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同仁化学PlasMem Bright Green细胞膜染色试剂货号：P504 细胞膜染色试剂—绿色| 日本DOJINDO

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上海金畔社生物科技有限公司日本同仁化学dojindo全线产品代理 中国代理商

PlasMem Bright Green细胞膜染色试剂货号：P504
细胞膜染色试剂—绿色
PlasMem Bright Green
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100 μl

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细胞染色

PlasMem Bright Green细胞膜染色试剂货号：P504 细胞膜染色试剂—绿色

PlasMem Bright Green细胞膜染色试剂货号：P504 细胞膜染色试剂—绿色

产品特性
与其他公司产品的比较
细胞膜上的停留时间
实验例
关联产品
常见问题Q&A
产品文献

产品特性

细胞膜起着分隔细胞内和细胞外的作用，并且与细胞的移动和生长、神经信号的传达等细胞功能密切相关。因此，细胞膜的异常与各种细胞状态异常所造成的疾病（如离子通道病Channelopathy）有很密切的关联，被认为是非常重要的生物标记物之一。

由于操作简便并且可用于活细胞染色，小分子荧光探针是最常用的细胞膜染色方法。但是小分子荧光探针普遍存在细胞内停留时间短、水溶性差的问题。而PlasMem Bright是一种克服了现有小分子荧光探针问题的产品。 用PlasMem Bright观察细胞膜时，可以在染色后的1天以上进行长时间的荧光观察。

PlasMem Bright Green细胞膜染色试剂货号：P504 细胞膜染色试剂—绿色

与其他公司产品的比较

PlasMem Bright系列产品克服了现有市面上的细胞膜染色试剂的诸多缺点（细胞毒性高、停留时间短、不同实验系的兼容性差）。并且分别有Green/ Red两种产品，方便多重染色时自由选择。

产品名 细胞

毒性

 染色后

的清洗

 含血清

培养基

 停留

时间

 染色后

的固定
PlasMem Bright 低 不需要 可使用 24 h 可以(PFA)
S公司 产品P – 需要 不可使用 – 可以
T公司 产品D – 需要 可使用 – 不可以
T公司 产品C – 需要 可使用 1.5 h 可以(PFA)

*通过细胞核染色试剂染色后，神经细胞的形态变化(凝集)的比较得出的结论

细胞膜上的停留时间

使用各种细胞膜染色试剂进行染色HeLa细胞，经过24 h培养后对各染色试剂的荧光图像进行比较。结果发现，与其他公司的细胞膜染色试剂相比，PlasMem Bright系列产品的染色时间更长，膜上的停留时间也更长。

PlasMem Bright Green细胞膜染色试剂货号：P504 细胞膜染色试剂—绿色

实验例

实验例：ES细胞群内部的细胞膜染色

将小鼠ES细胞在涂有明胶的玻璃底皿中培养4天，并将获得的细胞群，用PlasMem Bright Green（200倍稀释）染色15分钟，并使用共聚焦显微镜（Zeiss：LSM710）中观察。

结果，细胞群内部的细胞膜也可以用PlasMem Bright Green可视化观察。

PlasMem Bright Green细胞膜染色试剂货号：P504 细胞膜染色试剂—绿色

<观察条件>

细胞膜（PlasMem Bright Green【绿】）：Ex.488 nm/Em.500-560 nm.

*此实验例由庆应义塾大学医学院的石津 大嗣老师提供。

实验例：轴突神经细胞形态和线粒体定位的观察

由神经母细胞瘤细胞SH-SY5Y分化诱导的神经细胞，分别用PlasMem Bright Green (绿)、MitoBright LT Red (红)、Hoechst 33342 (蓝) 进行染色。可以鲜明的观察到细胞的形状以及轴突内的线粒体。

PlasMem Bright Green细胞膜染色试剂货号：P504 细胞膜染色试剂—绿色

（比例尺：200 μm）

<观察条件>

细胞膜（PlasMem Bright Green【绿】）：Ex.488 nm/Em.500-560 nm。

线粒体（MitoBright LT Red【红】）：Ex.561 nm/Em.560-620 nm。

细胞核（Hoechst33342【蓝】）：Ex.405 nm/Em.400-450 nm。

<实验步骤>

（1）诱导神经芽细胞（SH-SY5Y）为神经细胞。

（2）去除上清液，添加使用培养基中稀释200倍的PlasMem Bright Green、Hoechst 33342（终浓度：5μg/ml）以及MitoBright LT Red（终浓度0.1 μmol/l）。

（3）培养30分钟。

（4）去除上清液，添加HBSS。

（5）使用荧光显微镜观察。

实验例：神经芽细胞（SH-SY5Y）中的线粒体检测

分别用PlasMem Bright Green (绿)、MitoBright LT Red (红)、Hoechst 33342 (蓝) 对神经母细胞瘤细胞SH-SY5Y进行染色，用共聚焦显微镜获得3D图像。可以鲜明的观察到细胞形态以及线粒体和细胞核的情况。

PlasMem Bright Green细胞膜染色试剂货号：P504 细胞膜染色试剂—绿色

（比例尺：10 μm）

<观察条件>

细胞膜（PlasMem Bright Green【绿】）：Ex.488 nm/Em.500-560 nm。

线粒体（MitoBright LT Red【红】）：Ex.561 nm/Em.560-620 nm。

细胞核（Hoechst33342【蓝】）：Ex.405 nm/Em.400-450 nm。

<实验步骤>

（1）使用HBSS清洗SH-SY5Y细胞。

（2）添加使用培养基中稀释200倍的PlasMem Bright Green、Hoechst 33342（终浓度：5μg/ml）以及MitoBright LT Red（终浓度0.1 μmol/l）。

