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珠子选择指南

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珠子选择指南

对于细胞破碎建议:

大小 

当湿法珠磨时细菌，使用直径为0.1毫米的玻璃珠。 

当湿法珠磨时酵母/真菌，使用直径为0.5毫米的玻璃珠或氧化锆/二氧化硅珠。 

当湿法珠磨时软组织（如肝脏、大脑、肌肉），使用直径为1.0毫米的玻璃珠或氧化锆/二氧化硅珠。当湿磨组织时，样品量超过几十毫克时，应先预切碎成横截面小于1毫米的碎片，然后再进行研磨。 

湿磨时坚韧的组织（如结缔组织、皮肤或“非木质”植物材料），首先预切碎或低温粉碎，并使用直径为2.0毫米的氧化锆珠。 

使用时尤其是坚韧或纤维组织，使用上面建议的相同尺寸的珠子，但选择更致密的珠子材料。例如，使用氧化锆-二氧化硅珠破碎孢子，或使用三个2.3毫米的铬钢珠提取坚韧的纤维植物材料，如单子叶植物的叶子。

一磅重的瓶子里有多少颗珠子？

铬钢珠:  

6.23毫米直径~430 

3.2毫米直径~3300 

2.3毫米直径~7900  

玻璃念珠:乘以3.2；氧化锆-硅珠:乘以2.1；氧化锆珠:乘以1.4

密度

· 玻璃珠子的密度为2.5克/立方厘米，是用于“打珠”的最常见的珠子介质。

· 氧化锆/氧化硅珠子的密度为3.7克/立方厘米（比玻璃密度高50%——对孢子和大多数组织都有好处）。

· 碳化硅尖锐颗粒（不是珠子）的密度为3.2克/立方厘米（由于颗粒具有锋利的切割边缘，因此在坚韧的组织样本上可能会工作得更快。它们优于较便宜的氧化锆/二氧化硅珠的优势正在研究中。但请参见以下布雷因的评论。

· 石榴石（一种铁铝硅酸盐，尖锐的颗粒）的密度为4.1克/立方厘米。像致密、边缘锋利的SiC颗粒一样，它可以加速坚韧组织的溶解。与SiC尖锐颗粒不同，石榴石颗粒在搅拌过程中会碎裂。当对软组织或含有细菌的粪便和土壤样品进行均质化时，这种特性会很有用。不需要混合珠子大小。从半充满2毫米石榴石颗粒的微孔开始，样品迅速分散。与此同时，打珠产生了，原地，小得多的石榴石碎片可以有效地破坏微生物。

· 氧化锆密度为5.5克/立方厘米（比玻璃密度高100%）-这种用于坚韧组织的陶瓷珠具有化学惰性，不易破碎。

· 铬钢和不锈钢密度为7.9克/立方厘米。这些重珠子通常用于干磨叶子和种子。根据珠子的大小，放置1到5个特殊的钢珠增强型2毫升聚丙烯微孔管或者2毫升不锈钢微型量具。当与钢珠一起使用时，普通的螺旋盖聚丙烯微阀可能会破裂或泄漏。铬钢珠通常是不锈钢珠的良好替代品。虽然不锈钢珠因其耐腐蚀性而经常被选用，但铬钢珠并不昂贵…事实上，它们足够便宜，可以用作“一次性用品”，从而消除了清洁和交叉污染的担忧。一个警告是:最终，铬钢珠与水介质接触会生锈。应立即将它们从细胞裂解物中去除。订购铬钢珠时，BioSpec提供了一个小磁铁，使这项工作变得轻松。

· 碳化钨密度为14.9克/立方厘米。虽然密度很高，但这种珠子通常不用于生物制备，因为它会使匀浆看起来“脏”。高重力离心将澄清匀浆，但这很耗时。上面列出的其他高密度介质通常也能做得很好。


珠子的其他用途

· 酵母和细菌的快速简便接种.在固体营养培养基中加入十几个直径为6.3毫米的无菌玻璃珠。使用侧向运动摇动平板（或一叠平板），使添加的酵母和细菌悬浮液均匀分布在平板表面。在接种体渗透到培养基凝胶中后，可以通过翻转平板并将珠子从盖子中倒出来倒出珠子。

· 增加组织培养生长的表面积用直径为6.3毫米的玻璃珠包装滚筒瓶、试管或小瓶。在这种应用中，珠粒应紧密包装，以防止珠粒在滚动或摇动过程中移动。类似地，当细胞在不激动的培养瓶中，通过添加一层直径为0.1 mm的珠子，可以更快地达到汇合，并提高细胞密度。

