在Western Blotting实验中，除了需要进行蛋白抽提、蛋白定量、等量蛋白上样电泳、转膜、靶蛋白抗体孵育、显色等步骤以外，还需要使用内参抗体对内参进行检测，以校正蛋白质定量、上样过程中存在的实验误差，保证实验结果的准确性。然而常用的GAPDH、Beta-Actin以及Tubulin等抗体通常是作为动物细胞的内参使用，针对植物蛋白，则需要选择合适的植物内参抗体。

核酮糖二磷酸缩化酶（Rubisco），是植物组织中广泛存在的一种高丰度蛋白，低等的细菌到高等的被子植物中都有其同源蛋白。该酶催化光合作用过程中二氧化碳固定的最有一个限速反应。该酶是双功能酶，在CO2浓度高的环境中，使RUBP进行羧化反应，起羧化酶的作用，形成磷酸甘油酸；在O2浓度高的环境中，使RUBP进行氧化反应，起加氧酶的作用，形成磷酸乙醇酸和磷酸甘油酸。

针对植物学研究中，需要对蛋白样品进行标准化定量或者使用蛋白内参对免疫学结果进行参照，上海金畔生物科技有限公司向您推荐Agrisera最全面的植物蛋白内参及定量方案。有抗Rubisco植物内参抗体（产品又包括抗Rubisco大亚基抗体、抗Rubisco小亚基抗体等），还有用于定量的Rubisco重组蛋白以及定量试剂盒。

上海金畔生物科技有限公司还向您推荐Rubisco quantitation kit即Rubisco定量试剂盒，该试剂盒通过免疫印迹的定量分析能对植物及藻类样本中的Rubisco蛋白进行定量。试剂盒内包括了抗Rubisco大亚基（RbcL）抗体（100 µg可完成100次WB分析）、作为标准品的Rubisco大亚基重组蛋白（250 µl的0.15 pmoles/µl重组蛋白，可进行85次标准曲线的分析实验）以及Agrisera专用于定量用的蛋白裂解液PEB缓冲液（3 x 2 ml的4倍贮液，可进行48次植物样本蛋白的提取或120次藻类样本蛋白提取）。

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蛋白marker可分为：未预染的Marker即宽分子量蛋白标准、高分子量蛋白标准以及低分子量蛋白标准;预染的Marker即单色预染和多色预染。

未染色的蛋白分子量标准是最简单，也是最准确的一种。由于没有附带染料分子或者是标记分子，所示大小正好是蛋白的大小。宽分子量蛋白标准：选择Marker的范围应该尽量宽，条带分布均匀的比较好，这样避免正好落在一段空白区的危险。高分子量蛋白标准：检测大分子量蛋白经常使用到高分子量蛋白标准。低分子量蛋白标准：在一般的蛋白电泳中，更常用的是低蛋白标准分子量，除了有指示蛋白大小的作用以外，有时还可以用作粗略的定量。

预染蛋白标准可以分为两种：单色预染和多色预染，其区别就在于辨认实验过程中某个条带的大小——Marker条带越多参考价值越大

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在Western Blotting中使用内参其实就是在WB过程中另外用内参抗体检测内参蛋白的表达。由于内参蛋白在各组织和细胞中的表达相对恒定，借助检测每个样品内参的量就可以用于校正上样误差，这样半定量的结果才更为可信。此外使用内参可以作为空白对照，检测蛋白转膜情况是否完全、整个Western Blot显色或者发光体系是否正常。就一般的蛋白检测来说，Actin抗体、Tubulin抗体等就可以了，而针对于核蛋白的定量，特别是样本蛋白就是核蛋白时，选择恰当的核蛋白内参则更能体现内部参照的价值。

当实验样品中只是核蛋白，而不是细胞总蛋白提取液时，可以用组蛋白H（Histone H)，或者核纤层蛋白(nuclear lamina protein)等为核内参抗体。除了这些，其它常见的核蛋白内参还有K70, K80, Lamin A和B，在一些文献报道中，Erk2、TATA binding protein（TBP）以及c-Jun、c-Fos等都有使用。但是需要注意的问题是核蛋白内参的选择需要考虑实际的试验环境，比如在涉及细胞增殖相关试验中，c-Jun由于自身表达变化就不适合做内参；而在凋亡实验时，TBP、Lamin等也不适合作为内参。反之，组蛋白Histone H2A.X及Histone H3.1等由于是染色体的组成型表达组分，表达比较稳定，经常被作为最广泛的核内参使用。

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