（3）培养10分钟。

（4）使用HBSS清洗细胞2次

（5）使用荧光显微镜观察。

  实验例：脑源性小鼠神经母细胞瘤的延时成像

使用培养基中稀释200倍的PlasMem Bright Green，染色N1E-115细胞30分钟并进行延时成像时，可以清楚地观察到神经细胞内树突和突起中的变化。

 

<培养条件>

・细胞：N1E-115细胞（脑源性小鼠神经母细胞瘤）

・培养基：5％FBS，1％含谷氨酰胺的D-MEM（低葡萄糖）

・培养设备：35 mm 玻璃底皿

<拍摄条件>

・成像设备：带培养箱的荧光显微镜

・拍摄时间：1小时，拍摄间隔：2分钟

*此实验例由芝浦理工大学系统科学与工程学院的涌澤 充 様、福井 浩二教授提供。


 实验例：与外泌体共染色

 

向PlasMem Bright Green染色的HeLa细胞中加入外泌体膜荧光染色试剂盒(ExoSparkler Exosome Membrane Labeling Kit-Red)染色的外泌体。可以观察到，由活细胞的细胞膜产生的内体(Endosome)中的外泌体，以及没有摄入外泌体的内体。另外，即使在固定染色的细胞之后，也可以像活细胞一样使存在于细胞膜来源的囊泡（内体）中的外泌体可视化。

PlasMem Bright Green细胞膜染色试剂货号：P504 细胞膜染色试剂—绿色

PlasMem Bright Green细胞膜染色试剂货号：P504 细胞膜染色试剂—绿色

(比例尺：5 μm）

PlasMem Bright Green细胞膜染色试剂货号：P504 细胞膜染色试剂—绿色

PlasMem Bright Green细胞膜染色试剂货号：P504 细胞膜染色试剂—绿色

(比例尺：10 μm）

<观察条件>

细胞膜 (PlasMem Bright Green, 绿)  Ex. 488 nm / Em. 500-560 nm。

外泌体 (ExoSparkler Exosome Membrane Labeling Kit-Red, 红)  Ex. 561 nm / Em. 560-620 nm。

 

<实验步骤>

（1）接种Hela细胞，24小时培养。

（2）去除上清液，添加使用培养基稀释的PlasMem Bright Green（100倍稀释）。

（3）培养10分钟。

（4）使用HBSS清洗细胞3次。

（5）添加175 μlMEM培养基与ExoSparkler Exosome Membrane Labeling Kit-Red染色过的Exosome溶液25 μl。

（6）在CO2培养箱中过夜培养。

（固定情况下）细胞使用HBSS清洗2次后添加4%PFA，培养15分钟后，使用HBSS清洗细胞2次。

（7）使用共聚焦显微镜观察

 

 实验例：烟草BY2细胞的膜染色

用PlasMemBright Green (200倍稀释)染色烟草BY2细胞5分钟，清洗后每5分钟拍摄一次并进行长时间观察。实验中可以清晰的观察到BY2细胞膜的荧光以及细胞分裂所形成的细胞板。

(数据由名古屋大学栗原大辅老师友情提供)

<检测条件>

・转盘式共聚焦显微镜观察

・Ex: 488 nm; Em: 520/35 (502.5-537.5 nm)

・图中的时间按照00:00 (小时:分钟)表示

 

 实验例：拟南芥根的染色

用PlasMemBright Green (200倍稀释)染色拟南芥根15分钟，采用Z轴景深连续拍照的方法进行荧光观察，可以清晰的观察到立体的细胞膜分布情况。

 

(数据由名古屋大学栗原大辅老师友情提供)

<检测条件>

 

・转盘式共聚焦显微镜观察，Z轴摄影

・Ex: 488 nm; Em: 520/35 (502.5-537.5 nm)

关联产品

 

PlasMem Bright Green细胞膜染色试剂货号：P504 细胞膜染色试剂—绿色PlasMem Bright Green细胞膜染色试剂货号：P504 细胞膜染色试剂—绿色

常见问题Q&A

Q1:   是否可以用固定化细胞？
A: 可以用4% 多聚甲醛(PFA)进行固定。

但是请注意不可以改变细胞膜的渗透性，否则会操造成没有荧光。
Q2:  是否可以进行动态荧光成像？
A:可以。   但是请注意将激发光保持在最低水平并提高检测灵敏度。另外，长时间的激发光照射可能会对细胞造成伤害，也更容易使荧光染料分解，请考虑采用时间间隔等方法尽量避免。
Q3:   在配制Working solution的时候是否可以用无血清培养基或Buffer进行稀释？
A: 可以。
Q1:  染色后清洗细胞时建议使用什么？
A: 无血清培养基、PBS、HBSS等各种缓冲液均可以使用。
Q4:   添加Working solution后，是否可以马上观察？
A:添加后马上观察也可以。操作手册上的步骤是加入试剂后培养5 min再观察。
Q5:   细胞膜以外的地方也有被染色的情况，请问是什么原因？
A: 感觉观察到细胞膜以外也被染色的情况，可能有如下两个原因

1) 细胞膜上的试剂，随着时间的推移，通过细胞内吞作用进入细胞内。

请参考本产品网页上“细胞膜上的停留时间”的部分，有染色后24 h的照片。

2）荧光成像时的焦点在底面(细胞底部的接触面)上，如下图A。

荧光成像时的焦点请尽量像下图B那样调整Z轴的高度。

PlasMem Bright Green细胞膜染色试剂货号：P504 细胞膜染色试剂—绿色

PlasMem Bright Green细胞膜染色试剂货号：P504 细胞膜染色试剂—绿色

产品文献

编号 文献 年 IF
1 The formation of migrasomes is   initiated by the assembly of sphingomyelin synthase 2 foci at the leading   edge of migrating cells，

Nature Cell Biology，2023 ，25(8):1173-1184.

