同仁化学内体-外泌体 外泌体(Exosomes)提取试剂盒—ExoIsolator Exosome Isolation Kit EX10| 日本DOJINDO

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内体-外泌体

外泌体是一种能被大多数细胞分泌的微小膜泡,具有脂质双层膜结构,直径大约40-100 nm。尽管外泌体最初在1983年就被发现,但人们一直认为它只是一种细胞的废弃物。然而最近几年,人们发现这种微小膜泡中含有细胞特异的蛋白、脂质和核酸,能作为信号分子传递给其他细胞从而改变其他细胞的功能。 2010年以来与外泌体相关的文献数更是呈现爆发式增长,随着研究的不断深入,外泌体相关的实验在疾病机理、分子诊断、药物递送等领域都有着非常广阔的前景。
外泌体
内体

品名货号用途

外泌体(Exosomes)提取试剂盒—ExoIsolator Exosome Isolation Kit EX10 外泌体提取
ExoIsolator Isolation Filter EX11 外泌体提取
ExoSparkler Exosome Membrane Labeling Kit-Green试剂盒 EX01 外泌体膜检测
ExoSparkler Exosome Membrane Labeling Kit-Red试剂盒 EX02 外泌体膜检测
ExoSparkler Exosome Membrane Labeling Kit-Deep Red试剂盒 EX03 外泌体膜检测
ExoSparkler Exosome Protein Labeling Kit-Green试剂盒 EX04 外泌体蛋白检测
ExoSparkler Exosome Protein Labeling Kit-Red试剂盒 EX05 外泌体蛋白检测
ExoSparkler Exosome Protein Labeling Kit-Deep Red试剂盒 EX06 外泌体蛋白检测
AcidSensor Labeling Kit – Endocytic Internalization Assay 细胞内吞作用的内化过程检测 A558 细胞内吞作用的内化过程检测
ECGreen-Endocytosis Detection试剂盒 E296 细胞内吞作用

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> 外泌体提取操作视频

> 细胞摄取外泌体研究

 

染色后的外泌体的应用

近年来研究发现,外泌体作为细胞外囊泡(Extracellular vesicle; EV)的一种,与癌症的恶化与转移密切相关,外泌体相关的研究也逐渐成为了关注的热点。

为了研究通过外泌体的细胞间通信,细胞摄入外泌体时的示踪技术非常重要,因此细胞外囊泡的磷脂双分子层或蛋白质的荧光染色试剂被广泛应用。

内体-外泌体 外泌体(Exosomes)提取试剂盒—ExoIsolator Exosome Isolation Kit EX10

同仁化学外泌体膜染色试剂的独特优势

同仁化学外泌体膜染色试剂盒与其他同类染色试剂相比,具有背景低,无团聚,不影响外泌体性质等独特优势。

外泌体的标记和纯化一步到位

ExoSparkler系列已经对外泌体标记的最佳条件进行摸索并做成了操作手册,试剂盒内包含纯化所需的过滤管,可以简单快捷的进行外泌体的标记和纯化。

内体-外泌体 外泌体(Exosomes)提取试剂盒—ExoIsolator Exosome Isolation Kit EX10

多种颜色选择

ExoSparkler系列包括膜 (Mem Dye)和蛋白质 (Protein Dye)荧光染色试剂,各三种颜色 (Green, Red, Deep Red)。

内体-外泌体 外泌体(Exosomes)提取试剂盒—ExoIsolator Exosome Isolation Kit EX10

■ 实验条件

高速离心法纯化的外泌体 (蛋白质的量为10 μg)经过各试剂染色后,与HeLa细胞(1.25×104 cells)一起培养24 h,清洗后进行荧光观察。

■ 观察条件

Green:

Ex 488 nm/ Em 490-540 nm

Red:

Ex 561 nm/ Em 570-640 nm

Deep Red:

