凯氏定氮分析简述

凯氏定氮法是测定某些有机化合物中三阴性态氮的分析方法。该方法由丹麦化学家Johan Kjeldahl于1883年开发，广泛用于食品中蛋白质的测定，因为蛋白质是由含氮氨基酸连接在一起组成的大分子。当用于蛋白质测定时，通过使用适当的数字因子将测量的氮百分比转换为当量蛋白质含量。对于肉类样品，该系数为 6.25，因为肉类蛋白质大约含有 16% 的氮。凯氏定氮法不直接检测NN和NO键（例如叠氮化物、硝酸盐、亚硝酸盐、硝基等）。含有这些基团的样品在凯氏定氮分析之前必须进行预处理或置于还原条件下。当样品中的有机物质被沸腾的浓硫酸消化破坏时，样品中的氨基氮转化为硫酸氢铵。添加硫酸钾以提高混合物的沸点，从而加速分解。必须根据样品中存在的有机物质的量来控制硫酸和硫酸钾的用量，以确保维持 370 – 400°C 的适当消解温度范围。温度过低可能会导致消化时间过长和/或消化不全，而硫酸钾与硫酸的比例过高可能会使温度升高到 400°C 以上，导致氮热解损失和结果较低。还添加金属催化剂以加速消化。在过去，汞是用于此目的的催化剂，但出于安全和环境原因，现在更常用铜和硒催化剂。

样品消化完成后，将过量的氢氧化钠添加到消化混合物中以中和剩余的硫酸并释放含氮分子分解时形成的氨。然后将氨蒸馏成过量的标准酸，并用标准碱反滴定过量的酸。作为替代方案，可以将氨蒸馏到硼酸溶液中，然后可以通过用标准酸直接滴定来测定氨。氨也可以通过比色法（例如，通过与酚盐离子反应）或通过使用氨选择性电极来测定。在这些情况下，使用标准无机酸作为氨吸收剂。如果使用汞或汞盐作为催化剂，硫代硫酸盐或硫化物与氢氧化钠一起添加以分解任何汞-铵复合物，从而释放出氨并沉淀汞化合物，这可能会干扰氨的蒸馏。将锌粒、浮石或其他合适的沸石添加到蒸馏烧瓶中以防止“暴沸”，“暴沸”可能会由于除氨之外还残留一些苛性碱而导致错误结果。如果氨被硼酸溶液吸收后，直接用标准酸滴定，可以使用甲基红、甲基紫或溴甲酚绿-甲基红混合指示剂作为指示剂。如果使用过量的标准酸作为氨的吸收剂，这些指示剂还可用于使用标准氢氧化钠的反滴定。从而释放氨并沉淀汞化合物，汞化合物可能干扰氨的蒸馏。将锌粒、浮石或其他合适的沸石添加到蒸馏烧瓶中以防止“暴沸”，“暴沸”可能会由于除了氨之外还残留一些苛性碱而导致错误结果。如果氨被硼酸溶液吸收后，直接用标准酸滴定，可以使用甲基红、甲基紫或溴甲酚绿-甲基红混合指示剂作为指示剂。如果使用过量的标准酸作为氨的吸收剂，这些指示剂也可用于使用标准氢氧化钠的反滴定。从而释放氨并沉淀汞化合物，汞化合物可能干扰氨的蒸馏。将锌粒、浮石或其他合适的沸石添加到蒸馏烧瓶中以防止“暴沸”，“暴沸”可能会由于除了氨之外还残留一些苛性碱而导致错误结果。如果氨被硼酸溶液吸收后，直接用标准酸滴定，可以使用甲基红、甲基紫或溴甲酚绿-甲基红混合指示剂作为指示剂。如果使用过量的标准酸作为氨的吸收剂，这些指示剂也可用于使用标准氢氧化钠的反滴定。将浮石或其他合适的沸石添加到蒸馏烧瓶中以防止“暴沸”，“暴沸”可能会由于除氨之外还残留一些苛性碱而导致错误结果。如果氨被硼酸溶液吸收后，直接用标准酸滴定，可以使用甲基红、甲基紫或溴甲酚绿-甲基红混合指示剂作为指示剂。如果使用过量的标准酸作为氨的吸收剂，这些指示剂也可用于使用标准氢氧化钠的反滴定。将浮石或其他合适的沸石添加到蒸馏烧瓶中以防止“暴沸”，“暴沸”可能会由于除氨之外还残留一些苛性碱而导致错误结果。如果氨被硼酸溶液吸收后，直接用标准酸滴定，可以使用甲基红、甲基紫或溴甲酚绿-甲基红混合指示剂作为指示剂。如果使用过量的标准酸作为氨的吸收剂，这些指示剂还可用于使用标准氢氧化钠的反滴定。直接用标准酸滴定，可以使用甲基红、甲基紫或溴甲酚绿-甲基红混合指示剂作为指示剂。如果使用过量的标准酸作为氨的吸收剂，这些指示剂还可用于使用标准氢氧化钠的反滴定。直接用标准酸滴定，可以使用甲基红、甲基紫或溴甲酚绿-甲基红混合指示剂作为指示剂。如果使用过量的标准酸作为氨的吸收剂，这些指示剂还可用于使用标准氢氧化钠的反滴定。