 2023 21

同仁化学PlasMem Bright Red细胞膜染色试剂货号：P505 细胞膜染色试剂—红色| 日本DOJINDO

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上海金畔社生物科技有限公司日本同仁化学dojindo全线产品代理 中国代理商

PlasMem Bright Red细胞膜染色试剂货号：P505
细胞膜染色试剂—红色
PlasMem Bright Red
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选择规格：
100 μl

现货

 
细胞染色

PlasMem Bright Red细胞膜染色试剂货号：P505 细胞膜染色试剂—红色

PlasMem Bright Red细胞膜染色试剂货号：P505 细胞膜染色试剂—红色

产品特性
与其他公司产品的比较
细胞膜上的停留时间
实验例
关联产品
常见问题Q&A

产品特性

细胞膜起着分隔细胞内和细胞外的作用，并且与细胞的移动和生长、神经信号的传达等细胞功能密切相关。因此，细胞膜的异常与各种细胞状态异常所造成的疾病（如离子通道病Channelopathy）有很密切的关联，被认为是非常重要的生物标记物之一。

由于操作简便并且可用于活细胞染色，小分子荧光探针是最常用的细胞膜染色方法。但是小分子荧光探针普遍存在细胞内停留时间短、水溶性差的问题。而PlasMem Bright是一种克服了现有小分子荧光探针问题的产品。 用PlasMem Bright观察细胞膜时，可以在染色后的1天以上进行长时间的荧光观察。

与其他公司产品的比较

PlasMem Bright系列产品克服了现有市面上的细胞膜染色试剂的诸多缺点（细胞毒性高、停留时间短、不同实验系的兼容性差）。并且分别有Green/ Red两种产品，方便多重染色时自由选择。

产品名 细胞

毒性

 染色后

的清洗

 含血清

培养基

 停留时间 染色后

的固定
PlasMem Bright 低 不需要 可使用 24 h 可以(PFA)
S公司 产品P – 需要 不可使用 – 可以
T公司 产品D – 需要 可使用 – 不可以
T公司 产品C – 需要 可使用 1.5 h 可以(PFA)

细胞膜上的停留时间

使用各种细胞膜染色试剂进行染色HeLa细胞，经过24 h培养后对各染色试剂的荧光图像进行比较。结果发现，与其他公司的细胞膜染色试剂相比，PlasMem Bright系列产品的染色时间更长，膜上的停留时间也更长。

PlasMem Bright Red细胞膜染色试剂货号：P505 细胞膜染色试剂—红色

实验例

 

实验例：通过悬浮细胞观察内吞作用对温度依赖性的变化

本实验使用ECGreen内吞检测试剂（产品代码：E296）和PlasMem Bright Red染色，对Jurkat细胞内吞时对温度的依赖性变化

PlasMem Bright Red细胞膜染色试剂货号：P505 细胞膜染色试剂—红色

<检测条件>

内体检测(ECGreen, 绿色): Ex. 405 nm / Em. 500 – 560 nm

细胞膜检测 (PlasMem Bright Red,红色): Ex. 561 nm / Em. 560 – 700 nm

<实验步骤>

（1）在样品管中加入Jurkat细胞悬液（10%FBS，RPMI）并在4℃或37℃孵育30min。

（2） 使用步骤（1）配置的细胞悬浮液将ECGreen溶液稀释1000倍。

（3） 4℃或37℃孵育30min。

（4） 用HBSS清洗细胞两次。

（5） 加入含有PlasMem Bright Red（100倍稀释）的培养基，悬浮细胞。

（6） 将悬浮液转移到成像板上，并使用共聚焦显微镜观察细胞。

实验例：神经细胞的形态和轴突内线粒体局部观察

由神经母细胞瘤细胞SH-SY5Y分化诱导的神经细胞，分别用PlasMem Bright Red (红)、MitoBright LT Green (绿)、Hoechst 33342 (蓝) 进行染色。可以鲜明的观察到细胞的形状以及轴突内的线粒体。

PlasMem Bright Red细胞膜染色试剂货号：P505 细胞膜染色试剂—红色

 实验例：观察巨噬细胞摄入外泌体

使用MagCapture™ Exosome Isolation Kit PS (Wako)提取人牙龈组织的间质干细胞(GMSC)产生的外泌体，并使用ExoSparkler Exosome Membrane Labeling Kit-Green (货号：EX01)进行染色。然后将其加入由人类外周血单核细胞(PBMC)分化的人类巨噬细胞中，用PlasMem Bright Red对巨噬细胞进行染色。

PlasMem Bright Red细胞膜染色试剂货号：P505 细胞膜染色试剂—红色

(数据由九州大学附属医院 口腔功能修复科 福田隆男老师友情提供)

 

＜检测条件＞
外泌体（Mem Dye – Green）：Ex 488 nm / Em 490 – 540 nm
细胞膜（PlasMem Bright Red）： Ex. 561 nm / Em. 560 – 700 nm
细胞核（DAPI）：Ex. 345 nm / Em. 455 nm

＜实验操作＞
1. 将多聚赖氨酸包被载玻片(poly-L-lysine coated slides)放置在24 孔板中进行外周血单个核细胞(PBMC)的分化诱导(7 days)。
2. 根据ExoSparkler Exosome Membrane Labeling Kit-Green的操作说明书对10 µg的外泌体进行染色。
3. 将标记好的外泌体，按照1 µg/mL添加到24孔板中，培养3 h。

