bento:Dipstick DNA 提取试剂盒详情介绍

bento:Dipstick DNA 提取试剂盒详情介绍

Dipstick DNA 提取试剂盒——30 秒内从样本到 PCR。

通过简单的 3 步方案提取并清洁基因组 DNA。 Dipstick DNA 提取试剂盒是一种无需设备的方案,可在 30 秒内完成从样品到 DNA 扩增的过程。该试剂盒包含 100 个试纸以及提取缓冲液 (50 mL) 和洗涤缓冲液 (100 mL) 的溶液,包括足够进行 100 次实验的试剂。

Dipstick DNA 提取试剂盒是提取 DNA 和清除污染物的一种非常快速的方法。所得样品可用于 PCR 测定、测序和 DNA 条形码。 

该方法每个样品的成本较低,为需要清除抑制剂的极少量 DNA 样品提供了一种经济实惠、可靠的替代柱式提取方法。该方法不适用于需要提取基因组 DNA 的总 DNA 的方案。 

细节

  • 快速:从样品到 DNA 扩增只需 30 秒。

  • 单一清洗步骤:快速去除 PCR 污染物 

  • 有效:使用干净的基因组 DNA 获得良好的产量

  • 免设备:无需柱、移液器或离心机 

  • 简单的工作流程:gDNA 提取的三步法

应用领域

核酸纯化用于 PCR、实时定量 PCR (qPCR) 和等温 DNA 扩增方法环介导 DNA 扩增 (LAMP) 和重组酶聚合酶扩增 (RPA)。

规格

推荐使用方式

将 100 μL 提取缓冲液移至 1.5 mL 管中。将 1-2 mm 3样品添加到管中。

用小塑料杵研磨样品,并用额外的 400 μL 提取缓冲液稀释样品。将量油尺在提取物中上下浸 3 次,然后在 1 mL 洗涤缓冲液中浸 5 次。丢弃洗涤缓冲液。按照以下步骤保留试纸以释放 DNA。

将试纸浸入 20–50 µl PCR 反应混合物中 3–15 次(总共约 10 秒)以释放 DNA。 

或者,为了储存 DNA 样本,请将量油尺浸入一管 TE 缓冲液中。如果需要,也可以使用分子级水来储存。

局限性

与使用酶或有毒化学品的DNA 提取和固相核酸提取纯化方法不同,试纸纯化方法提取的 DNA 产量较低,并且不会显着浓缩。这意味着该方法适合基于 PCR 的应用,而不适合限制性酶消化或 PCR 扩增子清理等方法。

由于试纸的捕获体积较小,该方法不适合纯化大量核酸,这意味着它不适合需要大量DNA的基因组测序等方法。对于同一样品的多次 PCR,每次 PCR 都需要单独的试纸。

故障排除

使用过多材料引起的 PCR 抑制是使用该技术失败的最常见原因,其次是使用不足的材料(或含有降解 DNA 的材料)。

如果 PCR 失败,测试每单位质量样品材料的一系列不同比例的提取缓冲液是有用的,以确保样品在每种情况下都可以研磨充分。这可以通过随后在提取缓冲液中稀释粗提取物来从最初失败的提取物中完成。

修改

对于极小的样品(肉眼可见的斑点,甚至在不放大的情况下看不见的样品),只需 50 µL 的提取缓冲液即可用于改善浸渍并避免粗提物的过度稀释。

对于较大的样品,或者预期 DNA 降解或 PCR 抑制剂水平较高的样品,也可以使用增加提取缓冲液的量来提高成功率。

额外的试纸可用于提取、洗涤更多 DNA,并将更多 DNA 从粗提物转移到 PCR 混合物中。然而,由于洗涤缓冲液残留,每个额外的试纸可能会稍微稀释 PCR 混合物,并且可能需要相应地调整 PCR 混合物。

成分

提取缓冲液(20 mM Tris-HCl、25 mM NaCl、2.5 mM EDTA、0.05% SDS、2% PVP-40、pH 8)

洗涤缓冲液(10 mM Tris-HCl,pH 8)

DNA 试纸条(滤纸、蜡)

储存与稳定性

在室温 (18–25 °C) 下保存最多 1 年。如需长期储存,请在 4 ℃ 下储存或在 –20 ℃ 下冷冻。

如果提取缓冲液被冷冻,则应将其在盛有热水(例如刚煮沸的水)的容器中加热,以重新溶解任何沉淀的洗涤剂。

运输条件

在室温下运输。

适用于动物培养细胞/组织的ex kine Pro总蛋白提取试剂盒介绍

适用于动物培养细胞/组织的ex kine Pro总蛋白提取试剂盒介绍

当你从细胞和组织中提取蛋白质时,有没有蛋白质流失的问题?你是否厌倦了繁琐而持久的实验操作步骤?Abbkine的这款新产品适合您!它的神奇之处在于,它不仅可以在1分钟左右完成蛋白质的提取,而且可以获得高浓度和全谱的蛋白质,既快又高质量。它是您提高实验效率的产品!

