重组人层粘连蛋白及其在细胞培养中的应该

层粘连蛋白是所有动物中发现的一系列细胞外基质 (ECM) 蛋白。这些糖蛋白是基底膜基底层的主要成分，基底膜是一种蛋白质网络，构成了体内大多数细胞和器官生长的基础。在体内，层粘连蛋白对于调节许多生物过程很重要，包括粘附、迁移和分化。1,2

层粘连蛋白是异三聚体蛋白质，由 α 链、β 链和 γ 链以 1:1:1 的比例组成。3总共有 5 种 α 链异构体、3 种 β 链异构体和 3 种 γ 链异构体是已知的，并且特定的组合调节特定层粘连蛋白分子的功能。不同的层粘连蛋白由存在的异构体的组合来确认（图1）。例如，层粘连蛋白-511表示由α5、β1和γ1亚基组成的层粘连蛋白。

层粘连蛋白直接与动物细胞细胞膜中的整合素蛋白相互作用。这种相互作用是细胞与基底膜结合的主要组成部分之一。层粘连蛋白的蛋白水解研究已经鉴定出层粘连蛋白三聚体的蛋白酶抗性核心，称为 E8 片段，其中包含核心整合素结合结构域（图 1）。4 E8片段非常适合体外实验，因为它们适合高产重组蛋白生产，不像全长层粘连蛋白，全长层粘连蛋白在体外表达具有挑战性，并且由于其尺寸大且结构复杂，难以形成活性异三聚体-翻译修饰。

重组人 E8 片段已被多家公司商业化，其中包括 Matrixome（日本大阪），因为它们是培养多种细胞类型的理想底物。 Matrixome 的成立基于以下研究：重组人层粘连蛋白 511 E8 片段（以 iMatrix-511 名称销售并可从 REPROCELL 获得）可形成人类干细胞培养的理想基质。5自 Matrixome 成立以来，Matrixome 已引入了许多其他具有多种细胞特异性的层粘连蛋白 E8 片段亚型（表 1）。

iMatrix-511重组人 Laminin-511 E8 片段已被证明与整合素 α6β1 紧密结合，使其成为培养人类干细胞的理想底物（图 2a 和 b）。5原始 iMatrix-511在 CHO-S 细胞中表达，而新版本（称为iMatrix-511 SILK）在蚕茧中表达。 iMatrix-511 SILK 以更低的价格提供与原始 iMatrix-511 相同的性能，并且没有动物蛋白的风险。

其他 iMatrix 层粘连蛋白产品

• iMatrix 411：层粘连蛋白-411在血管基底膜中丰富，iMatrix-411已用于将诱导多能干细胞（iPSC）分化为血管内皮细胞和胆管细胞。 6

• iMatrix-221：Laminin-211 存在于肌肉组织的基底膜中。 iMatrix-211 已被证明是心肌细胞和骨骼肌细胞的底物。

• Matrix-332：Laminin-332 存在于角质形成细胞和角膜细胞中。 iMatrix-332最近被用作角膜细胞分化和纯化的关键成分。7

• iMatrix-111：Laminin-111 存在于肝脏中。iPSC体外分化为肝细胞的重要成分。 8

抗着丝粒蛋白抗体

详细介绍

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抗着丝粒蛋白抗体，产品编码：15-235-F。品牌：Antibodiesinc

抗着丝粒蛋白抗体，Anti-Centromere Protein Antibody-FITC Labeled

上海金畔生物科技有限公司

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人β淀粉样蛋白1-40 (Aβ1-40)酶联免疫检测试剂盒简介

用    途：用于人血清、血浆及相关液体样本中β淀粉样蛋白1-40 (Aβ1-40)测定。

工作原理

本试剂盒采用的是生物素双抗体夹心酶联免疫吸附法（ELISA）测定样品中人β淀粉样蛋白1-40 (Aβ1-40)水平。向预先包被了人β淀粉样蛋白1-40 (Aβ1-40)单克隆抗体的酶标孔中加入人β淀粉样蛋白1-40 (Aβ1-40)，温育；温育后，加入生物素标记的抗β淀粉样蛋白1-40 (Aβ1-40)抗体。再与链霉亲和素-HRP结合，形成免疫复合物，再经过温育和洗涤，去除未结合的酶，然后加入底物A、B，产生蓝色，并在酸的作用下转化成最终的黄色。颜色的深浅与样品中人β淀粉样蛋白1-40 (Aβ1-40)的浓度呈正相关。