4. 用PBS清洗细胞1次。
5. 添加用培养基配置好的PlasMem Bright Red (1/100稀释)，在CO2培养箱内静置15 min。
6. 用PBS清洗细胞3次。
7. 用4% PFA，室温下固定15 min。
8. 用PBS清洗细胞3次。
9. 用含DAPI的封片剂 (Invitrogen：ProLong™ Gold Antifade Mountant with DAPI)进行封片。
10. 激光共聚焦显微镜LSM 700 confocal microscope (Carl Zeiss) 观察。

 

关联产品

PlasMem Bright Red细胞膜染色试剂货号：P505 细胞膜染色试剂—红色PlasMem Bright Red细胞膜染色试剂货号：P505 细胞膜染色试剂—红色

常见问题Q&A

Q1:   是否可以用固定化细胞？
A: 可以用4% 多聚甲醛(PFA)进行固定。

但是请注意不可以改变细胞膜的渗透性，否则会操造成没有荧光。
Q2:  是否可以进行动态荧光成像？
A:可以。   但是请注意将激发光保持在最低水平并提高检测灵敏度。另外，长时间的激发光照射可能会对细胞造成伤害，也更容易使荧光染料分解，请考虑采用时间间隔等方法尽量避免。
Q3:   在配制Working solution的时候是否可以用无血清培养基或Buffer进行稀释？
A: 可以。
Q1:  染色后清洗细胞时建议使用什么？
A: 无血清培养基、PBS、HBSS等各种缓冲液均可以使用。
Q4:   添加Working solution后，是否可以马上观察？
A:添加后马上观察也可以。操作手册上的步骤是加入试剂后培养5 min再观察。
Q5:   细胞膜以外的地方也有被染色的情况，请问是什么原因？
A: 感觉观察到细胞膜以外也被染色的情况，可能有如下两个原因

1) 细胞膜上的试剂，随着时间的推移，通过细胞内吞作用进入细胞内。

请参考本产品网页上“细胞膜上的停留时间”的部分，有染色后24 h的照片。

2）荧光成像时的焦点在底面(细胞底部的接触面)上，如下图A。

荧光成像时的焦点请尽量像下图B那样调整Z轴的高度。

PlasMem Bright Red细胞膜染色试剂货号：P505 细胞膜染色试剂—红色

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关联产品

PlasMem Bright Red细胞膜染色试剂货号：P505 细胞膜染色试剂—红色
Calcein-AM/PI细胞双染试剂盒
活死细胞双染试剂盒

PlasMem Bright Red细胞膜染色试剂货号：P505 细胞膜染色试剂—红色
活细胞质染色-绿色——Calcein-AM
3′,6′-Di(O-acetyl)-4′,5′-bis[N,N-bis(carboxymethyl)aminomethyl]fluorescein, tetraacetoxymethyl ester

PlasMem Bright Red细胞膜染色试剂货号：P505 细胞膜染色试剂—红色
Cellstain- Hoechst 33342 solution试剂
2′-(4-Ethoxyphenyl)-5-(4-methyl-1-piperazinyl)-2,5′-bi-1H-benzimidazole, trihydrochloride

PlasMem Bright Red细胞膜染色试剂货号：P505 细胞膜染色试剂—红色
PlasMem Bright Green细胞膜染色试剂
细胞膜染色试剂—绿色

PlasMem Bright Red细胞膜染色试剂货号：P505 细胞膜染色试剂—红色
Cellstain- CFSE试剂
5- or 6-(N-Succinimidyloxycarbonyl)fluorescein 3′,6′-diacetate

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DiD Perchlorate (DiIC18(5)) 细胞膜红色荧光探针

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DiD Perchlorate (DiIC18(5)) 细胞膜红色荧光探针 货号： JP4004-10MG 品牌： Jinpan 标签： 细胞生物学研究

描述

DiD Perchlorate (DiIC18(5)) 细胞膜红色荧光探针

温馨提示：见细胞膜荧光探针专题，选择您想要的最适膜标记探针。

搜索关键词：

细胞膜荧光探针，DiI，DiO，DiD，DiR，DiA，CM-DiI，神经示踪，传统细胞膜荧光探针

订购信息：

产品名称 产品编号 CAS NO 规格 价格（元）
DiD Perchlorate (DiIC18(5)) 细胞膜红色荧光探针 JP4004-10MG 127274-91-3 10mg 658.00
DiD Perchlorate (DiIC18(5)) 细胞膜红色荧光探针 JP4004-25MG 127274-91-3 25mg 1188.00

产品描述：

DiI, DiO, DiD和DiR作为一类长链的亲脂性二烷基碳菁类染料（Dialkylcarbocyanines）荧光染料家族，用于标记细胞膜以及其他脂溶性生物结构。作为一类环境敏感型荧光染料，当它们与膜结合或者与亲脂性生物分子（例如蛋白质，虽然在水中其荧光强度很弱）结合时，其荧光强度显著增强。一旦进入细胞后，它们在细胞内质膜中逐步扩散，于最佳浓度条件下可将整个细胞均匀染色。这些染料具很高的淬灭系数，偏光依赖性和很短的激发寿命。

