如何测量纳米/微球的 CV 值并揭示实际尺寸分布?

如何测量纳米/微球的 CV 值并揭示实际尺寸分布?

在尺寸表征领域,主要有扫描/透射/扫描透射电镜(SEM/TEM/STEM)和动态光散射(即DLS)两种方法。不幸的是,我们发现与 SEM/TEM/STEM 技术相比,DLS 不适合准确确定纳米/微球的尺寸分布。 
 

  • DLS 结果与胶体稳定性密切相关,不可避免地会导致大尺寸纳米粒子的尺寸分布不准确。对于低于 100 nm 的纳米粒子,流体动力学尺寸变得相关。然而,对于几百纳米左右或以上的纳米粒子,胶体稳定性受重力作用的影响很大。相比之下,SEM/TEM/STEM 图像仅基于干燥样品,在我们的案例和文献中通过大量研究已经看到更高的再现性和可靠性。

  • DLS 无法区分纳米粒子本身和表面活性剂的聚集体。由于我们的大多数胶体纳米/微球都在系统中故意添加了痕量表面活性剂以延长使用寿命,因此 DLS 变得不适合直接尺寸测量,除非纳米/微球用 Milli-Q 水或去离子水至少洗涤 3 次- 离子水以去除表面活性剂的任何痕迹。同样,由于重新悬浮效率低下而导致的纳米/微球也会扭曲 DLS 结果;例如,在 DLS 测量下,几个聚集的 100 nm 纳米粒子可能被视为 200 nm 或 300 nm 纳米粒子。

  • DLS 无法深入了解 纳米/微球的形状或球度。在 DLS 测量下,不规则形状的颗粒和球形颗粒可以得到 相同的解释。

 

因此,我们使用 SEM/TEM/STEM 技术代替 DLS 测量作为我们的常规质量控制方法。我们通常会拍摄至少 10 张电子显微照片,并使用 ImageJ 处理它们以获得尺寸分布和 CV 值。这也是我们通常在向客户交付产品时随附几张具有代表性的 SEM/TEM/STEM 图片的原因。我们希望揭示真实的尺寸分布,让客户直接可视化纳米/微球的图像,而不是间接查看拟合曲线。 

FITC 标记的二氧化硅纳米粒子介绍

FITC 标记的二氧化硅纳米粒子介绍

二氧化硅纳米粒子,荧光素 (FITC) 标记:

Nanocs 提供多种荧光二氧化硅纳米粒子以及具有从紫外区域到近红外区域的荧光信号的二氧化硅微珠。荧光素标记的硅胶珠是绿色荧光颗粒,激发/发射波长约为 490 nm/515 nm。 Nanocs 的二氧化硅颗粒具有较窄的尺寸分布,但具有从 7 纳米到 50 微米的多种尺寸选择。这些颗粒悬浮在 1% 的水溶液中。这些颗粒的标准偏差在所列尺寸参数的10~20%范围内。这些颗粒在诊断试剂和生物测定开发中具有广泛的应用。它们可以用不同的表面涂层和官能团进一步改性。 Nanocs 荧光标记二氧化硅颗粒为这些纳米颗粒的体外或体内应用提供了更多选择。这些颗粒包括从紫外区域到近红外区域的各种荧光染料,包括荧光素、罗丹明、花青染料、Alexa 氟染料。可根据要求提供客户结合和修改。

FITC 标记的二氧化硅纳米粒子介绍

珠子特性:

  • 浓度:1%悬浮液,其他浓度可根据要求提供;

  • 颜色:绿色至黄色;

  • 激发/发射:~495 nm/515 nm;

储存条件:

  • 储存于 4 0 C。避光。不要冻结。


纳米盘简介

纳米盘简介

纳米盘描述了一种小的(直径为7-50纳米)的圆盘形结构,用于蛋白质组学和生物医学。它由两个主要组件组成:

  1. 磷脂, 人工来源或细胞膜

  2. 一个 稳定带 将磷脂保持在一起。这是一种MSP蛋白或 合成聚合物.

纳米盘简介

纳米盘的用途


他们的目的是模拟靶分子(通常是膜蛋白)的天然磷脂双层细胞。膜蛋白是细胞之间交流的关键。它们介导基本的生物过程,如信号转导、跨膜的运输过程、化学信号的传感以及细胞间相互作用的协调。
人类的许多疾病都与膜蛋白有关,使其成为药物开发的重要靶标。因此,令人惊讶的是,膜蛋白由高达约23%的基因编码,但占已知蛋白质结构的<1%(1)。

纳米盘简介

问题是,膜蛋白与可溶性蛋白质不同,由于其插入脂质膜,因此很难在其天然环境中进行分析。脂质双层疏水核心中的膜蛋白表面也是疏水的,而与水性膜环境接触的表面积与普通可溶性蛋白质的表面一样具有亲水性(2)。在同一分子上存在广泛的疏水性和亲水性表面是膜蛋白的特征。因此,膜蛋白不溶于没有增溶剂的标准水性缓冲液中。例如,需要纳米盘来溶解它们以模拟脂质双层的两亲性环境,同时将膜蛋白的结构保持在生理相关状态。

