慢病毒滴度测定——QuickTiter™慢病毒p24 ELISA滴度检测

慢病毒源于反转录病毒,但又有所不同。在感染能力方面比反转录病毒还强,可有效感染神经元细胞、肝细胞、心肌细胞、肿瘤细胞、干细胞等多中类型的细胞,又很少引发基因的免疫反应。在基因治疗中广泛应用的逆转录病毒载体存在的主要问题,是无法高效转导非分裂期细胞。慢病毒载体不但可以感染非分裂期细胞,还具有容纳外源性目的基因片段大、稳定整合持久表达、免疫反应小等优点。

美国著名细胞产品公司Cell BioLabs为慢病毒研究人员提供完备的重组慢病毒表达系统及其相关产品和服务,产品包括慢病毒的最新一代表达系统,针对慢病毒滴度低的软肋而专门设计的慢病毒浓缩纯化试剂盒,慢病毒的滴度滴定及定量,以及慢病毒高效转染试剂和慢病毒宿主细胞等,几乎覆盖慢病毒研究中的所有技术环节。

当通过纯化获得重组慢病毒颗粒后,需要对慢病毒液的浓度或感染活性进行定量检测。一般来说,对于病毒颗粒慢病毒滴度测定——QuickTiter™慢病毒p24 ELISA滴度检测进行定量主要是通过检测纯化的病毒液中DNA的OD260来检测其病毒含量(Quantitation);而对于病毒颗粒的滴度检测(Titer),则需要通过传统的克隆成斑试验或者对病毒特异蛋白的免疫反应试验等检测。Cell Biolabs为慢病毒的定量及滴度提供了全套QuickTiter™系列方案。其中涉及到通过DNA/RNA的OD值检测从而对慢病毒进行定量,详情查看“慢病毒定量——Cell BioLabs慢病毒快速定量试剂盒”;而针对滴度检测,还提供了慢病毒外壳蛋白p24的免疫学ELISA方案。

p24蛋白是慢病毒外壳中含量较大的标志性蛋白。Cell Biolabs提供的基于慢病毒p24蛋白的ELISA分析分两种,一种称为传统的p24蛋白ELISA检测(Quantitation Kit (Traditional HIV p24 ELISA))。能检测所有p24蛋白,从而实现对病毒滴度的定量。分为一次96孔板分析和五次96孔板分析,采用ELISA方法,反应灵敏,可检测1 ng/mL HIV p24蛋白,最后分光光度计读取数据。

产品名称 货号 产品说明(点击查看说明书)
QuickTiter™ Lentivirus Quantitation Kit (Traditional HIV p24 ELISA) VPK-108-HIV-p24 ELISA法检测,96次分析
VPK-108-HIV-p24-5 ELISA法检测,96×5次分析

由于病毒颗粒的外壳蛋白p24蛋白是由包装细胞系提供的,因此在使用检测的时候不可避免的会将病毒颗粒本身的p24蛋白与包装细胞系产生的p24蛋白一起检测,造成实验的误差,Cell Biolabs的慢病毒滴度检测Kit解决了这个问题,其QuickTiter™ Lentivirus Titer Kit(Lentivirus-Associated HIV p24)能分离出包装细胞产生的游离p24蛋白,只检测病毒颗粒表面的p24,因此实验数据更真实准确。分为一次96孔板分析和五次96孔板分析,采用ELISA方法,反应灵敏,可检测1 ng /mL HIV p24蛋白,最后分光光度计读取数据。

产品名称 货号 产品说明(点击查看说明书)
QuickTiter™ Lentivirus Titer Kit (Lentivirus-Associated HIV p24) VPK-107 ELISA法检测,96次分析
VPK-107-5 ELISA法检测,96×5次分析

美国著名细胞学试剂专家Cell BioLabs为您提供全套的慢病毒技术解决方案,ViraSafe™ 最新一代慢病毒表达系统有多种样式供您选择,ViraBind™ 慢病毒浓缩&纯化试剂盒采用了专利技术能让你获得更高滴度和纯度的慢病毒,QuickTiter™ 慢病毒系列提供传统和专利技术的p24不同ELISA检测方法,同时还有采用OD260方法快速定量慢病毒的方案;Cell BioLabs还有专为慢病毒载体用的293LTV细胞及高效转染试剂供您选择,如果您对慢病毒产品感兴趣,请致电021-50837765到上海金畔生物科技有限公司垂询慢病毒相关的实验解决方案,或索取最新的Cell BioLabs产品资料。

