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SPRI 珠子如何工作？

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SPRI 珠子如何工作？

SPRI 技术是一种先进的方法，可根据核酸的类型和大小选择性、可逆地将核酸与顺磁珠结合。该技术在精确提取、纯化、清洁和尺寸选择核酸方面提供了高性能。

该技术于 20 世纪 90 年代由麻省理工学院怀特海德研究所开发，在人类基因组计划中发挥了至关重要的作用，特别是在桑格测序方案的 PCR 产物纯化中。

我们的基因组试剂利用了 SPRI 技术的力量，使他们能够生产高质量的核酸样本，并在基因组研究中提供可靠、准确的结果。生产的样品支持各种应用，例如 qPCR、ddPCR、桑格测序、下一代测序 (NGS) 和微阵列分析。

SPRI 珠的剖析

每个 SPRI 珠子的尺寸为 1 µm ± 8%，由一个有浮力的聚苯乙烯核心组成，周围环绕着一层薄薄的磁铁矿，使其具有顺磁性，并且易于通过磁场进行操作。 SPRI 珠子表面涂有羧基分子，为 DNA 结合提供电荷基团。

作为 SPRI 试剂的组成部分，SPRI 微珠为核酸结合提供了坚实的支持。我们的基因组试剂的两个主要特点有助于 SPRI 微珠发挥其功能：

  • 拥挤剂将特定大小的核酸从溶液中挤出。

  • 结合缓冲液提供盐离子并调节 pH 以促进核酸和珠子的结合。

是什么让 SPRI 微珠试剂不一样

主要特征 好处
顺磁珠 在液体处理机上轻松实现自动化，例如Biomek i 系列自动化工作站，无需离心或过滤
珠子尺寸均匀 高度可重复的结果
带负电的表面 用水溶液洗脱，不使用离液盐
非苯乙烯聚合物表面 低非特异性结合
高表面积质量比 增加结合能力
快速磁响应时间 快速纯化
尺寸优化 自动化应用的低沉降率

基于 SPRI 微珠的试剂工作流程

第一步：SPRI 珠子直接添加到样品反应中。在专有缓冲液存在的情况下，核酸与珠子表面结合。

第二步：使用磁场将微粒从溶液中拉出。污染物被吸出，微粒被清洗。

第三步：纯化的核酸在水性条件下很容易从微粒上洗脱下来，这为下游应用提供了最大的灵活性。

ozbiosciences TEE技术概述

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ozbiosciences TEE技术概述

阳离子脂质（lipoplexes）和聚合物（polyplexes）是常用的非病毒基因递送系统。 Tee 技术（触发内体逃逸）结合并利用了两个实体的特性，以实现极其有效的核酸递送到细胞中。事实上，新一代脂多胺含有亲脂部分（例如脂质）和带电多胺部分（例如阳离子聚合物）。这些部分协同作用，确保紧密的核酸压缩和保护以及内体膜非常有效的去稳定，从而允许在胞质溶胶中释放大量核酸并摄取DNA核。特别关注可生物降解实体的合成。这样，转染试剂不会干扰细胞机制，每次实验都能保持高细胞活力，并避免任何潜在的副作用。

应用

转染效率与高转基因表达水平或高基因沉默以及最小化细胞毒性相结合取决于多个关键参数。这些因素包括细胞类型、质粒 DNA 特征（大小、启动子、报告基因）和纯度、siRNA 序列和纯度、细胞培养条件（含或不含血清的培养基、细胞数量、无污染……）、核酸和试剂的量、转基因测定仅举几例。因此，需要根据待递送的核酸（DNA、siRNA、mRNA、ODN、shRNA 等）和所使用的细胞类型专门设计转染试剂，以达到最佳效率。

脂转染法特别适用于永生化细胞。

Tee 技术的主要优势是：

  • 纳米颗粒中 DNA 的压缩被细胞有效内化

  • 保护核酸免遭核酸酶降解

  • 高效的膜去稳定和 DNA 递送

  • 即使核酸含量低也能高效

  • 生物降解性

如何使用脂转染试剂？

该协议是一个非常简单的过程：

1. 准备 DNA 和试剂溶液。

2. 将它们混合在一起并孵育 20 分钟。

3. 添加到您的单元格中。

乙二醇核酸（GNA）及其应用

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乙二醇核酸（GNA）及其应用

乙二醇核酸 (GNA)，有时也称为甘油核酸，是一种非天然核酸类似物，基于乙二醇单体单元，具有无环三碳糖磷酸主链，每个重复单元包含一个立体中心。立体异构化合物或分子中心由一个中心原子和四个可区分的配体组成。这些配体中任何两个的互换都会产生立体异构体。立体异构体仅在其原子的空间排列上有所不同。