四种染料呈现不同的荧光颜色，DiI（橙色荧光）、DiO（绿色荧光）、DiD（红色荧光）、DiR（深红色荧光），为活细胞多色彩荧光成像分析和流式细胞术提供了一种便捷的工具。DiO和DiI分别用标准FITC和TRITC滤光器检测，可结合使用。DiD可被633 nm氦-氖（He-Ne）激光激发，具有比DiI更长的激发和发射光波长，特别适合用于标记具本底荧光的细胞和组织。而，DiR在体内活体成像或者示踪中意义非凡，因其所发射的红外光可以高效地穿过细胞和组织，并且在红外光范围内，其本底荧光水平很低。

本品以DiD的高氯酸盐形式提供，英文名：1,1′-Dioctadecyl-3,3,3′,3′-Tetramethylindodicarbocyanine Perchlorate，纯度≥95%，适用于荧光检测研究。

基本特性：

1）化学名：2-[5-(1,3-Dihydro-3,3-dimethyl-1-octadecyl-2H-indol-2-ylidene)-1,3-pentadien-1-yl]-3,3-dimethyl-1-octadecyl-3H-indolium perchlorate

2）同义名：DiD Perchlorate; DiIC18(5); 1,1′-Dioctadecyl-3,3,3′,3′-Tetramethylindodicarbocyanine Perchlorate;

3）推荐滤光器：Omega-XF110, XF47, Chroma-41008, 31023

4）分子式：C61H99ClN2O4

5）分子量：959.91g/mol

6）外观：紫色或深蓝色固体

7）纯度：≥95%

8）Ex/Em：644/665 nm（甲醇）

9）溶解性：溶于DMF，DJPO，甲醇

10）化学结构图： DiD Perchlorate (DiIC18(5)) 细胞膜红色荧光探针

DiD Perchlorate (DiIC18(5)) 细胞膜红色荧光探针

保存与运输方法

保存： -20ºC避光干燥保存，有效期一年。

运输：冰袋运输。

应用示例（来自文献）：

文献来源：Diao J et al. A single vesicle-vesicle fusion assay for in vitro studies of SNAREs and accessory proteins. Nat Protoc. 2012 May;7(5):921-34.

Single-vesicle lipid-mixing assay: In our vesicle-vesicle lipid-mixing assay, the v-and t-SNARE proteins (or vice versa) are reconstituted into two different groups of vesicles labeled with acceptor (DiD) and donor (DiI) fluorophores, respectively. The acceptor-labeled vesicles are immobilized on the surface and then the donor-labeled vesicles are added in order to observe the formation of a single vesicle-vesicle complex through specific SNARE interactions12 (Fig. 1).

 

1,1′-Dioctadecyl-3,3,3′,3′-tetramethylindodicarbocyanine perchlorate, DiIC18(5) (DiD)：DiD working solution is prepared using 100% ethanol (1 mg ml− 1). CRITICAL The solvent is subject to evaporation. An absorbance measurement may be done to verify the accuracy of the dye concentration. Store the solution at −20 °C for up to 1 month without recalibration.

1,1′-Dioctadecyl-3,3,3′,3′-tetramethylindocarbocyanine perchlorate, DiIC18(3) (DiI)：DiI working solution is prepared using 100% ethanol (1 mg ml− 1). CRITICAL The solvent is subject to evaporation. An absorbance measurement may be done to verify the accuracy of the dye concentration. Store the solution at −20 °C for up to 1 month without recalibration.

注意事项

1）荧光染料均存在淬灭问题，请尽量注意避光，以减缓荧光淬灭。

2）为了您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作。

使用方法

【注意】以下使用方法仅用作参考，可根据具体的实验条件做出调整。

1. 染色液制备

1）储存液制备：用DJPO或乙醇配置浓度1～5 mM的储存液。例如，取25mg DiD（Mw：959.91g/mol）溶于5.21ml无水DJPO中，充分溶解，即得到5mM的储存液。【注意】未使用的储存液分装储存在-20℃，避免反复冻融，且要避光保存。

2）工作液制备：用合适的缓冲液（如：无血清培养基，HBSS或PBS）稀释储存液，调整到1～5 μM的工作浓度。【注意】工作液最终浓度需要根据不同细胞系和实验体系来优化。建议从推荐浓度开始，以10倍范围为区间进行最优浓度的摸索。

2. 悬浮细胞染色

1）加入适当体积的染色工作液重悬细胞，使其密度为1×106/mL。

2）37℃孵育细胞2～20min，不同的细胞最佳培养时间不同。可以20min作为起始孵育时间，之后优化以保证得到均一化的标记结果。

3）孵育结束，按1000～1500 rpm离心5min。

4）去除上清液，之后轻柔加入37℃预热的生长培养液重悬细胞。

5）再重复3），4）步骤两次。

3. 贴壁细胞染色

1）将贴壁细胞培养于无菌盖玻片上。

2）从培养基中移走盖玻片，滤掉过量培养液，将盖玻片放在潮湿的小室内。

3）在盖玻片的一角加入100μL的染色工作液，轻轻晃动使染料均匀覆盖所有细胞。

4）37℃孵育细胞2～20min，不同的细胞最佳培养时间不同。可以20min作为起始孵育时间，之后优化以保证得到均一化的标记结果。

5）吸掉染色工作液，用培养液洗盖玻片2～3次，每次用预温的培养基覆盖所有细胞，孵育5～10min，然后吸走培养基。

4. 显微镜检测

1）DiD，DiO，DiI，DiR和DiS滤光器的选择参见下表：

货号 荧光探针 最大激发/最大发射波长

（Ex/Em）

 滤光片编号
Omeaga公司 Chroma公司
JP4002-10MG DiI 549/565nm XF108, XF32 41002, 31002
JP4001-25MG DiO 484/501nm XF100,XF2341001, 31001 41001, 31001
JP4004-25MG DiD 644/665nm XF110, XF47 41008, 31023
JP4005-25MG DiR 750/780nm XF112 41009