试剂盒组成

需要而未提供的试剂和器材

1． 37℃恒温箱。

2． 标准规格酶标仪。

3． 精密移液器及一次性吸头

4． 蒸馏水，

5． 一次性试管

6． 吸水纸

注意事项

1． 从2-8℃取出的试剂盒，在开启试剂盒之前要室温平衡至少30分钟。酶标包被板开封后如未用完，板条应装入密封袋中保存。

2． 各步加样均应使用加样器，并经常校对其准确性，以避免试验误差

3． 严格按照说明书的操作进行，试验结果判定必须以酶标仪读数为准.

4． 为避免交叉污染，要避免重复使用手中的吸头和封板膜。

5． 不用的其它试剂应包装好或盖好。不同批号的试剂不要混用。保质前使用。

6． 底物B对光敏感，避免长时间暴露于光下。

洗板方法

手工洗板方法：甩掉酶标板内的液体；在实验台上铺垫几层吸水纸，酶标板朝下用力拍几次；将稀释后的洗涤液至少0.35ml注入孔内，浸泡1-2分钟。根据需要，重复此过程数次。

自动洗板：如果有自动洗板机，应在熟练使用后再用到正式实验过程中

标本要求

1．不能检测含NaN3的样品，因NaN3抑制辣根过氧化物酶的（HRP）活性。

2．标本采集后尽早进行提取，提取按相关文献进行，提取后应尽快进行实验。若不能马上进行试验，可将标本放于-20℃保存，但应避免反复冻融。

操作程序

1. 标准品的稀释：(本试剂盒提供原倍标准品一支，用户可按照下列图表在小试管中进行稀释。)

                                                                                                                                                                                                                2. 根据代测样品数量加上标准品的数量决定所需的板条数。每个标准品和空白孔建议做复孔。每个样品根据自己的数量来定，能使用复孔的尽量做复孔。

3. 加样：1）空白孔，空白对照孔不加样品，生物素标记的抗β淀粉样蛋白1-40 (Aβ1-40)抗体，链霉亲和素-HRP，只加显色剂A&B和终止液，其余各步操作相同；2）标准品孔：加入标准品50ul，链霉亲和素-HRP50ul(标准品中已事先整合好生物素抗体，故不加)；3）代测样品孔：加入样本40ul，然后各加入抗β淀粉样蛋白1-40 (Aβ1-40)抗体10ul、链霉亲和素-HRP50ul，盖上封板膜，轻轻震荡混匀，37℃温育60分钟。

4. 配液：将30倍浓缩洗涤液用蒸馏水30倍稀释后备用。

5. 洗涤：小心揭掉封板膜，弃去液体，甩干，每孔加满洗涤液，静置30秒后弃去，如此重复5次，拍干。

6. 显色：每孔先加入显色剂A50ul，再加入显色剂B50μl，轻轻震荡混匀，37℃避光显色15分钟.

7. 终止：每孔加终止液50μl，终止反应（此时蓝色立转黄色）。

8. 测定：以空白空调零，450nm波长依序测量各孔的吸光度（OD值）。 测定应在加终止液后10分钟以内进行。

9. 根据标准品的浓度及对应的OD值计算出标准曲线的直线回归方程，再根据样品的OD值在回归方程上计算出对应的样品浓度。也可以使用各种应用软件来计算。

操作程序总结：

1.准备试剂，样品和标准品

2.加入准备好的样品和标准品，生物素标记的二抗和酶标试剂，37℃反应60分钟

3.洗板5次，加入显色液A、B，37℃显色15分钟

4.加入终止液

5.10分钟内读OD值

6.计算

检测范围：100 pg/ml→4000 pg/ml。

保存：2-8℃。

有效期：6个月(2-8℃)。