乙二醇核酸 (GNA) 是一种异种核酸 (XNA)，具有 3'-2' 连接的乙二醇磷酸骨架。 GNA 分子包含与核碱基融合的 3 个碳单元。

GNA 的聚合物结构与 DNA 和 RNA 相似，但其糖-磷酸二酯主链的组成不同。与DNA和RNA相比，GNA主链缩短了一个原子。 GNA 单元是一种简单的基于磷酸二酯的低聚物构建块。DNA 和 RNA 具有脱氧核糖和核糖主链，而 GNA 则包含通过磷酸二酯键连接的重复二醇单元。



乙二醇核酸结构

乙二醇核酸（GNA）及其应用

图 1：GNA、DNA 和 RNA 的化学结构。 GNA 双链体的几种晶体结构已在 0.97 至 1.83 Å 分辨率之间确定（Schlegel 等人和 Johnson 等人）。

Ueda和Imoto小组于1971年和1972年合成了外消旋GNA核苷。Holy小组于1974年合成了对映体纯的化合物，Cook等人于1974年合成了对映体纯的化合物。 Wengel 小组于 1995 年和 1999 年合成了第一个 GNA 亚磷酰胺和含有 GNA 的寡核苷酸。几年后，在 2006 年和 2009 年，Meggers 及其同事发表了改进和简化的方法。

为了进一步减少 GNA 亚磷酰胺的合成步骤总数并实现公斤级合成，Alnylam 小组开发了一种程序，允许使用受保护的嘌呤核碱基对映体纯 DMT-缩水甘油进行开环。

与天然对应物不同，GNA 化学性质稳定，且不知道其天然存在。

GNA 可能具有广泛的应用前景，包括：

  • 反义疗法：GNA 与 RNA 形成稳定双链体的能力使其成为设计反义寡核苷酸以抑制特定基因表达的有前途的候选者。

  • 适配体的开发：GNA适配体可以以高亲和力和特异性结合特定靶标。可能的应用包括分子诊断、治疗和生物传感器。

  • 基因治疗：GNA 可以将基因传递到细胞中以达到治疗目的。

  • 人工分子的设计：GNA 可以创建合成 DNA 或 RNA 分子。

  • siRNA：施莱格尔等人。 (2020) 观察到，在引导链的第 6 位具有单个 GNA 取代的 siRNA 双链体设计，并且在序列或化学上没有任何进一步的变化，可以最大限度地减少脱靶失调，而不影响靶点活性。

GNA 非常适合稳定性至关重要的应用，例如反义治疗和适体开发。 反义疗法



反义疗法使用核酸来抑制特定基因的表达。 GNA 是合成用于反义治疗的反义寡核苷酸的有前途的候选者，因为它可以与 RNA 形成稳定的双链体，从而防止靶向 RNA 被翻译成蛋白质。 GNA寡核苷酸可以在体外和体内抑制多种基因的表达。

适体

适体以高亲和力和特异性识别并结合特定靶标。 GNA 适体特别有吸引力，因为它们比天然核酸适体更稳定。因此，GNA 非常适合开发诊断、治疗和生物传感器。 GNA 适体可以结合各种靶标，包括蛋白质、细胞和病毒。

基因治疗

基因疗法使用核酸将基因传递到细胞中以达到治疗目的。 GNA 可以将基因传递到细胞中，因为它很稳定并且可以进行修改以纳入靶向序列。

siRNA

siRNA 双链体设计在引导链的位置 6 处具有单个 GNA 取代，可最大限度地减少脱靶效应，而不影响靶点活性。其他应用



除了上述应用之外，GNA 还可用于各种其他应用，包括：

  • 纳米技术：使用 GNA 可以创建自组装纳米结构。

  • 生物催化：GNA 可以开发具有改进催化活性的新酶。

  • 成像：GNA 可用于开发新的成像探针。

GNA 是具有广泛潜在应用的多功能分子。随着 GNA 研究的继续，科学家可能会发现这些分子的更多应用。

什么是 PicoGreen™ 定量？

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什么是 PicoGreen™ 定量？

PicoGreen dsDNA 定量试剂是一种高灵敏度荧光核酸染色剂，用于定量双链 DNA。PicoGreen 广泛用于分子生物学程序，例如用于亚克隆的 DNA 片段纯化、用于文库生成的 cDNA 合成以及引物测定。

