum(Defined)简介

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概述

胎牛血清是指胎牛血液凝固后,去除血浆中纤维蛋白原及某些凝血因子后分离出的淡黄色澄清液体,它是肉类加工业的一个副产品。

胎牛血清是细胞培养中用量较大的天然培养基,含有丰富的细胞生长必须的营养成分,具有极为重要的功能,一般添加比例为:5-20%。血清中含有各种氨基酸、维生素、无机物、脂类物质等这些维持细胞生长必须的营养物质,也含有胰岛素、氢化可的松、地塞米松、bFGFEGFPDGF、转铁蛋白等可促进细胞生长的激素、生长因子及结合蛋白。此外,血清还有解毒、缓冲、抑制蛋白酶活性等作用保护细胞不受伤害。

依科赛胎牛血清均采自非疫区的健康牛,经无菌采集、批量混合、3100 nm过滤器过滤分装而成,不含支原体和BVDVPI3IBRBTV等牛源病毒。

100ml
-20℃可保存五年
50ml -20℃可保存五年

应用:

细胞培养相关试剂配制

免疫反应中封闭液和稀释液的配制

抗体、病毒和疫苗的研发及生产