Ex 640 nm/ Em 640-760 nm

同仁化学线粒体染色 线粒体损伤 线粒体自噬 线粒体氧化应激 线粒体呼吸| 日本DOJINDO

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线粒体

线粒体(mitochondrion) 是一种存在于大多数细胞中的由两层膜包被的细胞器,是细胞中制造能量的结构,是细胞进行有氧呼吸的主要场所,线粒体拥有自身的遗传物质和遗传体系,但其基因组大小有限,是一种半自主细胞器。除了为细胞供能外,线粒体还参与诸如细胞分化、细胞信息传递和细胞凋亡等过程,并拥有调控细胞生长和细胞周期的能力。最近越老越多的研究发现线粒体在细胞中的作用远远不止”细胞能量站”。它们参与了各种细胞功能调控,与很多人类疾病存在着莫大的联系。包括细胞信号传导、代谢、自噬、衰老和肿瘤发生都与线粒体的质量和活性相关
线粒体染色
线粒体损伤
线粒体自噬
线粒体氧化应激
线粒体呼吸

品名货号用途

MitoBright IM Red for Immunostaining试剂 MT15 免疫荧光用线粒体荧光染料Red
MitoBright LT Green试剂 MT10 线粒体长效荧光染色(绿色)
MitoBright LT Red试剂 MT11 线粒体长效荧光染色(红色)
MitoBright LT Deep Red试剂 MT12 线粒体长效荧光染色(深红色)

线粒体膜电位检测试剂盒 MT13 线粒体膜电位检测
线粒体膜电位检测试剂盒—JC-1 MitoMP Detection Kit MT09 线粒体膜电位检测
Cellstain- MitoRed试剂 R237 线粒体ATP检测-红色

Mtphagy Dye试剂 MT02 线粒体自噬
线粒体自噬—Mitophagy Detection Kit MD01 线粒体自噬检测

mtSOX Deep Red – Mitochondrial Superoxide Detection MT14 线粒体超氧化物检测
铁离子荧光探针—Mito-FerroGreen M489 线粒体内二价铁离子检测
Si-DMA for Mitochondrial Singlet Oxygen Imaging试剂 MT05 线粒体内单线态氧检测
MitoPeDPP试剂 M466 线粒体内脂质过氧化物检测

ADP/ATP比率检测试剂盒—ADP/ATP Ratio Assay Kit-Luminescence A552 检测细胞中ADP与ATP的比率
Oxygen Consumption Rate(OCR) Plate Assay Kit-氧消耗量检测试剂盒 E297 氧消耗量检测
Cell Counting Kit-Luminescence试剂盒 CK18 ATP活性检测
Glutamine Assay Kit-WST试剂盒 G268 谷氨酰胺的定量检测
Glutamate Assay Kit-WST试剂盒 G269 谷氨酸的定量检测
NAD/NADH Assay Kit-WST试剂盒 N509 NAD/NADH检测试剂盒
NADP/NADPH Assay Kit-WST试剂盒 N510 NADP/NADPH检测
α-Ketoglutarate Assay Kit-Fluorometric K261 对细胞内的α-KG进行定量检测

线粒体功能研究

▶ 线粒体呼吸指标一览表

▶ 线粒体染色选择指南

▶ 线粒体自噬检测

▶ 线粒体膜电位选择指南

▶ 代谢相关检测

▶ 癌症关联检测

▶ 脂质过氧化物积累与细胞衰老、线粒体之间的联系

 

线粒体质量控制途径

线粒体染色 线粒体损伤 线粒体自噬 线粒体氧化应激 线粒体呼吸

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其他关联产品

 

线粒体呼吸 OCR耗氧率检测       Oxygen Consumption Rate(OCR) Plate Assay Kit
外泌体提取                                 ExoIsolator Exosome Isolation Kit
外泌体膜标记检测                       ExoSparkler Exosome Membrane Labeling Kit-Green/Red/Deep Red
溶酶体功能(pH)检测               Lysosomal Acidic pH Detection Kit

线粒体染色 线粒体损伤 线粒体自噬 线粒体氧化应激 线粒体呼吸

线粒体简要通路图

 

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线粒体相关检测指标

线粒体自噬检测

线粒体自噬
试剂 Mtphagy Dye Keima-Red
原理 线粒体自噬染料是一种PH敏感的荧光探针,该染料聚集在线粒体中,并由溶酶体的酸性条件而发出荧光 这是一种基于PH感应比值的荧光蛋白。该蛋白在溶酶体中具有比较高的荧光比值(如550 nm/440 nm)。
固定细胞染色
活细胞染色 Yes Yes
活细胞染色后固定
染色时间 >30 min
Ex/Em 530/700 440,550/620
产品货号 MD01 , MT02