PicoGreen 定量的优点

广泛使用的核酸浓度测量方法是测定 260nm 处的吸光度 (A260)。这被称为吸光度方法，由于测量速度快、不需要试剂盒或试剂的直接定量以及现代微量仪器的宽动态范围而被广泛使用。 荧光方法通常用于由于单链核酸、蛋白质和核苷酸的污染而需要进行特定定量的情况，这些单链核酸、蛋白质和核苷酸可能会影响使用吸光度的总信号。此外，核酸制剂中经常存在的污染物可能会造成干扰，并且无法区分 DNA 和 RNA。

Hoechst（双苯甲亚胺）染料也是敏感的核酸染色剂。然而，该测定的选择性稍高，无法用于 dsDNA，并且在蛋白质存在时不会显示出显着的荧光增强。

PicoGreen dsDNA 定量分析可选择性检测低至 25 pg/ml 的 dsDNA，其中存在的 ssDNA、RNA 和游离核苷酸对荧光强度的影响极小。该检测呈线性跨越三个数量级，并且具有少量的序列依赖性，这意味着可以从一系列来源（例如基因组 DNA、病毒 DNA、小量制备 DNA 或 PCR 扩增产物）精确测量 DNA。

PicoGreen dsDNA 定量非常适合基于 PCR 的测定、DNA 损伤测定、基因组 DNA 定量、微阵列样品、测量复杂混合物中的 dsDNA 以及病毒 DNA 定量。

用于 PicoGreen 定量的 QFX 荧光计

QFX 荧光计是同类仪器中灵敏、重现性好的仪器。对于需要增强特异性或灵敏度的荧光测定应用来说，它是一种强大的解决方案。该仪器能够使用四个用户可选的荧光通道来定量核酸和蛋白质，从而允许使用所有主要的定量测定。QFX 荧光计提供的数据质量以及强大的软件和网络集成，可实现无缝数据处理。屡获殊荣的 DS-11 系列分光光度计/荧光计还集成了完整的荧光功能。

当 QFX 与 DeNovix 的荧光检测结合使用时，它可以定量 0.5 pg/μL 至 4000 ng/μL 范围内的 DNA，是定量降解、污染或低浓度样品的最佳解决方案。

DeNovix 荧光计的主要优点之一是科学家可以选择使用任何制造商的检测方法，包括 PicoGreen dsDNA 或 QuantIT™ 检测方法。

celldata核酸提取试剂盒的主要成分和使用方法

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celldata核酸提取试剂盒的主要成分和使用方法

　　celldata核酸提取试剂盒是一种广泛应用于生物医学研究领域的试剂盒，可以广泛应用于生物医学研究领域。通过使用这种试剂盒，我们可以快速、准确地提取出核酸，为基因组学、分子生物学等研究领域提供有力的支持。
 
　　一、主要成分
 
　　celldata核酸提取试剂盒的主要成分包括裂解液、蛋白酶K、缓冲液、乙醇和其他辅助试剂。
 
　　裂解液是用于裂解细胞和组织的溶液，其中包含能够破坏细胞壁和细胞膜的化学成分。在裂解过程中，细胞和组织被裂解成小的碎片，并且蛋白质、RNA和DNA等生物分子被释放出来。
 
　　蛋白酶K是一种蛋白水解酶，能够降解蛋白质，从而让核酸更容易分离。
 
　　缓冲液则是一种能够维持溶液酸碱度的溶液，乙醇和其他辅助试剂则有助于将DNA和RNA等生物分子沉淀出来。
 
　　二、使用方法
 
　　使用celldata核酸提取试剂盒进行核酸提取的步骤主要包括以下步骤：
 
　　将试剂盒从冰箱中取出，并将所有组分融化。
 
　　将样品在55-60℃下孵育约10分钟，使细胞充分裂解。
 
　　加入200μl的裂解液，充分混合样品，使细胞充分裂解。
 
　　加入2μl蛋白酶K，充分混合样品，使蛋白质降解。
 
　　将样品在55-60℃下孵育约30分钟，使DNA和RNA等生物分子释放出来。
 
　　将样品加入吸附柱中，接着加入500μl缓冲液和乙醇的混合液，充分混合样品。
 
　　将吸附柱离心，去除上清液，并将吸附柱烘干。
 
　　加入50μl洗脱缓冲液，离心后收集上清液即可得到纯净的核酸。