· 创造一个生物反应器 通过用玻璃珠填充柱并接种选择的表面粘附微生物或细胞。

· 保持透析管垂直 在透析过程中通过在密封前加入一些大玻璃珠或大理石。

· 纳米技术。将坚硬或易碎的颗粒研磨至亚微米尺寸。一篇简短的评论“高科技球磨机推动纳米技术的进步”包含了使用Retsch对纳米颗粒进行珠磨研磨的实用信息E-max™珠磨机MiniBeadbeater系列珠磨机将这种应用扩展到处理少量（《0.5克）贵重材料。

· 用于智能手机显微镜附件的镜头。可见

· 更换水在商业实验室浴池中铝珠.  无需擦拭湿试管，无需试管翻倒，无需支架、浮子或砝码。BioSpec产品的“微小泪珠”铝珠可为试管提供热传递性能。

· 来源于与基质消化酶一起孵育的动物组织的活单细胞产量提高.探索塑料微珠的新应用。替换繁琐的“手工研磨组织碎片通过用适当的酶消化组织的细胞外基质而被溶解。

· Faster QuEchERS technique：使这一广受欢迎的方案更快地从植物、动物组织和食品中提取和分析小有机物（杀虫剂、除草剂、药物）。通过在提取管中加入一些直径为2 -3 mm的玻璃珠并涡旋，将样品水合和均质化的时间缩短一半。或者，更好的方法是通过在迷你搅拌器中均质化多个提取管来提高通量。


aimplexbio：AimCount™ 珠子概述

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aimplexbio：AimCount™ 珠子概述

AimCount™ 珠子

体积： 5毫升

PN：FC1001 批号：3590829 浓度：997,000 珠/mL（批次特定）

储存：   2-8℃。

仅供研究使用。不用于诊断过程。

描述：悬浮在含有 0.02% Tween-20 的等渗缓冲溶液 (pH 7.4) 中的荧光珠（10.5 ± 0.26 微米）可通过 FITC (FL1)、PE (FL2) 和 PE-Cy5 (FL3) 通道进行检测。当被 488nm 激光激发时，流式细胞仪被检测；当被 405nm 激光激发时，被 V450 (448/45) 和 V500 (528/45) 通道检测。

应用： AimCount Beads 设计用作通过流式细胞术计算绝对细胞数的参考。

注意：使用前短暂涡旋以重新悬浮 AimCount Beads。一致且精确的移液对于获得准确计数至关重要。对于每 500 至 1000 µL 染色样品，建议添加 50 或 100 µL AimCount 珠悬浮液。

重要提示：叠dan化钠与重金属形成爆炸性化合物。该产品含有<0.05% (w/w) 叠氮化物，与管道排水管中常见的铅和铜反复接触可能会导致冲击敏感化合物积聚。按照您所在机构的规定进行处置。

代表性数据：

aimplexbio：AimCount&trade; 珠子概述

AimPlex Biosciences, Inc.（原名 YSL Bioprocess Development Co.）利用多年的检测开发专业知识，为基于微珠的多重免疫检测提供全面的生物医学测试解决方案。公司成立于2011年8月，致力于开发和提供高质量、高性价比的流式细胞术分析检测试剂。我们的免疫分析产品采用现有的流式细胞术分析平台进行高灵敏度检测。

AimPlex Biosciences 提供快速发展的可定制测试菜单（目前约有 500 种免疫测定），并为客户提供定制免疫测定服务，帮助他们开发满足其研究需求的多重检测组合，从而提高测定性能和效率。

如何进行ELISA的构建？

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如何进行ELISA的构建？

选择您的关键试剂

固相：应选择专门允许结合检测中的抗原或抗体成分的固相以避免背景噪音。可用固相的例子有微孔板（通常是聚苯乙烯、聚丙烯和聚乙烯）、小管和珠子。小管和珠子通过提供较低的检测限来扩展测定参数。这是因为它们允许灵活的测试数量和测定体积，同时还为涂层和反应的发生提供更大的表面积。珠子的使用可以进一步减少孵育时间，并使 ELISA 能够用于不同的微流体系统，即自动化台式 ELISA。珠子本身可以是磁性的，因此使用磁铁可以轻松地将其分布在整个液相中。

样本：

应选择具有已知分析物浓度的标准样品，以涵盖从检测下限到上限（校准）的整个测定范围。这是为了确保无论样品中可测量的分析物浓度较低还是较高，测定的灵敏度和精确度都是一致的。此外，患者样本应取自并包含各种年龄范围、种族、性别和健康状况，以确保检测的广泛适用性和可靠的结果。在定量之前和定量过程中保持目标分析物稳定对于准确测定浓度至关重要。因此，样品提取、制备和储存中涉及的以下分析前条件尤其重要。