线粒体自噬Mitophagy试剂盒【MD01】无需蛋白质表达/转染。添加试剂即可轻松检测线粒体自噬。

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线粒体膜电位检测

Membrane potential

线粒体膜电位

试剂 JC-1 MT-1 TMRM,   TMRE
原理 JC-1是一种被广泛使用的小分子线粒体膜电位探针,依赖于线粒体膜电位在线粒体中聚集,染料伴随聚集过程,荧光从绿色   (530 nm) 变为红色 (590 nm)。当线粒体发生去极化,红/绿荧光强度比值降低。 由于膜电位,细胞渗透性荧光染料在完整的线粒体中积累。MT-1具有极强的光稳定性,比JC-1更灵敏,可以提供与TMRE相当的检测灵敏度。 该试剂是细胞渗透性荧光染料,由于膜电位在完整的线粒体中积累。探针扩散发生在膜电位降低的受损线粒体中。
固定细胞染色
活细胞染色 Yes Yes Yes
活细胞染色后固定 Yes
染色时间 10- 60 min 30 min 30- 60 min
Ex/Em Monomer:514/529

J-aggregation: 585/590

530-560 / 570-640 550/575
产品货号 MT09 MT13

JC-1、TMRE和TMRM广泛用于监测线粒体膜电位。然而,这些染料具有局限性,例如光稳定性低和醛固定后的保留性差。这些限制导致实验再现性差。

MT-1 MitoMP检测试剂盒具有高光稳定性,即使在染色后用多聚甲醛固定的细胞中。这些特征使得MT-1试剂盒能够产生高度可重复的结果。

此外,该试剂盒中包含的成像缓冲液使背景荧光最小化,并在进行测定时保持细胞活力。

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线粒体金属离子检测

Iron ion (Fe2+)

亚铁离子

Calcium ion (Ca2+)

钙离子

试剂 Mito-FerroGreen Rhod 2-AM
原理 该试剂是一种细胞通透性探针,其积累在线粒体中,并与线粒体中的亚铁离子发生特异性反应,发出绿色荧光。 该试剂是一种细胞通透性探针,该探针积聚在线粒体中,并与线粒体中的钙离子发生特异性反应,发出红色荧光。
固定细胞染色
活细胞染色 Yes Yes
活细胞染色后固定
染色时间 30 min 30-60 min
Ex/Em 505/535 553/576
产品货号 M489 R002

线粒体荧光染色

Mitochondria staining

线粒体染色

试剂 MitoBright LT series MitoBright IM Red MitoTracker series
原理 细胞渗透性荧光染料,基于线粒体膜电位而在完整的线粒体中积累。 细胞渗透性荧光染料,由于膜电位而聚集在完整的线粒体中,并与蛋白质和其他生物分子共价结合。 细胞渗透性荧光染料,基于线粒体膜电位而在完整的线粒体中积累。
固定细胞染色
活细胞染色 Yes Yes Yes
活细胞染色后固定 Yes
染色时间 >10 min 30 min 15 -45 min
Ex/Em 493/508,547/563, 643/663 548/566 490/516~644/665
产品货号 MT10MT11MT12 MT15

在HeLa细胞中4天后,MitoBright LT仍被证实保留在线粒体中。

线粒体染色 线粒体损伤 线粒体自噬 线粒体氧化应激 线粒体呼吸

同仁化学二价铁离子检测探针—FerroOrange F374 细胞内二价铁离子检测| 日本DOJINDO

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铁死亡的发生

在细胞中有大量的脂质组成细胞膜,细胞膜上的脂质会以大量磷脂的形式存在,细胞内的脂质会分为单不饱和脂肪酸和多不饱和脂肪酸,在氧分子和铁离子的存在下,多不饱和脂肪酸的增加容易被氧化而产生脂质过氧化物,有更多的不饱和脂肪酸的情况下,会更容易扩散,引起细胞膜损伤,也就是我们说的铁死亡。但是正常的细胞是可以调控这种细胞膜损伤,也就是我们常说的GPX4通路等等抗氧化系统,所以细胞才能在氧化物质存在的情况下,仍然可以存活。