慢病毒纯化&浓缩——Cell Biolabs慢病毒浓缩纯化试剂盒

慢病毒虽然在逆转录病毒的基础上进行了很多的优化,但是和腺病毒相比,仍然存在滴度较低的问题。Cell Biolabs为此研制出的拥有专利技术的纯化试剂(ViraBind™ reagents (patented technology)),再结合新型的纯化装置,能在4-6小时内,每次能将100ml病毒上清纯化500-1000倍,从而获得109-1010TU/ml感染滴度的慢病毒颗粒。采用该Kit纯化获得的慢病毒液,不含有游离的包装蛋白以及转导抑制物,因此非常有利于后继的慢病毒操作。

常规的慢病毒纯化一般采用CsCl超速密度离心法(利用不同大分子,如DNA、蛋白、病毒颗粒、细胞碎片等具有不同的密度进行梯度离心而分离出来的原理)分离病毒颗粒,但是耗时耗力。Cell Biolabs提供两种慢病毒纯化方案,一种是用纯化柱装置,另一种是PLUS的采用透析柱装置。前者纯化过程快速,只需3小时;后者采用了透析柱装置,时间上要过夜透析,但是纯度很高。具体纯化步骤及大概区别如下图所示:

慢病毒纯化&浓缩试剂盒(离心柱) 慢病毒纯化&浓缩试剂盒PLUS(透析柱)

慢病毒纯化&浓缩——Cell Biolabs慢病毒浓缩纯化试剂盒

慢病毒纯化&浓缩——Cell Biolabs慢病毒浓缩纯化试剂盒

采用专利的ViraBind™试剂,使用离心柱,只需3小时 采用专利的ViraBind™试剂,使用透析柱,需要过夜,但纯度高
   
产品名称 货号 产品说明(点击查看说明书)
ViraBind™ Lentivirus Concentration and Purification Kit (100 ml/prep) VPK-090 每次常规离心浓缩100ml病毒上清,2次
VPK-091 每次常规离心浓缩100ml病毒上清,5次
VPK-091-5 每次常规离心浓缩100ml病毒上清,25次
产品名称 货号 产品说明(点击查看说明书)
ViraBind™ PLUS Lentivirus Concentration and Purification Kit (50 ml/prep) VPK-095 每次透析浓缩50ml病毒上清,2次
VPK-096 每次透析浓缩500ml病毒上清,2次
VPK-096-5 每次透析浓缩500ml病毒上清,5次

Cell Biolabs慢病毒浓缩纯化试剂盒中普通纯化慢病毒Kit每次纯化100ml,分2次/5次/25次三种规格;PLUS纯化Kit分中提(50ml每次)和大提(500ml每次),中提包装可使用2次,大提又分为2次和10次。

Cell BioLabs为您提供全套的慢病毒技术解决方案,ViraSafe腺病毒表达系统有多种样式供您选择;多种慢病毒滴度检测和定量试剂为您提供快捷和准确的慢病毒检测方案;ViraBind™慢病毒浓缩和纯化试剂盒采用了专利技术能让你获得更高滴度和纯度的慢病毒,解决了慢病毒低滴度的软肋;Cell BioLabs还有转为慢病毒载体用的293LTV细胞及慢病毒高效转染试剂供您选择,如果您对慢病毒产品感兴趣,请致电021-50837765到上海金畔生物科技有限公司垂询慢病毒相关的实验解决方案,或索取最新的Cell BioLabs产品资料。

腺相关病毒转染——Cell Biolabs腺相关病毒高效转染试剂

安全高效的将目的基因导入人体靶细胞是成功进行基因治疗的关键之一。经典的基因导入方式(如显微注射、电穿孔、磷酸钙转染等)虽然曾在科研中起了一定的作用,但由于不能很好的解决转染率、靶向性等问题而限制了它们的应用。随着病毒学等相关学科的发展,目前基因打靶已广泛使用各种病毒为载体,AAV载体是最近几十年发展起来的一类新型载体。作为病毒载体的重要一员,AAV不具有明显的细胞毒性效应并且不会像其他病毒载体那样引起细胞强烈的免疫反应等特性,因为其在基因治疗中的应用潜力引起了人们越来越多的兴趣和关注。

由于AAV是天然的缺陷性病毒,需要提供多个因素才能导致转染发生,因此也被认为是最安全的病毒载体。同时腺相关病毒能感染分裂型和非分裂型细胞,甚至S期静止细胞,这使腺相关病毒成为很有前途和吸引力的基因治疗载体。腺相关病毒的转导过程包括病毒结合、进入细胞以及进入后的作用、核内转移和病毒第二条DNA链的合成。在这过程中,最后一步,也就是AAV第二条DNA链的合成是腺相关病毒载体转染的限速步骤。腺相关病毒转染——Cell Biolabs腺相关病毒高效转染试剂

