哪种类型的抗体适合我？

对于大多数实验室来说，正确的决定取决于科学和成本的某种结合。需要考虑的一些问题是：

您需要多少材料以及需要多长时间？

早期探索型项目可能只需要有限数量的材料，或者您的工作流程可能一次仅使用几微克的抗体。利用多克隆生成对于这些情况非常有效。兔子是多克隆抗体的行业标准，因为它具有强大的免疫系统，并且可以根据需要灵活地一次生产多年的抗体。如果您需要预先大量的材料而不是长期使用，那么对较大的动物（例如山羊）进行免疫可能会有所帮助。 

然而，如果您正在尝试生产用于有可能无限期使用的检测的试剂，那么单克隆生产可能更理想。

抗体的活性是否必须始终相同，或者某些批次间的差异在您的系统中是否可行？

通过多克隆生产，动物得到免疫，您的测试物品就成为最终收集到的一切。随着时间的推移，反应可能会发生变化或成熟，但可以通过在检测中使用一致量的抗体来减轻这种情况。 

同时，单克隆生产的明确目的是执行多个筛选步骤，以找到表达适合您的检测反应的抗体的单个细胞系。只要能够保持稳定性，该细胞系就应该能够在您需要时表达抗体。最终一致性的最终保证是对抗体的可变区进行测序并将其生产为重组蛋白。 

该项目有时间限制吗？

多克隆项目平均需要三个月的时间，而分离出具有所需性能的特定单克隆细胞系可能需要六个月的时间。此后生产重组蛋白形式的抗体可能还需要三个月或更长时间。 

您是否已经拥有希望与新生成的材料并行使用的现有抗体？

无论您当前拥有的抗体是多克隆还是单克隆，请选择不同的物种来开发第二抗体。这样您就可以用单独的二抗进行探测并同时查看两种反应性。例如，在鸡、山羊或豚鼠中制备多克隆是最常选择与现有兔抗体并行使用的选项。 

您的预算是多少？

由于固有的成本效益（平均单克隆成本约为平均多克隆成本的六倍），同时多种抗体的高通量需求很可能会利用多克隆生产。然而，对于早期诊断或治疗，以单克隆项目开始可能会更好地满足您的整体需求，并在项目加速方面带来红利。

单克隆抗体应用

抗体是免疫系统中有价值的蛋白质成分，其对目标物质的特异性将其用途扩展到诊断和治疗领域。尽管单克隆和多克隆抗体处于科学创新的前沿，但它们有许多优点和缺点，使它们更适合某些应用而不是其他应用。

在医学进步中，单克隆抗体已成为“个性化治疗”方面的明星。早在 1796 年，著名的爱德华·詹纳 (Edward Jenner) 博士就开始使用间接抗体疗法，从天花病变处取出脓疱液并接种到健康个体，以产生免疫反应。科学家已进一步利用这种自然免疫机制用于治疗和诊断目的。

可以人工制造针对患者体内任何所需疾病病原体或分子的特异性抗体。 1975 年，Kohler 博士和 Milstein 博士确立了 mAb 在人类中的应用，使用杂交细胞（由脾 B 淋巴细胞和骨髓瘤细胞组成）产生大量单一抗体克隆，其特异性已预先选择。

单克隆抗体现已广泛应用于医学、疫苗以及用于输血等目的的血型和组织检测。当用作研究探针时，它们有利于癌症、神经系统和自身免疫性疾病的病理学诊断和研究。它们甚至被用于治疗与年龄相关的黄斑变性、多发性硬化症、哮喘和骨质疏松症。希望通过进一步的研究，单克隆抗体可能在治疗阿尔茨海默病、偏头痛和糖尿病方面发挥重要作用。

在研究、诊断和治疗中使用 mAb 最有利的是，它们与单个表位结合，比 pAb 提供更高的特异性和更高的亲和力。这使得它们在调查或针对翻译后修饰等细节时成为一种资产。此外，它们的批次重现性使它们更适合需要监管批准的科学领域。另一方面，单克隆抗体的设计和制造成本高昂、耗时，并且需要高水平的专业知识。尽管如此，它们在医学中的积极作用也许可以克服这些缺点。