  • 必须选择能够保持分析物稳定性的适当样品基质。

  • 可能需要将蛋白酶抑制剂添加到生物流体样品基质中，以防止天然存在的蛋白酶降解分析物。

  • 收集患者样本时，必须评估运动、禁食、酒精、烟草和季节变化的影响。

  • 必须确定最佳样品储存温度（-80° C、-20° C、2-8° C 或室温）和冻融循环次数

  • 必须研究样品在室温下放置并在检测环境中保持稳定的时间长度。 

  • 移液前必须以标准化方式充分混合或倒置样品，以确保分析物在整个样品基质中均匀分布。

洗涤缓冲液

洗涤缓冲液的目的是洗掉任何未结合或过量的物质，否则可能会产生背景噪音信号并干扰测定和结果。洗涤缓冲液的设计具有与生理条件相似的 pH 值和盐浓度，并含有TRIS ( FT15751 )、PBS 和聚山梨酯等洗涤剂。如果检测到大量“背景噪音”而不是信号强度，则增加洗涤缓冲液的体积、洗涤剂的浓度或/和洗涤步骤的数量通常会有所帮助。这将增加所有未结合材料被去除的可能性。如果怀疑分析物降解或者分析物在程序中被洗掉，则减少洗涤步骤数、洗涤缓冲液体积或缓冲液中去污剂的浓度可能是有益的。

封闭缓冲液

为了防止与其他检测成分发生交叉反应和非特异性抗原结合，需要使用封闭剂。通常将牛奶溶液（脱脂奶粉）、全血清或牛血清白蛋白 (BSA) ( PRO-422 ) 等试剂添加到缓冲液中，并在第一次洗涤步骤后使用，以饱和孔的自由表面。

这种封闭缓冲液也可以含有去污剂，但应避免使用可能干扰测定的生物素或免疫球蛋白等成分。总体封闭缓冲液可以获得更高的信噪比，并且可以在使用的封闭剂的体积、浓度和类型方面进行优化。

酶和底物（信号系统）

常用的信号系统之一是酶联抗体，并且有多种不同形式和物种类型可供选择。常用于 ELISA，其中碱性磷酸酶和磷酸对硝基苯酯底物在目标分析物存在的情况下会产生黄色。检测抗体还可以与过氧化物酶并与氨基水杨酸和邻苯二胺底物一起使用，如果出现阳性结果，它们会呈现棕色。总体酶反应用于证明反应的特异性和速率。信号出现后，可以添加氢氧化钠、盐酸或硫酸来终止反应。 

在测定开发过程中，性能和财务方面在确定应使用哪些试剂以及浓度时起着关键作用。虽然使用较低浓度的酶联抗体可能更具成本效益，但可能有必要增加浓度以确保产生足够的信号强度。如果您的 ELISA 灵敏度较差，可以通过改变抗体类型（从单克隆抗体到多克隆抗体）或采用不同的信号系统来放大信号。第一个例子是二抗被生物素化，然后添加链霉亲和素-HRP。由于四个链霉亲和素分子可以与生物素相互作用，因此通过添加更多的链霉亲和素分子进行检测，可以提高检测少量分析物的能力。此外，通过用多种酶、银纳米颗粒标记检测抗体或使用化学发光或荧光底物等替代底物类型，可以提高灵敏度。 

校准和控制

标准曲线或校准曲线由分布在测定范围内的已知分析物浓度的样品组成。它们在 ELISA 中用作辅助，以便稍后计算目标分子的浓度。应该强调的是，校准品和对照品的矩阵应尽可能与所运行的天然样品的矩阵相似。

运行标准曲线很有用，如果生成的标准曲线较差，可能会导致结果无效或突出检测中的错误。不正确的抗体结合或分析物捕获可能是标准曲线不良的原因。除了校准曲线外，还应使用阳性和阴性对照样品。阴性对照不应包含任何感兴趣分析物的痕迹，因为它们用于检查假阳性和非特异性结合。阳性对照应含有已知浓度的目标分析物。如果测定检测到阳性对照中存在分析物并且阴性对照均为阴性，则测定工作可靠且结果有效。


如何进行ELISA的构建？

使用已知浓度的校准品创建的 ELISA 标准曲线示例，X 表明通过曲线插值获得的未知样品的浓度。

培养箱和混合器

尝试并使用 ELISA 的特定孵育时间和温度，有助于在捕获抗体和目标分析物之间达到结合平衡。控制板周围温度的一种方法是使用确保波动最小的培养箱。此外，使用混合器可以帮助您的 ELISA 达到最佳性能，因为它有助于将试剂分布在整个基质中，以促进更多的结合。一般来说，较长的潜伏期可能有利于灵敏度，因为有更多的时间进行结合。然而，还应该测试缩短的孵育时间。