与传统方法不同的是,柱法不仅可以避免溶液法中蛋白质损失的问题,而且可以简单快速地快速温和地提取不同类型的蛋白质。

适用于动物培养细胞/组织的ex kine Pro总蛋白提取试剂盒介绍

产品优势

  1. 简单快速,7 min即可提取;
  2. 不改变蛋白质谱,高产率(3-20毫克/毫升);
  3. 禁止超声波破碎、煮沸、反复冷冻或解冻;
  4. 可供选择的变性或未变性蛋白质。

实验结果

更高的裂解效率

分离的293细胞悬液用来自D制造商和Abbkine的RIPA缓冲液裂解。细胞裂解物以12000 g离心10分钟。1显示来自D制造商的RIPA裂解缓冲液(弱),2显示来自D制造商的RIPA裂解缓冲液(培养基),3显示来自D制造商的RIPA裂解缓冲液(强),4显示来自Abbkine的RIPA裂解缓冲液。来自D制造商的RIPA缓冲液显示不全裂解,其证据是在试管底部存在明显的不溶性沉淀,而来自Abbkine的RIPA裂解缓冲液显示全裂解。

适用于动物培养细胞/组织的ex kine Pro总蛋白提取试剂盒介绍

高蛋白质产量

使用不同国际品牌和国内品牌的蛋白提取试剂盒产品对小鼠肝组织进行蛋白提取实验,包括变性裂解物RIPA和非变性裂解物的处理。结果如下:

适用于动物培养细胞/组织的ex kine Pro总蛋白提取试剂盒介绍

Abbkine柱法提取蛋白质的结果中,变性裂解获得的蛋白质浓度高达20.06 mg/mL,非变性裂解获得的蛋白质浓度为20.99 mg/mL。

没有蛋白质流失

不同厂家的变性裂解缓冲液和天然缓冲液提取的小鼠肝脏蛋白质谱。提取的蛋白质在10% SDS-PAGE中分离并用考马斯亮蓝染色。1号泳道,记号笔;泳道2,来自制造商的天然缓冲液;第3泳道,来自Abbkine的原生缓冲液;泳道4,来自制造商的变性裂解缓冲液;泳道5,来自B制造商的变性裂解缓冲液;泳道6,来自C制造商的变性裂解缓冲液;泳道7,来自Abbkine的变性裂解缓冲液;泳道8,来自D制造商的变性裂解缓冲液。

适用于动物培养细胞/组织的ex kine Pro总蛋白提取试剂盒介绍

可以提取核蛋白和膜蛋白

从293细胞和小鼠肝脏中提取总蛋白质。第1道,由B制造商的检测试剂盒提取的5 μL蛋白质;泳道2,由B制造商的检测试剂盒提取的2.5 μL蛋白质;第3道,5 μL通过Abbkine检测试剂盒提取的蛋白质;第4泳道,2.5 μL由Abbkine检测试剂盒提取的蛋白质。

适用于动物培养细胞/组织的ex kine Pro总蛋白提取试剂盒介绍

结果表明,Abbkine试剂盒能够更有效地提取核蛋白和膜蛋白,并且在细胞和组织中都可以获得背景清晰的蛋白质条带。

微波提取 DNA 的方法和技术介绍

微波提取 DNA 的方法和技术介绍

微波爆裂细胞是一种有用的 DNA 提取方法,特别是对于廉价、快速和高通量的工作流程?它可以用作主要的细胞裂解过程,生产用于 PCR 的粗 DNA 提取物,或作为更复杂的提取过程中的一个步骤,以改善细胞裂解。

作为一种细胞裂解方法,微波具有快速、廉价、高通量、单管的优点,并且能够在不使用任何可能影响下游过程的化学物质的情况下破裂细胞。它主要通过将样品加热到高温来工作,但也有报道在较低温度下修改细胞膜等机制(例如细菌细胞膜穿孔)。

Goodwin & Lee (1993)发表了一个早期的例子,作者在 CTAB/氯仿提取之前对不同生命领域的多种类群进行了测试

从那时起,研究人员定期针对特定应用发布该方法的变体或实例,通常省略 CTAB/氯仿步骤并使用直接 PCR。以下是一些示例:

⭐人体样本:Taglia 等人。 (2022) 描述了使用微波 DNA 提取法提取人类样本(唾液、血液、精液)的方法

⭐植物样本:von Post 等人。 (2003) 描述了从大麦种子中高通量提取 DNA 进行基因分型,在碱性缓冲液中使用微波,然后用 Tris-HCl 缓冲液中和,每天可以处理数千颗种子

⭐真菌样本:Ferreira 等人。 (1996) 在 PCR 之前使用微波打开干燥的真菌孢子。

⭐动物样本:Firmansya 等人。 (2023) 比较了三种蚊子 DNA 提取方法,发现微波可以产生与其他方法相当的结果,同时是一种更快、更便宜的工作流程。

快速提取超高分子量植物 DNA 的方法和技术

对于任何有兴趣提取高分子量植物基因组 DNA 的人,例如使用牛津纳米孔或 PacBio 测序等长读长技术进行基因组测序,这里有一种快速(与类似方法相比)、简单且经济的方法,适合单-分子测序,由Li 等人描述。 (2020)