两种类型的纳米盘

纳米盘简介

如前所述,纳米盘可以区分它们的磷脂组成,最重要的是,它们的稳定剂类型。这种稳定剂是纳米盘总共分为两大类的原因: MSP 纳米盘 和 合成纳米盘.
各自的名称起源于用于将纳米盘保持在一起并首先形成它们的稳定剂类型。它还决定了纳米盘的脂质组成。MSP纳米盘始终含有人造脂质组成。这意味着您可以控制它。相反:合成纳米盘使用天然细胞磷脂来制造纳米盘。直接比较 两种纳米盘的单独优势 可以在这里找到。

表1:MSP和合成纳米盘之间的小比较

纳米盘简介

金纳米粒子的性质和应用

金纳米粒子的性质和应用

金纳米颗粒特性、应用、处理、加工和计算工具

目录

GNP和纳米团簇的大小和颜色

金纳米颗粒表面积

金纳米颗粒浓度

金纳米颗粒磨牙消光

GNP和纳米团簇的大小和颜色

SGNP (SGNP) 使用专有的基于种子的方法制造,其中 1.8 nm 种子在生长溶液中缓慢生长,选择直径可达 1.5 微米。

金纳米粒子的性质和应用

我们将SGNP定义为5nm及更大的尺寸,并将1.8nm至4nm的尺寸称为纳米团簇,因为它们具有定义的特定金原子数和质量。下表显示了金纳米簇的物理性质:

金纳米粒子的性质和应用

GNP(>4nm的纳米颗粒)对于较小的尺寸可以是红色的,对于较大的尺寸,颜色取决于您是在考虑散射还是吸收,因为这些纳米颗粒表现出二向色性。

金纳米粒子的性质和应用

颜色的差异是由于GNP的吸光度,其变化为下图所示的直径a的函数。金纳米粒子的性质和应用

金纳米颗粒表面积

下表显示了国产总值表面积随大小变化的研究:

金纳米粒子的性质和应用

金纳米粒子的性质和应用

表中的第二列显示了一个纳米颗粒的表面积。 第三列显示了该尺寸的纳米颗粒在0.05mg总金中的数量。 当将这两根色谱柱相乘时,我们得到所有纳米颗粒的总表面积。

1mL 1.8nm GNPs溶液的表面积相当于蜂窝手机的表面积!

这是GNP的主要好处之一 – 巨大的表面积! 大表面积的好处是深远的,可以应用于许多不同的领域,包括生物医学从治疗和诊断到环境,包括过滤和修复。

 

金纳米颗粒浓度

ICP-MS及其与浓度的测量关系

GNP浓度使用ICP-MS和TEM计算。ICP-MS提供黄金总量。 然后,TEM 提供三组用于复杂计算的信息: 平均球体尺寸 样本中的球体数与其他形状的比较 多分散指数 (PDI) = 标准开发 / 平均大小 与ICP-MS和TEM尺寸相关的简单计算公式为:

给定体积的ICP质量(毫克/毫升)=国产总值浓度(新升力/毫升)×金密度(毫克/厘米3)×1 国产总值体积(厘米3/核动力ps)

金纳米粒子的性质和应用

 

紫外-可见分光度计作为测量浓度的工具

我们发现,只有当PDI小于10%,球体百分比大于98%时,我们才能准确地使用紫外可见分光光度计作为浓度测量工具。 因此,例如,如果紫外-可见分光度计显示10nm SGNP的OD=1,我们知道表2,浓度为~5e12 nps/mL。 如果以后测量OD = 2,我们知道浓度为10e12 nps/mL。 同样,这仅适用于PDI低于10%且很少有非球形的GNP批次。

其他浓度测量及其计算包括:

重量浓度(重量浓度) mg/mL = 给定体积的 ICP 测量值

百万分之一 (ppm) = 重量浓度 (微克/毫升)

重量 % = 重量浓度 (毫克/毫升 / 1e6)

摩尔浓度 (μM) = nps/mL X 1e3mL/1L X 1mole/6e23nps X 1e6μmol/1mol

 

金纳米颗粒磨牙消光

GNPs作为诊断的巨大优势之一是它们的磨牙消退。 与一些常用荧光团相比,不同尺寸的典型摩尔消光如下表所示:

金纳米粒子的性质和应用

荧光与消光

请注意GNP和荧光团之间摩尔消光的巨大差异。 单个 100nm GNP 的可检测性是单个 FITC 荧光团的一百多万倍。 但请注意差异。 荧光团荧光 – 即存在能量转移,其中发射的光与入射光的颜色不同(降低能量或红移)。 另一方面,GNP吸收和分散而没有任何(可观的)能量转移。 这当然会改变检测系统。荧光显微镜用于荧光团,通常使用测量散射的暗场显微镜或测量吸收的光热显微镜来检测GNP。

请注意本概述稍后将讨论的两个重要属性。 首先,较小的GNP,通常我们将其定义为20nm<不会散射到任何明显的程度。他们只会吸收。 因此,像动态光散射或DLS这样依靠散射进行测量的测量仪器无法准确测量较小GNP的大小。 其次,诸如100nm SGNP这样的大型GNP本质上是二向色性的。 也就是说,它们在散射时会变成黄色,在传输时会变成紫色。 这是因为这里显示的吸光度曲线在569处有一个峰值,当光线在观察者后面时,它可以散射569nm处的光。 当用样品后面的光线观察材料时,吸光度曲线在569nm处透射与曲线无关的颜色。 如下图所示。

金纳米粒子的性质和应用

我如何看到它们?

