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品牌：Wako
CAS No.： 储存条件：-20℃ 纯度：– |
| 产品编号
(生产商编号) |
等级 | 规格 | 运输包装 | 零售价(RMB) | 库存情况 | 参考值 |
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168-26033 |
for Cellbiology | 1 ml,for×5 | – | 2,850.00 | – | – |
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四种抑制剂混合物的冻干粉，浓度：1 vial /1mL4-(2-氨乙基)苯磺酰氟盐酸盐(50mM), 抑蛋白酶肽(15&maicro;M), E-64,
蛋白酶抑制剂(0.1mM), 亮肽素(0.1mM)目标蛋白酶： 丝氨酸蛋白酶, 半胱氨酸蛋白酶,酯酶，胰酶样蛋白酶
α-1-抗胰蛋白酶缺乏症和自身免疫性疾病关联介绍
protean重组蛋白——Pro3C HRV-3C 蛋白酶介绍
Pro3C (HRV-3C, Prescission) 蛋白酶是一种来自人鼻病毒 3C (HRV3C) 的转基因序列特异性半胱氨酸蛋白酶。由于其高序列特异性，它经常用于融合蛋白的切割以及体外和体内重组蛋白的标签去除。
这种重组蛋白酶是人鼻病毒 3C 的基因改良版本。它包含位于蛋白质 N 末端的 His6 标签，使其能够固定在 Ni 基亲和树脂上并从裂解反应中去除。它在很宽的温度范围内（4-34°C）都具有活性。最佳温度为 30°C，但对于温度敏感目标，它在 4°C 时也能发挥作用。优选的识别序列是Leu-Glu-Val-Leu-Phe-Gln|Gly-Pro (LEVLFQ|GP)。请使用我们的3C 底物 #1409或FRET 底物作为阳性对照。
蛋白质纯化后从融合蛋白中切割亲和标签。直接在溶液中或固定在亲和树脂上切割融合蛋白。 Protean Ltd. 提供的酶是在符合 ISO 9001 和 ISO 13485 国际标准的认证环境中生产的，符合下游 GMP 认证流程的使用条件。
亲和层析
50 mM Tris pH 7.0、150 mM NaCl、1 mM EDTA、1 mM DTT、50% 甘油
其八氨基酸序列具有高度特异性和活性，且脱靶效应最小。活性取决于靶蛋白的类型。应针对每种目标蛋白测试最佳酶用量。
-20°C，请勿储存在-80°C
简要描述：Proteinase K，产品类型：56-0002。蛋白酶 K 是一种蛋白水解酶。该酶使用Ca 2+离子来保持结构稳定性。由于酶的高总活性，可以在 EDTA 存在下进行裂解。因此，蛋白酶 K 在消化污染蛋白质和改进从各种生物样品中提取核酸方面非常有用。
详细介绍
产品咨询
| 品牌 | 其他品牌 | 供货周期 | 一个月 |
|---|---|---|---|
| 应用领域 | 医疗卫生,环保,化工,生物产业,综合 |
Proteinase K，产品类型：56-0002。
蛋白酶 K 是一种蛋白水解酶。该酶使用Ca 2+离子来保持结构稳定性。由于酶的高总活性，可以在 EDTA 存在下进行裂解。因此，蛋白酶 K 在消化污染蛋白质和改进从各种生物样品中提取核酸方面非常有用。
推荐使用
Minerva Biolabs 的 Venor®GeM 样品制备试剂盒设计用于从标准样品中高效提取支原体 DNA，例如含有多达 10 6 个细胞的细胞培养上清液。然而，其他样品基质如细胞团块、血清或发酵产物可能含有浓度高于 10 mg/ml 的蛋白质。这些样品可能需要用蛋白酶 K 进行额外处理，以增加总 DNA 产量并达到最高灵敏度。
可选与 Venor®GeM 样品制备试剂盒 (Minerva Biolabs) 或 Microsart® AMP 提取试剂盒 (Sartorius) 结合使用：
在添加调节剂后立即使用 10 µl 再水合蛋白酶 K 处理每个样品（Venor®GeM 样品制备试剂盒）或缓冲液 A（Microsart® AMP 提取物）。按照相应手册中的说明继续操作。