捕获抗体的固定化方法

当捕获抗体固定到 ELISA 板上时，其方向可能会发生变化，从而降低其亲和力以及与抗原结合的机会。此外，洗涤步骤中抗体的置换可能导致灵敏度和重现性较差。解决这个问题的一种方法是使用单层表面，使抗体能够共价结合到板上，但 Tania García-Maceira 等人已经证明了灵敏度的更大改进。 （2020）通过使用甲壳素涂层的聚苯乙烯表面来实现。使用这种固定形式，抗体通过与几丁质结合域融合，以更好的方向被捕获到微量滴定板上。

lumafuor高效retrobeads操作说明

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lumafuor高效retrobeads操作说明

一、包装及稀释： 
Lumafuor 的珠子装在密封小瓶中，并将浓缩的珠子悬浮在蒸馏水中。如果使用红色微珠作为神经通路的逆向示踪，推荐稀释方法：大鼠视觉皮层可采用1:4稀释，且不会降低微珠荧光标记的强度和质量。但对于第一次实验，我们不建议使用稀释的微珠，而是使用原液进行进样示踪。除蒸馏水外，也可使用常规盐溶液如 NaCl 和 KCl 作为稀释剂。如果使用绿色珠子，强烈建议使用原液而不需稀释。 
二、储存：
为了避免蒸发，珠溶液应保存在4度冰箱中。不要冷冻它！冷冻的豆子将毫无用处，无法使用。干燥后的珠子也不能使用（不能重新悬浮），产品没有明显的使用寿命。如果按要求保存，可保存数年。 
三、注射： 
珠子最好使用压力注射，如1ml Hamilton 微量注射器或气动注射系统。如需小面积显微注射（30-50nl），可采用末端直径为30-50um的玻璃电极进行注射，而较大直径的玻璃电极可用于常规反向示踪（注射量0.1-0.3ul）。然而，即使剂量较高，珠子也不会从注射部位显着扩散（通常小于 1 毫米）。因此，为了尽可能完整地标记投射到更大核的神经元，需要多点注射。尽管珠子带负电，但不建议将离子渗透法用于示踪珠子。 
4、生存时间：
在大多数恒温脊椎动物系统中，检测珠子的最短有效时间是24小时。 48小时内，标记强度随进样时间增加而增加，48小时后荧光强度保持恒定。对于冷血动物，建议检测珠子的时间为 1 周。目前尚未检测出珠子的最长可检测周期。然而，珠子的荧光强度和质量可以在体内至少14个月保持不变，并且细胞可能被长时间标记。尚未发现珠子对动物或神经元有毒性作用。
五、固定及处理：
标准固定方法是：0.1mpbs洗涤或灌注并固定在4%多聚甲醛中（0.1mpbs制剂，pH7.4）。用戊二醛固定会产生大量的组织自发荧光，这会阻碍珠子标记的神经元。而且戊二醛固定的组织中不会全观察到绿色珠子，因此应尽量避免。如果使用冷冻切片，则应使用 PBS 冲洗切片并用明胶包被的载玻片干燥。风干后，载玻片应用二甲苯放置 1 分钟透明，然后用荧光封片或 krystalon 密封。 Fluoromount可以从atomrgic chemetals Corp. (Farmingdale, NY)购买；克里斯塔隆可以从
Harleco（EM Industries，新泽西州吉布斯敦）。切片只能短时间接触乙醇或二甲苯，但长期接触（超过 5 分钟）会损坏珠子。微珠对甘油非常敏感，在甘油环境中荧光会很快被提取。因此，不宜使用甘油封孔剂。如果无法避免，可用水杨酸甲酯代替甘油作为封闭剂。如果将切片保存在黑暗环境中，荧光珠标记的细胞一年内无法提取（但切片的荧光背景会增加）。到目前为止，还没有珠子标记的组织涂有塑料材料的记录。
观察：
红珠中的染料是罗丹明，所以所有与罗丹明配套的荧光滤光片都可以使用。尼康公司一些旧的罗丹明滤光片由于背景较高，可能无法观察到荧光珠。一般情况下，蔡司、徕兹的标准罗丹明滤光片可以获得较好的观察效果。大多数绿色荧光滤光片都可以很好地观察绿豆的荧光结果。设置为荧光黄的滤光片可以获得强烈明亮的荧光，但也带来较高的背景干扰。结果表明，较宽波段的荧光滤光片比窄带滤光片可以获得更强的荧光信号。经过长时间的观察和拍照，珠子的荧光没有出现。