我们发现它特别有趣,因为提取涉及细胞壁、质体 DNA 和核膜的仔细、多步骤去除,每个步骤后都有洗涤阶段,而不是单个 DNA 提取步骤然后进行清洁。

提取首先使用渗透缓冲液去除细胞壁以释放完整的细胞核。然后对细胞核进行过滤、洗涤和离心,然后在 CTAB/氯仿提取过程中轻轻裂解。叶绿体和质体 DNA 在这些过程中被去除。多个洗涤步骤有助于去除不需要的化合物,例如次生代谢物和叶绿素,而温和的裂解和缓冲液可最大限度地减少 DNA 碎片。

重要的是,该方法使用含有 Tris-HCl、蔗糖、三氯化亚精胺和四氯化精胺的新型提取缓冲液。精胺和亚精胺是多胺,可稳定和保护真核细胞中的 DNA,吸收自由基并浓缩 DNA,从而以最小的碎片提取 DNA。

另一个关键步骤是选择新鲜的嫩叶,在提取前将其在黑暗中保存长达 48 小时,以尽量减少光合副产物的积累。

在棉花、黑草和草莓中使用这种方法,作者能够在每 10 克新鲜组织中提取 100 微克 gDNA,其中大多数提取的 DNA 大小在 100 kb 到 1000 kb 之间!

如何提取游离DNA?

如何提取游离DNA?

cfDNA 的分离、定量和评估并不是一项简单的任务。它需要敏感且可靠的工作流程。

cfDNA 是一种极其难以处理的样品类型,因为 cfDNA 的产量通常有限且高度碎片化。这就是 MagVigen™ cfDNA 提取试剂盒(货号 #K61003)发挥作用的地方。它可以为 NGS 检测提供更高产量和更高质量的 cfDNA 样本(相对于 Qiagen 试剂盒)。


如何提取游离DNA?

cfDNA 提取工作流程

  1. 1.溶解溶解等离子体样品。

  2. 2.结合和捕获:将 MagVigen™ 纳米颗粒与样品混合。纳米颗粒与 cfDNA 片段结合。

  3. 3.沉淀和重新分散 1:磁性沉淀珠子直至溶液澄清。珠子响应磁力(通过使用磁铁,例如磁力分离架),使结合的材料能够快速有效地与样品的其余部分分离。通过抽吸除去上清液(未结合的材料),剩下的是纳米颗粒结合的目标。然后将珠粒重新分散在洗涤 1 缓冲液中。

  4. 4.转移:将洗涤 1 溶液转移至 1.5 或 2ml 管中。

  5. 5.沉淀和重新分散 2:磁力沉淀,按照步骤 3 去除上清液。这次将珠粒重新分散在 75% 乙醇中。

  6. 6.清洗和沉淀 2,3:使用 75% 乙醇清洗珠粒。将珠子沉淀并除去所有上清液。将珠粒重新分散在 75% 乙醇中。执行此步骤两次。

  7. 7.洗脱:高质量 cfDNA 的最终洗脱。为下游 NGS、PCR 或其他应用做好准备。
    2次洗脱有助于提高cfDNA产量。

使用celldata核酸提取试剂盒进行核酸提取的步骤

使用celldata核酸提取试剂盒进行核酸提取的步骤

  celldata核酸提取试剂盒是一种用于从各种细胞系和组织中提取核酸的实验工具。核酸是细胞内携带遗传信息的分子,包括脱氧核糖核酸(DNA)和核糖核酸(RNA)。正确提取和纯化核酸对于基因表达和遗传研究非常重要。
 
  该试剂盒的优点在于其使用简便,能够高效地从细胞中提取出高质量的核酸。该试剂盒包含一系列试剂和步骤,旨在很大限度地减少核酸降解和污染,以确保提取出的核酸具有高纯度和高得率。
 
  使用celldata核酸提取试剂盒进行核酸提取的步骤包括:
 
  1、细胞裂解:通过加入试剂盒中的细胞裂解液,快速裂解细胞并释放出核酸。
 
  2、蛋白沉淀:加入蛋白沉淀剂,去除细胞中的蛋白质,将核酸从蛋白质中分离出来。
 
  3、酚氯仿抽提:通过酚氯仿抽提,去除核酸中的有机溶剂和蛋白质。
 
  4、氯仿抽提:氯仿抽提进一步去除有机溶剂和其他杂质。
 
  5、乙醇沉淀:加入无水乙醇,使核酸沉淀并从溶液中分离出来。
 
  6、洗涤和干燥:通过洗涤和干燥,去除核酸上的残留有机溶剂和其他杂质。
 
  7、溶解:将核酸溶解在适当的缓冲液中,以便进行后续的分子生物学实验。
 
  该试剂盒适用于多种类型的细胞系和组织,包括哺乳动物、植物、细菌等。此外,试剂盒还具有高灵敏度和快速提取时间的特点,能够满足科研实验室对核酸提取的高要求。
 
  celldata核酸提取试剂盒是一种用于提取高质量核酸的重要工具,适用于多种类型的细胞系和组织。其简便的使用方法和高效地提取效果,为分子生物学研究和基因表达分析提供了强有力的支持。