单克隆抗体在肿瘤学中的应用

可以说，单克隆抗体通过在抗体药物缀合物中的使用而改变了肿瘤学领域，其中它们通常与生物活性剂缀合。单克隆抗体的特异性意味着它们可以直接将药物分子或在癌症情况下将细胞毒剂递送至受感染细胞的靶点。抗体-药物偶联物已成功地提供了癌症治疗的替代方案，例如甲氨蝶呤等小分子化疗药物，其目标是健康细胞和癌细胞。目前，许多 ADC 正处于临床试验阶段，其中许多已获得 FDA 批准，例如用于治疗霍奇金淋巴瘤和间变性大细胞淋巴瘤的 Brentuximab vedotin (Adcetris®) 和针对 HER2 的曲妥珠单抗 emtansine (Kadcyla®)。阳性转移性乳腺癌。Biosynth 提供了一种新颖的连接技术，称为 CTAT™技术，用于生产此类抗体-药物缀合物。

我们的连接技术 CTAT™ 使用 CTAT™ 酶将选定的有效负载分子连接到抗体、抗体片段或蛋白质上的特定位点。该有效负载分子可以是治疗药物分子，如珠子、基质或染料。 使用表达质粒将 3-4 个氨基酸的特定序列插入抗体中。然后该序列被 CTAT™ 酶识别并“切割”，最终将该分子与选定的抗体或蛋白质共价连接。

免疫组织化学故障排除

弱染色或无染色

过度染色

高背景

抗原修复技术技巧有哪些？

对于特定抗体，我应该使用哪种抗原修复方法

一些公司测试其抗体的免疫组织化学应用，并将在数据表中包含建议的 抗原修复方法（注意：一些建议的方法不是最佳的）。如果以上都没有给您明确的答案，则需要进行测试。

如何使用各种抗原修复方法对新抗体进行测试

最初，您可能想要测试 HIER 中的两种方法，例如 柠檬酸盐缓冲液 (pH 6)和 Tris-EDTA (pH 9)，以及 PIER 中的一种或两种方法，例如 蛋白酶 K和/或 胰蛋白酶。这应该会给您一个很好的机会获得特定抗体的最佳抗体。

我用各种抗原修复方法测试了我的抗体 ，但仍然没有结果

该抗体可能不适合福尔马林固定、石蜡包埋的组织（某些抗体仅适用于冰冻切片），或者该抗体有问题（过期或损坏），您可能需要改用其他抗体。

在热诱导表位修复 (HIER) 方法中，哪一种比较好

柠檬酸盐缓冲液（pH 6）法是常用的方法之一。一些研究表明 Tris-EDTA (pH 9)或 Tris-HCl (pH 10) 更佳。测试可能是了解哪种抗体适合特定抗体的最佳方法。

使用HIER进行预处理时需要考虑哪些关键因素

(1) 修复液温度应在95℃左右。

(2)孵育时间至少10分钟，一般20分钟左右。

(3) 修复液的pH值取决于您所使用的溶液。

在蛋白水解酶诱导表位修复 (PIER) 方法中，哪一种比较好

蛋白酶 K似乎是常用的一种。浓度、孵育时间和温度可能是需要考虑的更重要的因素。同样，测试是了解哪种抗体适合特定抗体的最佳方法。

使用PIER进行预处理时需要考虑哪些关键因素

(1) 酶的浓度通常为 0.05-0.1%，具体取决于组织和固定的类型。

(2)孵育时间可为5-30分钟，常用10-15分钟。

(3)孵化温度通常为37 ℃。

冰冻切片是否需要进行抗原修复：新鲜冰冻切片的免疫染色不需要进行抗原修复。因为抗原修复是破坏福尔马林固定形成的交联，将新鲜冰冻切片切片并用冰冷的丙酮固定5-10分钟。