2）多色染料的同时检测，滤光器按照以下设定：

a) DiI和DiO＝Omega XF52，Chroma 51004；

b) DiI和DiD＝Omega XF92，Chroma 51007；

c) DiI，DiO和DiD＝Omega XF93，Chroma 61005；

5. 流式细胞仪检测

经DiO，DiI，DiD和DiR染色的细胞分别用流式细胞仪的FL1，FL2，FL3或FL4通道检测。

规格信息

品牌：

Jinpan
CAS:

127274-91-3
规格：

10mg
货期：

咨询客服

DiD Perchlorate (DiIC18(5)) 细胞膜红色荧光探针

发表于由

DiD Perchlorate (DiIC18(5)) 细胞膜红色荧光探针 货号： JP4004-10MG 品牌： Jinpan 标签： 细胞生物学研究

描述

DiD Perchlorate (DiIC18(5)) 细胞膜红色荧光探针

温馨提示：见细胞膜荧光探针专题，选择您想要的最适膜标记探针。

搜索关键词：

细胞膜荧光探针，DiI，DiO，DiD，DiR，DiA，CM-DiI，神经示踪，传统细胞膜荧光探针

订购信息：

产品名称 产品编号 CAS NO 规格 价格（元）
DiD Perchlorate (DiIC18(5)) 细胞膜红色荧光探针 JP4004-10MG 127274-91-3 10mg 658.00
DiD Perchlorate (DiIC18(5)) 细胞膜红色荧光探针 JP4004-25MG 127274-91-3 25mg 1188.00

产品描述：

DiI, DiO, DiD和DiR作为一类长链的亲脂性二烷基碳菁类染料（Dialkylcarbocyanines）荧光染料家族，用于标记细胞膜以及其他脂溶性生物结构。作为一类环境敏感型荧光染料，当它们与膜结合或者与亲脂性生物分子（例如蛋白质，虽然在水中其荧光强度很弱）结合时，其荧光强度显著增强。一旦进入细胞后，它们在细胞内质膜中逐步扩散，于最佳浓度条件下可将整个细胞均匀染色。这些染料具很高的淬灭系数，偏光依赖性和很短的激发寿命。

四种染料呈现不同的荧光颜色，DiI（橙色荧光）、DiO（绿色荧光）、DiD（红色荧光）、DiR（深红色荧光），为活细胞多色彩荧光成像分析和流式细胞术提供了一种便捷的工具。DiO和DiI分别用标准FITC和TRITC滤光器检测，可结合使用。DiD可被633 nm氦-氖（He-Ne）激光激发，具有比DiI更长的激发和发射光波长，特别适合用于标记具本底荧光的细胞和组织。而，DiR在体内活体成像或者示踪中意义非凡，因其所发射的红外光可以高效地穿过细胞和组织，并且在红外光范围内，其本底荧光水平很低。

本品以DiD的高氯酸盐形式提供，英文名：1,1′-Dioctadecyl-3,3,3′,3′-Tetramethylindodicarbocyanine Perchlorate，纯度≥95%，适用于荧光检测研究。

基本特性：

1）化学名：2-[5-(1,3-Dihydro-3,3-dimethyl-1-octadecyl-2H-indol-2-ylidene)-1,3-pentadien-1-yl]-3,3-dimethyl-1-octadecyl-3H-indolium perchlorate

2）同义名：DiD Perchlorate; DiIC18(5); 1,1′-Dioctadecyl-3,3,3′,3′-Tetramethylindodicarbocyanine Perchlorate;

3）推荐滤光器：Omega-XF110, XF47, Chroma-41008, 31023

4）分子式：C61H99ClN2O4

5）分子量：959.91g/mol

6）外观：紫色或深蓝色固体

7）纯度：≥95%

8）Ex/Em：644/665 nm（甲醇）

9）溶解性：溶于DMF，DJPO，甲醇

10）化学结构图： DiD Perchlorate (DiIC18(5)) 细胞膜红色荧光探针

DiD Perchlorate (DiIC18(5)) 细胞膜红色荧光探针

保存与运输方法

保存： -20ºC避光干燥保存，有效期一年。

运输：冰袋运输。

应用示例（来自文献）：

文献来源：Diao J et al. A single vesicle-vesicle fusion assay for in vitro studies of SNAREs and accessory proteins. Nat Protoc. 2012 May;7(5):921-34.

Single-vesicle lipid-mixing assay: In our vesicle-vesicle lipid-mixing assay, the v-and t-SNARE proteins (or vice versa) are reconstituted into two different groups of vesicles labeled with acceptor (DiD) and donor (DiI) fluorophores, respectively. The acceptor-labeled vesicles are immobilized on the surface and then the donor-labeled vesicles are added in order to observe the formation of a single vesicle-vesicle complex through specific SNARE interactions12 (Fig. 1).

 

1,1′-Dioctadecyl-3,3,3′,3′-tetramethylindodicarbocyanine perchlorate, DiIC18(5) (DiD)：DiD working solution is prepared using 100% ethanol (1 mg ml− 1). CRITICAL The solvent is subject to evaporation. An absorbance measurement may be done to verify the accuracy of the dye concentration. Store the solution at −20 °C for up to 1 month without recalibration.

1,1′-Dioctadecyl-3,3,3′,3′-tetramethylindocarbocyanine perchlorate, DiIC18(3) (DiI)：DiI working solution is prepared using 100% ethanol (1 mg ml− 1). CRITICAL The solvent is subject to evaporation. An absorbance measurement may be done to verify the accuracy of the dye concentration. Store the solution at −20 °C for up to 1 month without recalibration.