Proteinase K内容
蛋白酶 K：1 瓶，冻干
再水化缓冲液：1 瓶
将冻干的蛋白酶 K 溶解在 550 µl 随附的补液缓冲液中。
上海金畔生物代理Minerva Biolabs中国的业务，Minerva Biolabs代理、Minerva Biolabs上海代理、Minerva Biolabs华南代理、Minerva Biolabs华东代理、Minerva Biolabs华西代理、Minerva Biolabs华北代理，上海金畔生物科技有限公司专业代理进口品牌实验产品供应，欲购从速（敬请咨询。）
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公司突出创新思维，提高工作效能，减低运作成本，为客户提供优惠的价格。
蛋白质印迹实验方案
为了准备在凝胶上运行的样品，需要裂解细胞和组织以释放感兴趣的蛋白质。这会溶解蛋白质，使它们可以单独迁移通过分离凝胶。我们使用 RIPA 缓冲液 (beyotime P0013B) 来提取全细胞提取物和膜结合蛋白。
一旦发生裂解，蛋白水解、去磷酸化和变性就开始。如果样品始终保存在冰上或 4°C 下，并且将适当的抑制剂新鲜添加到裂解缓冲液中，这些事件可以大大减慢。 Pmsf是我们经常使用的蛋白酶抑制剂。
用干净的工具解剖感兴趣的组织，最好在冰上，并尽可能快地防止蛋白酶降解。均质化前应将 RIPA（含 1mM pmsf）冰冷。
将组织切成小片，对于约 20 mg 的组织，将约 250 μl 裂解缓冲液快速加入管中，用电动匀浆器（或玻璃匀浆器）匀浆直至全裂解。
在微量离心机中于 4°C 下以 10000~14000g 离心 5 分钟。轻轻地从离心机中取出管子并置于冰上，吸出上清液并置于冰上保存的新管中；丢弃颗粒。
使用 PAGE 凝胶、Bradford 测定、Lowry 测定或 BCA 测定。牛血清白蛋白（BSA）是一种常用的蛋白质标准品。
要变性，请使用带有阴离子变性去污剂十二烷基硫酸钠 (SDS) 的上样缓冲液，并将混合物在 95-100°C 下煮沸 5 分钟。
清洁玻璃并设置电泳系统。
制备PAGE胶，根据蛋白质的分子量选择不同浓度的分离胶：
| 蛋白质大小 (kDa) | 凝胶百分比(%) |
|---|---|
| 4-40 | 20 |
| 12-45 | 15 |
| 10-70 | 12 |
| 30-100 | 10 |
| 50-200 | 8 |
4%堆积胶，选择预染色的蛋白质Marker Proteins的大小，以帮助区分蛋白质大小和电泳示踪剂。
上样跑胶，每孔加样量20-40μg蛋白，加样时注意不要溢出到相邻孔中，造成胶戳孔和交叉污染。
按照电泳方法推荐的说明进行电泳，当溴酚蓝将凝胶耗尽时终止凝胶电泳。
将蛋白质从凝胶转移到膜上。 （根据trans-blot系统推荐的说明。）
查看膜中的蛋白质：丽春红。转印后，用丽春红染料染色约2～5min，检查转印是否成功。然后用蒸馏水冲洗掉染料。
封闭膜一般用5%脱脂牛奶，或3%~5% BSA。 4 ℃摇床振荡封闭过夜，或37 ℃封闭2小时。封闭后TBS洗涤5-10秒。
与一抗一起孵育。按照推荐的抗体稀释度，用TBST（或1%~3%脱脂牛奶）稀释抗体。然后将膜装入自封袋和固定层压机中，将抗体溶液添加到自封袋中，并确保膜与足够体积的抗体一起孵育。
37℃振荡孵育1～3 h（根据抗体效价和亲和力），或4℃过夜孵育，TBST室温摇床上洗3次，每次5～10 min。
与二抗孵育，同步骤(4)，用TBST稀释，37℃振荡孵育1～3 h。
在暗室中，将显影剂和固定剂分别装入塑料托盘中，在离心管中混合两种试剂（A 和 B 的体积）。确保膜表面蛋白与混合物充分接触。 1~2分钟后去除残留物。
红灯处取出胶片，打开胶片夹，将胶片放在胶片上，取下胶片夹，根据信号强度调整曝光时间，记住曝光过度的胶片不适合分析。
曝光完成后，取出胶片，迅速浸入显影液中，终止显影。显影后，应立即将胶片浸入定影液中成透明膜。用自来水清洗除去残留的固定剂后，在室温下干燥。