Cell BioLabs针对腺相关病毒转染过程中的主要问题,开发出ViraDuctin™腺相关病毒转染试剂(ViraDuctin™ AAV Transduction Kit 目录号:AAV-200/AAV-201)。该试剂盒能高效提高腺相关病毒在多种细胞内的转染效率,包括传统转染方法转导较低的细胞非分裂细胞,如原代培养细胞和干细胞。该转染试剂使用便捷,只需2小时,是AAV转染非分裂细胞的首选。该试剂盒按照可转染次数分两种包装,AAV-200能进行10次6孔板或者35mm细胞培养皿的转染,货号为AAV-201的则能进行50次转染。

产品名称 货号 产品说明(点击查看说明书)
ViraDuctin™ AAV Transduction Reagent AAV-200 10次6孔板/35mm细胞转染
AAV-201 50次6孔板/35mm细胞转染

美国著名细胞学试剂专家Cell BioLabs为您提供高效简便的重组腺相关病毒相关产品和服务,产品包括腺相关病毒的纯化、定量和高效转染试剂。ViraBind™腺相关病毒纯化试剂盒采用特殊的纯化Matrix技术,无需超速离心,在大大减少试验时间的同时还保证了AAV的纯度。QuickTiter™腺相关病毒定量试剂盒通过检测腺相关病毒DNA含量来测定其病毒含量,只需2小时。ViraDuction™腺相关病毒转导试剂能极大的增加腺相关病毒在多种细胞内的转导效率,包括传统转染方法转导效率低的非分裂细胞,如原代培养细胞和干细胞。如果您对腺相关病毒产品感兴趣,请致电021-50837765到上海金畔生物科技有限公司垂询腺相关病毒相关的实验解决方案,或索取最新的Cell BioLabs产品资料。

腺相关病毒定量——Cell Biolabs的AAV滴度滴定及定量试剂盒

腺相关病毒(Adeno-Associated Virus, AAV)作为基因治疗的载体存在一些非常突出的优点,比如能感染分裂和非分裂细胞、不具有明显的致病性、整合至宿主特定染色体长期表达目的蛋白等,已成为基因治疗被广泛应用的安全、有效的载体。腺相关病毒定量——Cell Biolabs的AAV滴度滴定及定量试剂盒

在腺相关病毒的应用过程中,我们经常需要获得病毒液的病毒含量或者腺相关病毒的滴度数据。传统的方案是使用DNA点杂交或其他类似方法来测量腺相关病毒感染滴度,但是这种传统的方法实验周期较长,操作繁琐。对于已获得了高纯度AAV颗粒的检测,使用OD260nm处光吸收度数值来衡量AAV的病毒颗粒含量不失为一种更便捷的方案,遗憾的是,这种方法不适用于未纯化的病毒颗粒,因为其它的杂质会干扰260nm处的吸收度。另外,采用免疫学的办法,使用与AAV病毒颗粒结合的抗体来检测腺相关病毒含量也有被使用,但是很显然,这种方法将会检测所有AAV病毒,包括不含有基因组DNA的包装颗粒。

Cell Biolabs的QuickTiter™ AAV Quantitation Kit试剂盒(目录号:VPK-145)很好的解决了上述问题,该试剂盒包括试剂A、试剂B、捕获Matrix、洗脱液、溶液C、Dye染料以及AAV DNA标准物。本腺相关病毒定量试剂盒通过检测腺病毒DNA含量来测定其病毒含量。

该腺相关病毒定量试剂盒的工作步骤是首先降解悬液里的核酸成分,然后使用Matrix胶有效结合腺相关病毒颗粒,从而分离出杂质蛋白及蛋白复合物,洗脱下AAV颗粒后进行变性,随后用染料对核酸进行染色。

由于采用了专利技术的捕获Matrix胶,不但能专一性的结合腺相关病毒颗粒,因此能有效的提高检测效度;而且可以用于未纯化的AAV病毒液,因此可定量已经纯化的AAV病毒以及未纯化的AAV病毒。经过相关步骤后,通过480/520 nm滤镜荧光仪下读取数据,对照AAV DNA标准曲线得出AAV滴度。该试剂盒检测灵敏,对于已经纯化的AAV DNA,可以在2小时内获得数据,可检测1×109GC/ml的AAV;对于未纯化的DNA,需要使用Kit提供的提纯试剂纯化再测量,大概在3-4小时左右完成,可检出5×1010GC/ml腺相关病毒。该试剂盒能从无辅助病毒的AAV病毒液内完成20次检测。 