二价铁离子检测探针—FerroOrange F374 细胞内二价铁离子检测
Iron Assay Kit -Colorimetric-试剂盒 I291 组织总铁含量及二价铁含量检测
铁离子荧光探针—Mito-FerroGreen M489 线粒体内二价铁离子检测
ROS Assay Kit -Photo-oxidation Resistant DCFH-DA- R253 耐光型活性氧检测
活性氧检测试剂盒(ROS Assay Kit) R252 活性氧检测
氧化型/还原型谷胱甘肽定量试剂盒-GSSG/GSH Quantification Kit II G263 氧化型/还原型谷胱甘肽定量
胱氨酸摄取能力检测试剂盒—Cystine Uptake Assay Kit UP05 胱氨酸摄取能力检测
Glutamine Assay Kit-WST试剂盒 G268 谷氨酰胺的定量检测
Glutamate Assay Kit-WST试剂盒 G269 谷氨酸的定量检测

关于感染与免疫的小知识

关于感染与免疫的小知识

免疫系统是身体抵御感染的保护装置;没有它,人类将更容易患病及其严重程度。它是一个由先天、被动和主动过程组成的网络,协同工作以应对多种病原体。

免疫有两种主要类型:先天免疫和 适应性免疫。先天免疫在机制上更简单,但在作为病原体的第一道防线方面仍然发挥着关键作用。它由物理屏障(通常是外部屏障)组成,例如粘膜和皮肤膜以及可以识别和杀死有害生物的蛋白质。适应性免疫要复杂得多。

适应性免疫反应由称为淋巴细胞的白细胞进行,这些白细胞分为两个不同的类别,即 B 细胞和 T 细胞,每种细胞在保护身体免受伤害方面都发挥着关键作用。在抗体反应中,B 细胞的作用是分泌由称为免疫球蛋白的蛋白质组成的抗体。它们在整个血流中不断循环,如果存在外来抗原,它就会结合,使其失活,从而防止对宿主细胞的进一步伤害。

关于感染与免疫的小知识

关于感染与免疫的小知识

T细胞在骨髓中合成并在胸腺中成熟,在这个成熟阶段,它们增殖并分化为辅助性T细胞、调节性T细胞、细胞毒性T细胞或记忆性T细胞。

  • 辅助 T 细胞—— 可以说是最重要的 T 细胞分化,这些细胞除了刺激细胞毒性 T 细胞杀死感染目标外,还帮助 B 细胞分泌抗体。

  • 调节性 T 细胞 –抑制免疫反应,从而维持体内平衡和自我耐受。这些细胞还在自身免疫性疾病的预防中发挥作用。

  • 细胞毒性 T 细胞——它们主要在细胞内水平上对病毒和恶性细胞做出反应。它们表达 T 细胞受体 (TCR),如果免疫系统以前遇到过抗原,则可以识别该抗原。

  • 记忆T细胞——这是一种在感染后形成的长寿细胞,正如其名称所包含的那样,它可以记住有效、最快的反应,从而防止对宿主细胞的进一步伤害。

吞噬细胞是另一种类型的免疫细胞,特别是白细胞,在免疫反应的晚期和早期阶段发挥着关键作用。它具有吞噬、摄取甚至消化异物颗粒(例如细菌、碳和灰尘)的能力。它们通过将细胞质延伸成伪足(临时的臂状突出物)来做到这一点,这些突出物围绕着颗粒形成液泡。就抗原而言,它不能影响吞噬细胞,因为其毒素包含在液泡中,然后吞噬细胞释放酶,使消化发生。

关于感染与免疫的小知识

吞噬细胞有两大类,如下:

中性粒细胞——这些是小颗粒白细胞,可以快速定位伤口部位并吞噬细菌。它们还具有有效去除真菌感染的关键能力。

单核细胞——当细菌进入体内时,它们可以变成巨噬细胞或树突状细胞。这决定了细胞是否会杀死外来入侵者或提醒其他血细胞协助破坏,从而预防感染



细胞培养的最佳营养物质和生长因子是什么?

细胞培养的最佳营养物质和生长因子是什么?

哪种营养素/生长因子更适合我的细胞培养?

