Cell Cycle and Apoptosis Analysis Kit 细胞周期与细胞凋亡检测试剂盒
货号: JP3234-100T 品牌: Jinpan 标签: 细胞生物学研究
描述
Caspase-9 Activity Assay Kit (Fluorometric)
Caspase-9活性检测试剂盒(荧光法)
产品信息
产品名称
|
产品编号 |
规格 |
价格(元) |
Caspase-9活性检测试剂盒(荧光法)
|
JP3234-20T |
20T |
930
|
Caspase-9活性检测试剂盒(荧光法) |
JP3234-100T |
100T |
2980
|
产品描述
Caspases(Cysteine-requiringAspartate Proteases)是一个高度保守的半胱氨酸蛋白酶家族,特异性识别底物中的天冬氨酸残基,在介导细胞凋亡的过程中发挥着非常重要的作用。Caspases以潜在酶原的形式表达,通过自发蛋白分解机制或经其他蛋白酶(通常是其他caspases)加工处理的方式被活化。人caspases可细分为三大功能组:细胞因子活化(caspase-1,-4,-5和-13),凋亡启动(caspase-2,-8,-9和-10)和凋亡执行(caspase-3,-6和-7)。
Caspase-9(Caspase9),也称为Mch6,ICE LAP6和Apaf3,作为caspases家族的成员之一,含CARD结构域(caspase募集结构域),是细胞凋亡信号转导过程中比较上游的一个caspase。Caspase-9酶原分子量约47kDa,存在于胞浆内,一旦活化,转移到线粒体。Caspase-9参与caspase活化级联,负责凋亡执行,和切割/活化下游的caspase-3和caspase-6。当募集到Apaf1/细胞色素c复合物后,caspase-9被激活。Caspase-9的激活可通过磷酸化进行调控。
Caspase-9活性检测试剂盒(荧光法)(Caspase-9 Activity Assay Kit, Fluorometric or Caspase-9 Fluorometric Assay Kit)以偶联上发色基团AFC的caspase-9序列特异性的多肽为底物。当底物被caspase-9剪切后,发色基团被释放出来,进而用荧光酶标仪或荧光光度计来测定其荧光强度(激发波长=485nm,发射波长=535nm)。通过计算RFU凋亡诱导组/RFU阴性对照组的比值来确定凋亡诱导组caspase-9的活化程度。
本品适用于培养细胞以及新鲜组织的caspase-9活性检测。
产品包装
编号 |
组分名称 |
保存方法 |
货号(规格) |
JP3234-20T |
JP3234-100T |
JP3234-A |
Lysis Buffer裂解缓冲液 |
2-8℃ |
5ml |
20ml |
JP3234-B |
2× Reaction Buffer 2×反应缓冲液 |
2-8℃ |
2ml |
10ml |
JP3234-C |
Caspase-9 Substrate Caspase-9底物 |
-20℃避光 |
6μl |
30μl |
JP3234-D |
0.1M DTT |
-20℃避光 |
60μl |
250μl |
保存与运输方法
保存:-20℃保存,1年有效。开盒后置Lysis Buffer和2× Reaction Buffer于2-8℃保存。Caspase-9 Substrate和0.1M DTT需要避光冻存。
运输:冰袋运输。
注意事项
1) Caspase-9 Substrate需避光保存和使用。
2) 某些凋亡诱导剂诱导的凋亡可能通过caspase-9非依赖的方式进行,此种情况使用本品检测的caspase-9活性无明显变化,则,需要考虑凋亡机制中的其他信号通路。
3) 起始细胞数量需达3~5×106个或新鲜组织量达50~100mg,以保证达到测定所需的100~200μg蛋白量。Caspase-9的活性与细胞裂解后的蛋白含量有关,如测定的RFU值偏低,可通过适当延长反应时间来操作。但如果测定的RFU值依然不高,则要通过增加细胞数量或组织量的方法来提高蛋白量。
4) 为了您的安全和健康,请穿实验服并戴一次性手套操作。
使用方法
1.需要的其他试剂和材料
仪器:低温高速离心机、荧光酶标仪、微量移液器、玻璃匀浆器(组织样本)
耗材:1.5ml微量离心管、白色或黑色(不透明、平底)的96孔酶标板
试剂:PBS、蛋白定量试剂(比如:Bradford法蛋白浓度测定试剂盒)、ddH2O
2.试剂准备
2.1 Lysis Buffer(含DTT)
于实验前,按每50μl Lysis Buffer 加入0.5μl DTT的比例准备足量的裂解工作液,置于4℃或冰上待用。
2.2 2×Reaction Buffer(含DTT)
于使用前,按每50μl 2×Reaction Buffer 加入0.5μl DTT的比例准备足量的反应工作液。
2.3 Caspase-9 Substrate工作液
将Caspase-9 Substrate从冰箱内取出,置于室温(或25℃水浴)使其充分融化,低速离心使其沉至管底。于使用前,按照19.5μl 2×Reaction Buffer 加入0.5μl Caspase-9 Substrate的比例准备足量的Caspase-9 Substrate工作液。
3.样本准备
3.1 细胞裂解
a)用合适方法诱导细胞凋亡,同时设立阴性对照组(不加诱导剂),收集3~5×106个细胞。
b)PBS洗涤细胞2次(2000rpm,离心5min),尽量吸尽PBS上清。
c)往离心的沉淀细胞中加入100μl预冷的Lysis Buffer(含DTT),吹打混匀。
d)置冰上裂解20~60min,其间涡旋振荡3~4次,每次10s;或冻融2~3次。
e)4℃,10,000rpm离心1min。
f)小心吸取上清(含裂解释放的蛋白质)转移到新的EP管内,置于冰上待用。
g)取少量上清(1~2μl),用常规方法(Bradford法)测定蛋白浓度。
3.2 组织裂解
a)取50~100mg组织置于培养皿内,用手术剪剪碎成3mm×3mm左右的小块,加入150~200μl预冷的Lysis Buffer(含DTT),用玻璃匀浆器上下手动匀浆15次,注意低温操作。
b)将组织匀浆液转移到1.5ml预冷的离心管,10,000rpm,4℃离心5min。
c)小心吸取上清(含裂解释放的蛋白质)转移到新的EP管内,置于冰上待用。
d)取少量上清(1~2μl),用常规方法(Bradford法)测定蛋白浓度。
4.Caspase-9活性检测
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20T |
规格信息
品牌: |
Jinpan
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CAS: |
N/A
|
规格: |
100T
|
货期: |
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