产品名称 货号 产品说明(点击查看说明书)
QuickTiter™ AAV Quantitaiton Kit VPK-145 荧光检测,20次分析

美国著名细胞学试剂专家Cell BioLabs为您提供高效简便的重组腺相关病毒相关产品和服务,产品包括腺相关病毒的纯化、定量和高效转染试剂。ViraBind™腺相关病毒纯化试剂盒采用特殊的纯化Matrix技术,无需超速离心,在大大减少试验时间的同时还保证了AAV的纯度。QuickTiter™腺相关病毒定量试剂盒通过检测腺相关病毒DNA含量来测定其病毒含量,只需2小时。ViraDuction™腺相关病毒转导试剂能极大的增加腺相关病毒在多种细胞内的转导效率,包括传统转染方法转导效率低的非分裂细胞,如原代培养细胞和干细胞。如果您对腺相关病毒产品感兴趣,请致电021-50837765到上海金畔生物科技有限公司垂询腺相关病毒相关的实验解决方案,或索取最新的Cell BioLabs产品资料。

腺相关病毒纯化方案——Cell Biolabs的AAV纯化试剂盒

腺相关病毒(Adeno-Associated Virus, AAV)作为基因治疗的载体存在一些非常突出的优点,比如能感染分裂和非分裂细胞、不具有明显的致病性、整合至宿主特定染色体长期表达目的蛋白等,已成为基因治疗被广泛应用的安全、有效的载体。

AAV病毒纯化的传统方法是加热失活法和平衡密度梯度离心法。目前大多数腺相关病毒都来源于AAV-2血清型腺病毒。对于AAV-2而言,由于其表面存在细胞表面受体,能有效结合到某些蛋白上,所以能使用亲和层析法纯化,因此也就避免了CsCl2和辅助包装病毒的污腺相关病毒纯化方案——Cell Biolabs的AAV纯化试剂盒染。这些细胞表面受体包括硫酸乙酰酣素糖蛋白受体、联合辅助受体等,如使用肝素亲和层析方案进行腺相关病毒,但是这种方案需要对纯化前的病毒液进行预处理。因此这些方法在具体的运用时都存在一定的缺陷,如单一的CsCl2超速离心较为耗时,而且纯度上也不是很高,而肝素亲和层析以及进行的预处理,在经济性和时效性方面尚有不足。

Cell BioLabs为您提供了新型高效的腺相关病毒提取纯化方案,ViraBind™ AAV Purification Kits试剂盒(货号:VPK-140)采用特殊的专利Matrix技术,该纯化Matrix胶能特异性吸附腺相关病毒颗粒,大大减少试验时间的同时还保证了腺相关病毒的纯化度。后继采用常规离心的方式(较大10,000g x10min),整个过程只需3个小时,回收率高达60%。

ViraBind™ AAV Purification Kit每次能处理一个150mm培养皿或两个100mm大小培养皿内的病毒感染细胞液,并获得100ul的高纯度腺相关病毒液。每个Kit可完成10次纯化,经SDS验证无杂蛋白条带,具有较高的感染滴度。获得的腺相关病毒感染原代细胞有非常好的效果。

另外针对一些需要腺相关病毒大量提取的用户,Cell Biolabs还提供了AAV的大提试剂盒ViraBind™ AAV Purification Mega Kit(货号:VPK-141/VPK-141-5),在具体的纯化后继步骤中,使用透析柱装置,每次可进行10个150mm培养皿大小的病毒感染细胞的提纯,分2次大提和10次大提两个包装。 

产品名称 货号 产品说明(点击查看说明书)
ViraBind™ AAV Purification Kit VPK-140 10次纯化,每次2个10cm板细胞
ViraBind™ AAV Purification Mega Kit VPK-141 2次纯化,每次10个15cm板细胞
VPK-141-5 10次纯化,每次10个15cm板细胞

 美国著名细胞学试剂专家Cell BioLabs为您提供高效简便的重组腺病毒相关产品和服务,产品包括腺相关病毒的纯化、定量和高效转染试剂。ViraBind™腺相关病毒纯化试剂盒采用特殊的纯化Matrix技术,无需超速离心,在大大减少试验时间的同时还保证了腺相关病毒的纯化度。QuickTiter™腺相关病毒定量试剂盒通过检测腺病毒DNA含量来测定其病毒含量,只需2小时。ViraDuction™腺相关病毒转染试能极大的增加腺相关病毒在多种细胞内的转染效率,包括传统转染方法转导较低的细胞非分裂细胞,如原代培养细胞和干细胞。如果您对腺相关病毒产品或者腺病毒、慢病毒以及逆转录病毒产品感兴趣,请致电021-50837765到上海金畔生物科技有限公司垂询腺相关病毒相关的实验解决方案,或索取最新的Cell BioLabs产品资料。