细胞培养是一种不断发展的实践,对再生医学产生巨大影响。细胞培养过程依赖于对影响培养结果的培养条件的精确调整。每种细胞类型都需要一组特定的信号才能有效生长。此外,所有细胞类型都需要基本营养物质和培养基成分。因此,一些培养基成分是通用的,而另一些则根据细胞类型而特定。

维持细胞增殖的通用培养基成分

这是维持细胞增殖的通用培养基成分列表。

  • 能量:来自碳水化合物或糖,是维持细胞新陈代谢所必需的。

  • 必需金属和矿物质:例如钙、镁、铁和其他微量金属是调节代谢途径和细胞过程所必需的。

  • 缓冲剂:磷酸盐、醋酸盐和柠檬酸盐维持 pH 水平,中和代谢活动产生的酸化。

  • 营养素:由维持细胞途径和信号传导所需的蛋白质(或其组成部分:肽和氨基酸)或生长因子组成。培养基的这种成分根据细胞类型而变化,并且可以根据特定需要进行定制。下面概述了一些主要细胞类型及其所需营养的详细信息。

培养基还可能含有其他成分,例如 pH 变化指示剂、选择性抗菌剂和促进细胞培养实践的胶凝剂。虽然这些培养基成分不直接影响细胞增殖,但会影响细胞培养性能。

诱导多能干细胞 (iPSC) 和成纤维细胞生长因子 2 (FGF2)

多能干细胞

多能干细胞可以自我更新,并且可以分化成几乎任何其他细胞类型,包括神经元、心血管细胞、肝细胞、上皮细胞等。iPSC是一种特定的干细胞类型,是通过将体细胞重编程为多能干细胞状态而产生的。生长因子影响 iPSC 的增殖或分化行为。 FGF2 发出 iPSC 作为未分化细胞增殖的信号。

FGF生长因子

FGF2调节丝裂原激活蛋白激酶 (MAPK)/细胞外信号调节激酶 (ERK) 通路 [ 2 ],这些通路对于细胞信号级联反应至关重要,包括调节细胞增殖和分化的信号级联反应。 FGF2 减少自发分化,从而维持可无限扩增的 iPSC 培养物。因此,FGF2 是维持 iPSC 培养的关键生长因子。

神经元细胞、脑源性神经营养因子 (BDNF) 和胶质细胞源性神经营养因子 (GDNF)

神经元干细胞

神经元是一种重要的细胞类型,可以发送信息来控制整个身体的基本功能。神经元通常存在于脑组织中,可以由干细胞产生。多能细胞首先分化为神经祖细胞(NPC),进一步分化为神经元。 iPSC 衍生的 NPC 随后可用于构建 3D 结构图案,例如大脑类器官。生长因子信号传导维持神经元生长并指导生成的神经元类型。 BDNF 和 GDNF 是神经元分化和增殖的两种关键生长因子。

BDNF生长因子

BDNF激活多种途径,包括 MAPK、磷脂酶 Cy 和磷脂酰肌醇 3 激酶途径,调节神经元存活和分化所需的蛋白质转录。 [ 3 ]。 BDNF 促进神经元存活、轴突伸长和分支、树突棘形成和神经元可塑性。

GDNF生长因子

GDNF激活促进细胞增殖的通路,包括 MAPK、磷酸肌醇 3-激酶、ERK 和 ATK 通路 [ 4 ]。 GDNF 促进多巴胺能神经元、运动神经元和皮质神经元的存活,并增强背根神经节的轴突伸长和分支。

BDNF、GDNF、iPSC 和 NPC

BDNF 和 GDNF 用于将 iPSC 和 NPC 分化为神经元并维持高质量的后代。这些生长因子还可用于维持 3D 神经元类器官并显着驱动类器官图案化。

视网膜色素上皮 (RPE) 细胞、FGF2 和表皮生长因子 (EGF)

视网膜色素上皮干细胞

RPE 细胞是在眼睛感光层后面发现的单层细胞。它们执行许多支持神经元视网膜上的感光细胞的功能,包括类维生素A的转换和储存、散射光的吸收、微环境的维持和营养的提供[ 5 ]。 RPE 细胞以单层形式生长,一旦生长填满其边界区域,就可以长时间保持静止状态。这使得 RPE 细胞能够承受高压力条件。

FGF2 和 EGF 生长因子

FGF2通过上述 iPSC 途径促进 RPE 细胞增殖。EGF激活多种途径,包括 ERK MAPK、AKT-PI3K 和 PLC-γ1-PKC 途径,调节增殖并防止不必要的细胞凋亡 [ 6 ]。这使得 EGF 能够确保 RPE 细胞在静止期存活。 FGF2 和 EGF 是维持 RPE 细胞并为其生长创造压力最小的环境的关键生长因子。在特定条件下生长的 RPE 细胞现在被移植以治疗黄斑变性。