注意事项

1）荧光染料均存在淬灭问题，请尽量注意避光，以减缓荧光淬灭。

2）为了您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作。

使用方法

【注意】以下使用方法仅用作参考，可根据具体的实验条件做出调整。

1. 染色液制备

1）储存液制备：用DJPO或乙醇配置浓度1～5 mM的储存液。例如，取25mg DiD（Mw：959.91g/mol）溶于5.21ml无水DJPO中，充分溶解，即得到5mM的储存液。【注意】未使用的储存液分装储存在-20℃，避免反复冻融，且要避光保存。

2）工作液制备：用合适的缓冲液（如：无血清培养基，HBSS或PBS）稀释储存液，调整到1～5 μM的工作浓度。【注意】工作液最终浓度需要根据不同细胞系和实验体系来优化。建议从推荐浓度开始，以10倍范围为区间进行最优浓度的摸索。

2. 悬浮细胞染色

1）加入适当体积的染色工作液重悬细胞，使其密度为1×106/mL。

2）37℃孵育细胞2～20min，不同的细胞最佳培养时间不同。可以20min作为起始孵育时间，之后优化以保证得到均一化的标记结果。

3）孵育结束，按1000～1500 rpm离心5min。

4）去除上清液，之后轻柔加入37℃预热的生长培养液重悬细胞。

5）再重复3），4）步骤两次。

3. 贴壁细胞染色

1）将贴壁细胞培养于无菌盖玻片上。

2）从培养基中移走盖玻片，滤掉过量培养液，将盖玻片放在潮湿的小室内。

3）在盖玻片的一角加入100μL的染色工作液，轻轻晃动使染料均匀覆盖所有细胞。

4）37℃孵育细胞2～20min，不同的细胞最佳培养时间不同。可以20min作为起始孵育时间，之后优化以保证得到均一化的标记结果。

5）吸掉染色工作液，用培养液洗盖玻片2～3次，每次用预温的培养基覆盖所有细胞，孵育5～10min，然后吸走培养基。

4. 显微镜检测

1）DiD，DiO，DiI，DiR和DiS滤光器的选择参见下表：

货号 荧光探针 最大激发/最大发射波长

（Ex/Em）

 滤光片编号
Omeaga公司 Chroma公司
JP4002-10MG DiI 549/565nm XF108, XF32 41002, 31002
JP4001-25MG DiO 484/501nm XF100,XF2341001, 31001 41001, 31001
JP4004-25MG DiD 644/665nm XF110, XF47 41008, 31023
JP4005-25MG DiR 750/780nm XF112 41009

2）多色染料的同时检测，滤光器按照以下设定：

a) DiI和DiO＝Omega XF52，Chroma 51004；

b) DiI和DiD＝Omega XF92，Chroma 51007；

c) DiI，DiO和DiD＝Omega XF93，Chroma 61005；

5. 流式细胞仪检测

经DiO，DiI，DiD和DiR染色的细胞分别用流式细胞仪的FL1，FL2，FL3或FL4通道检测。

 

其他信息

品牌：

Jinpan
CAS:

127274-91-3
规格：

10mg
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DiD Perchlorate (DiIC18(5)) 细胞膜红色荧光探针 货号： JP4004-10MG 品牌： Jinpan 标签： 细胞生物学研究

描述

DiD Perchlorate (DiIC18(5)) 细胞膜红色荧光探针

温馨提示：见细胞膜荧光探针专题，选择您想要的最适膜标记探针。

搜索关键词：

细胞膜荧光探针，DiI，DiO，DiD，DiR，DiA，CM-DiI，神经示踪，传统细胞膜荧光探针

订购信息：

产品名称 产品编号 CAS NO 规格 价格（元）
DiD Perchlorate (DiIC18(5)) 细胞膜红色荧光探针 JP4004-10MG 127274-91-3 10mg 658.00
DiD Perchlorate (DiIC18(5)) 细胞膜红色荧光探针 JP4004-25MG 127274-91-3 25mg 1188.00

产品描述：

DiI, DiO, DiD和DiR作为一类长链的亲脂性二烷基碳菁类染料（Dialkylcarbocyanines）荧光染料家族，用于标记细胞膜以及其他脂溶性生物结构。作为一类环境敏感型荧光染料，当它们与膜结合或者与亲脂性生物分子（例如蛋白质，虽然在水中其荧光强度很弱）结合时，其荧光强度显著增强。一旦进入细胞后，它们在细胞内质膜中逐步扩散，于最佳浓度条件下可将整个细胞均匀染色。这些染料具很高的淬灭系数，偏光依赖性和很短的激发寿命。

四种染料呈现不同的荧光颜色，DiI（橙色荧光）、DiO（绿色荧光）、DiD（红色荧光）、DiR（深红色荧光），为活细胞多色彩荧光成像分析和流式细胞术提供了一种便捷的工具。DiO和DiI分别用标准FITC和TRITC滤光器检测，可结合使用。DiD可被633 nm氦-氖（He-Ne）激光激发，具有比DiI更长的激发和发射光波长，特别适合用于标记具本底荧光的细胞和组织。而，DiR在体内活体成像或者示踪中意义非凡，因其所发射的红外光可以高效地穿过细胞和组织，并且在红外光范围内，其本底荧光水平很低。

本品以DiD的高氯酸盐形式提供，英文名：1,1′-Dioctadecyl-3,3,3′,3′-Tetramethylindodicarbocyanine Perchlorate，纯度≥95%，适用于荧光检测研究。