当然,纳米颗粒很容易通过TEM和SEM观察。 事实上 在光学显微镜中,例如在明场和暗场模式下, 通常,您无法用荧光显微镜看到它们,因为它们不会发出荧光。 但也有例外。 我们销售荧光基团标记的GNP,用于许多不同的应用,包括细胞成像,细胞分选和诊断。

金纳米粒子的常见应用——使用金纳米颗粒缀合物进行免疫印迹

金纳米粒子的常见应用——使用金纳米颗粒缀合物进行免疫印迹

使用贵金属纳米颗粒缀合物进行免疫印迹

由于制备贵金属纳米颗粒(例如金和银)的抗体缀合物相对容易,并且无需事先开发程序即可通过肉眼直接检测,因此这些探针在许多测定中具有很大的用途。应用包括快速测试,例如横向流动、垂直流动、蛋白质印迹和斑点印迹测定。此外,每种贵金属纳米粒子类型的光学特性 允许生成具有不同颜色的二次探针,可用于比色多重检测,图 1。

当用贵金属蛋白缀合物(例如二级金缀合物)探测印迹蛋白的膜时,在纳米颗粒探针结合后,目标蛋白的存在会以红色指示,如图 1 所示。免疫印迹和斑点印迹应用中的银到结合的金缀合物的灵敏度可与比色检测方法相媲美。此外,二级贵金属纳米颗粒蛋白缀合物很好地适应标准蛋白质印迹方案,并且对您当前的检测方案几乎不需要改变。 

与传统检测探针相比,使用贵金属纳米颗粒蛋白缀合物进行免疫印迹具有多种优势,例如: 

  • 检测无需开发

  • 检测不需要昂贵的成像设备

  • 允许比色多重分析

以下是使用二级金缀合物检测膜上抗原的标准斑点印迹方案。相同的方案可用于金纳米海胆、银纳米颗粒和合金纳米颗粒蛋白质缀合物探针。

标准免疫金斑点印迹实验方案

  1. 将 1 微升连续稀释的蛋白质(0.1 – 100 ng)滴在添加有 50 ug/ml BSA 的 PBS 中,滴在硝酸纤维素膜或 PVDF 膜上。

  2. 让蛋白质滴干燥进入膜中。

  3. 在室温下使用 1% (w/v) 奶粉的 1X PBS 将膜封闭 30 分钟。

  4. 与一抗在室温下孵育 2 小时。

  5. 用上述制备的封闭液清洗膜 3×5 分钟。

  6. 用 0.2% 奶粉按 1:10 (OD=0.3) 稀释的二级金结合物孵育 2 小时(或更长的时间以提高灵敏度)。注意:有关金缀合物的制备,请参阅技术说明#102。

  7. 如上所述洗涤 3×5 分钟。

  8. 干燥膜并记录数据。

  9. (可选)继续进行银增强以提高灵敏度。

金纳米粒子的常见应用——使用金纳米颗粒缀合物进行免疫印迹

图 1. 使用 Cytodiagnostics 膜银增强试剂盒增强前后 Cytodiagnostics 链霉亲和素金缀合物(左上)和我们的链霉亲和素银缀合物(右上)的斑点印迹分析示例。下图展示了使用具有不同光学特性的贵金属纳米粒子缀合物的混合物同时多重检测三种不同抗原,即抗人IgG 30nm金/银(20/80)合金缀合物(绿色)、a-小鼠IgG 30nm金/银 (80/20) 合金缀合物(红色)和 a-兔 IgG 40nm 金缀合物(紫色)。

金纳米粒子的常见应用——使用金纳米颗粒缀合物进行免疫印迹

图 2. 垂直流斑点印迹免疫分析中的多重检测。左图显示 3 个抗原(红点)和对照中的 2 个呈阳性检测。右图显示使用两种不同颜色的纳米颗粒探针(红色:金纳米颗粒,蓝色:金纳米海胆)对两种不同抗原的阳性检测。 

金纳米粒子的常见应用——使用金纳米颗粒缀合物进行免疫印迹

图 3. 使用兔抗肌动蛋白一抗对纯化肌动蛋白进行蛋白质印迹检测,然后使用 10nm 抗兔 IgG 金缀合物进行二次检测,并使用 Cytodiagnostics 膜银增强试剂盒进行增强。