所涉及的反应可总结如下：

RICCA CHEMICAL COMPANY 拥有凯氏定氮分析所需的所有吸收剂、中和剂、滴定剂和指示剂，以及酚盐比色测定或氨选择电极法所需的试剂。

适用于动物培养细胞/组织的ex kine Pro总蛋白提取试剂盒介绍

当你从细胞和组织中提取蛋白质时，有没有蛋白质流失的问题？你是否厌倦了繁琐而持久的实验操作步骤？Abbkine的这款新产品适合您！它的神奇之处在于，它不仅可以在1分钟左右完成蛋白质的提取，而且可以获得高浓度和全谱的蛋白质，既快又高质量。它是您提高实验效率的产品！

与传统方法不同的是，柱法不仅可以避免溶液法中蛋白质损失的问题，而且可以简单快速地快速温和地提取不同类型的蛋白质。

产品优势

1. 简单快速，7 min即可提取；
2. 不改变蛋白质谱，高产率（3-20毫克/毫升）；
3. 禁止超声波破碎、煮沸、反复冷冻或解冻；
4. 可供选择的变性或未变性蛋白质。

实验结果

更高的裂解效率

分离的293细胞悬液用来自D制造商和Abbkine的RIPA缓冲液裂解。细胞裂解物以12000 g离心10分钟。1显示来自D制造商的RIPA裂解缓冲液（弱），2显示来自D制造商的RIPA裂解缓冲液（培养基），3显示来自D制造商的RIPA裂解缓冲液（强），4显示来自Abbkine的RIPA裂解缓冲液。来自D制造商的RIPA缓冲液显示不全裂解，其证据是在试管底部存在明显的不溶性沉淀，而来自Abbkine的RIPA裂解缓冲液显示全裂解。

高蛋白质产量

使用不同国际品牌和国内品牌的蛋白提取试剂盒产品对小鼠肝组织进行蛋白提取实验，包括变性裂解物RIPA和非变性裂解物的处理。结果如下:

在Abbkine柱法提取蛋白质的结果中，变性裂解获得的蛋白质浓度高达20.06 mg/mL，非变性裂解获得的蛋白质浓度为20.99 mg/mL。

没有蛋白质流失

不同厂家的变性裂解缓冲液和天然缓冲液提取的小鼠肝脏蛋白质谱。提取的蛋白质在10% SDS-PAGE中分离并用考马斯亮蓝染色。1号泳道，记号笔；泳道2，来自制造商的天然缓冲液；第3泳道，来自Abbkine的原生缓冲液；泳道4，来自制造商的变性裂解缓冲液；泳道5，来自B制造商的变性裂解缓冲液；泳道6，来自C制造商的变性裂解缓冲液；泳道7，来自Abbkine的变性裂解缓冲液；泳道8，来自D制造商的变性裂解缓冲液。

可以提取核蛋白和膜蛋白

从293细胞和小鼠肝脏中提取总蛋白质。第1道，由B制造商的检测试剂盒提取的5 μL蛋白质；泳道2，由B制造商的检测试剂盒提取的2.5 μL蛋白质；第3道，5 μL通过Abbkine检测试剂盒提取的蛋白质；第4泳道，2.5 μL由Abbkine检测试剂盒提取的蛋白质。

结果表明，Abbkine试剂盒能够更有效地提取核蛋白和膜蛋白，并且在细胞和组织中都可以获得背景清晰的蛋白质条带。