基本特性：

1）化学名：2-[5-(1,3-Dihydro-3,3-dimethyl-1-octadecyl-2H-indol-2-ylidene)-1,3-pentadien-1-yl]-3,3-dimethyl-1-octadecyl-3H-indolium perchlorate

2）同义名：DiD Perchlorate; DiIC18(5); 1,1′-Dioctadecyl-3,3,3′,3′-Tetramethylindodicarbocyanine Perchlorate;

3）推荐滤光器：Omega-XF110, XF47, Chroma-41008, 31023

4）分子式：C61H99ClN2O4

5）分子量：959.91g/mol

6）外观：紫色或深蓝色固体

7）纯度：≥95%

8）Ex/Em：644/665 nm（甲醇）

9）溶解性：溶于DMF，DJPO，甲醇

10）化学结构图： DiD Perchlorate (DiIC18(5)) 细胞膜红色荧光探针

DiD Perchlorate (DiIC18(5)) 细胞膜红色荧光探针

保存与运输方法

保存： -20ºC避光干燥保存，有效期一年。

运输：冰袋运输。

应用示例（来自文献）：

文献来源：Diao J et al. A single vesicle-vesicle fusion assay for in vitro studies of SNAREs and accessory proteins. Nat Protoc. 2012 May;7(5):921-34.

Single-vesicle lipid-mixing assay: In our vesicle-vesicle lipid-mixing assay, the v-and t-SNARE proteins (or vice versa) are reconstituted into two different groups of vesicles labeled with acceptor (DiD) and donor (DiI) fluorophores, respectively. The acceptor-labeled vesicles are immobilized on the surface and then the donor-labeled vesicles are added in order to observe the formation of a single vesicle-vesicle complex through specific SNARE interactions12 (Fig. 1).

 

1,1′-Dioctadecyl-3,3,3′,3′-tetramethylindodicarbocyanine perchlorate, DiIC18(5) (DiD)：DiD working solution is prepared using 100% ethanol (1 mg ml− 1). CRITICAL The solvent is subject to evaporation. An absorbance measurement may be done to verify the accuracy of the dye concentration. Store the solution at −20 °C for up to 1 month without recalibration.

1,1′-Dioctadecyl-3,3,3′,3′-tetramethylindocarbocyanine perchlorate, DiIC18(3) (DiI)：DiI working solution is prepared using 100% ethanol (1 mg ml− 1). CRITICAL The solvent is subject to evaporation. An absorbance measurement may be done to verify the accuracy of the dye concentration. Store the solution at −20 °C for up to 1 month without recalibration.

注意事项

1）荧光染料均存在淬灭问题，请尽量注意避光，以减缓荧光淬灭。

2）为了您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作。

使用方法

【注意】以下使用方法仅用作参考，可根据具体的实验条件做出调整。

1. 染色液制备

1）储存液制备：用DJPO或乙醇配置浓度1～5 mM的储存液。例如，取25mg DiD（Mw：959.91g/mol）溶于5.21ml无水DJPO中，充分溶解，即得到5mM的储存液。【注意】未使用的储存液分装储存在-20℃，避免反复冻融，且要避光保存。

2）工作液制备：用合适的缓冲液（如：无血清培养基，HBSS或PBS）稀释储存液，调整到1～5 μM的工作浓度。【注意】工作液最终浓度需要根据不同细胞系和实验体系来优化。建议从推荐浓度开始，以10倍范围为区间进行最优浓度的摸索。

2. 悬浮细胞染色

1）加入适当体积的染色工作液重悬细胞，使其密度为1×106/mL。

2）37℃孵育细胞2～20min，不同的细胞最佳培养时间不同。可以20min作为起始孵育时间，之后优化以保证得到均一化的标记结果。

3）孵育结束，按1000～1500 rpm离心5min。

4）去除上清液，之后轻柔加入37℃预热的生长培养液重悬细胞。

5）再重复3），4）步骤两次。

3. 贴壁细胞染色

1）将贴壁细胞培养于无菌盖玻片上。

2）从培养基中移走盖玻片，滤掉过量培养液，将盖玻片放在潮湿的小室内。

3）在盖玻片的一角加入100μL的染色工作液，轻轻晃动使染料均匀覆盖所有细胞。

4）37℃孵育细胞2～20min，不同的细胞最佳培养时间不同。可以20min作为起始孵育时间，之后优化以保证得到均一化的标记结果。

5）吸掉染色工作液，用培养液洗盖玻片2～3次，每次用预温的培养基覆盖所有细胞，孵育5～10min，然后吸走培养基。

4. 显微镜检测

1）DiD，DiO，DiI，DiR和DiS滤光器的选择参见下表：

货号 荧光探针 最大激发/最大发射波长

（Ex/Em）

 滤光片编号
Omeaga公司 Chroma公司
JP4002-10MG DiI 549/565nm XF108, XF32 41002, 31002
JP4001-25MG DiO 484/501nm XF100,XF2341001, 31001 41001, 31001
JP4004-25MG DiD 644/665nm XF110, XF47 41008, 31023
JP4005-25MG DiR 750/780nm XF112 41009

2）多色染料的同时检测，滤光器按照以下设定：

a) DiI和DiO＝Omega XF52，Chroma 51004；

b) DiI和DiD＝Omega XF92，Chroma 51007；

c) DiI，DiO和DiD＝Omega XF93，Chroma 61005；

5. 流式细胞仪检测

经DiO，DiI，DiD和DiR染色的细胞分别用流式细胞仪的FL1，FL2，FL3或FL4通道检测。

 

规格信息

品牌：

Jinpan
CAS:

127274-91-3
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