抗体验证的优越策略：封闭肽验证

据报道，每年因劣质抗体造成的生物和医学研究损失约为8亿美元。此外，实验结果不一致和抗体重复性差的后果 是无法估计的。

国际抗体验证工作组（IWGAV）于2016年9月发表题为《 自然方法 中 抗体验证的建议》的文章 ，强调抗体验证应根据目标蛋白的相应应用和背景进行。作者提出了抗体验证的五个概念支柱：（i）遗传策略，（ii）正交策略，（iii）独立抗体策略，（iv）标记蛋白的表达，以及（v）免疫捕获后进行质谱分析。多发性硬化症）。

这五种方法各有其优缺点以及适用条件。例如，遗传策略通过比较细胞或组织中的相关信号来评估抗体特异性，其中使用 CRISPR-Cas9 或 RNA 干扰 (RNAi) 敲除或敲低目标基因与野生型 (WT) 对照的信号。尽管这种方法很简单，但未能击倒或敲除目标基因将大大损害该方法的实验可行性。

免疫捕获后进行质谱 (MS) 的方法可以识别与纯化抗体直接相互作用的蛋白质， 以及与目标蛋白质间接相互作用的其他蛋白质。 然而，这种方法依赖于昂贵的科学仪器和实验材料。并非每个实验室都能负担得起这些设备。

在 Affinity Biotech，抗体通过 独立抗体验证进行验证。为此，使用几种抗体来识别靶蛋白上的不同表位。具有最高特异性的抗体是通过包括比较和定量分析的适当程序确定的。虽然大多数抗体的检测应该没有问题，但对于检测特异性要求较高的抗体，特别是那些位点特异性的磷酸化抗体，仍然不够。

结合多年的抗体研发和生产经验，Affinity Biotech采用了更合适的抗体验证策略： 封闭 肽验证。

封闭肽(抗原)与抗体一一对应。 。这是最原始的材料，只有原厂才能提供。

首先，我们对封闭肽进行 MS 分析，以确保肽序列准确。

在蛋白质印迹分析中，肽会阻断目标抗体的信号。没有封闭肽的泳道用作对照。封闭肽将与靶蛋白竞争结合位点，从而在封闭基团中不留下特异性条带。

该策略目前用于验证我们的抗体。它对于磷抗体的生产至关重要，因为它确保了磷抗体的位点特异性。换句话说，磷酸化抗体只能识别相应位点的磷酸化靶蛋白。非磷酸化的目标蛋白或其他位点磷酸化的目标蛋白将不会被识别。

举个例子。在 Phospho-MSK1 (Ser211) Antibody（货号 AF7155）的蛋白质印迹验证中，泳道 1 和泳道 3 中分别添加了非磷酸化阻断肽和磷酸化阻断肽。 2号车道没有被封闭。结果显示，使用磷酸化肽封闭目标蛋白后，没有检测到目的条带。

Signosis：细胞因子 ELISA 试剂盒介绍

细胞因子和生长因子是信号分子，在细胞生长、分化、基因表达、迁移、免疫和炎症等许多生物过程中发挥关键作用。这些信号的破坏可能导致多种疾病，包括关节炎、肝病、炎症性肠病、心脏相关疾病和癌症。 Signosis 提供了多种工具来分析一种特定的细胞因子或生长因子，或同时监测多种细胞因子或生长因子。

原则：

在此测定中，测试样品最初与固相捕获抗体反应，导致细胞因子与孔结合。然后清洗孔以去除未结合的蛋白质，并添加生物素连接的抗体以与细胞因子结合。洗去未结合的抗体后，添加链霉亲和素-HRP 缀合物，与抗体结合的细胞因子形成复合物。

对于比色试剂盒，添加 HRP 底物 TMB，当检测到 HRP 连接抗体时，TMB 会形成蓝色。然后用终止溶液终止反应，颜色从蓝色变为黄色。每孔中的细胞因子浓度与其颜色强度成正比，可以通过在酶标仪中测量其 450 nm (OD450) 的光密度来定量。

对于化学发光试剂盒，用 HRP 发光底物检测板。发光在微孔板发光计上以相对光单位 (RLU) 报告。每种特定细胞因子的表达水平与发光强度成正比。

比色 ELISA 图

长处：

高品质和竞争力的价格。

可以同时分析多个样品。

一对针对特定细胞因子的高选择性抗体。全部集成在一个带有预涂层 96 孔板的系统中。

该检测适用于任何生物液体材料和细胞裂解液，例如血清、脑脊液 (CSF)、尿液和组织匀浆。

大鼠细胞因子 ELISA 试剂盒