Cmctag Alapca 纳米抗体试剂
简要描述： Cmctag Alapca 纳米抗体试剂 CMCTAG于20012年在威斯康星州密尔沃基成立，是免疫学和细胞生物学试剂的。CMCTAG提供世界上抗体选择之一，以及用于生命科学研究和诊断的原代细胞。 Cmctag销售 Cmctag产品供应 GFP-Catch-Mag™ 抗 GFP 羊驼纳米抗体偶联磁珠
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供货周期
一个月
应用领域
医疗卫生,化工,生物产业,制药
Cmctag Alapca 纳米抗体试剂
规格： 5 mL（200 次反应） 浓度： 10 mg/ml
由于检测细胞内维多利亚水母绿色荧光蛋白 (GFP) 仅需要紫外线或蓝光照射，因此它为监测活细胞中的基因表达和蛋白质定位提供了好的手段。
抗 GFP 磁珠是一种羊驼单域抗体，通过酰肼键共价连接到磁珠上。 该抗体在融合蛋白的 N 端、C 端和内部位置结合 GFP。
测试应用 免疫沉淀（IP） 共免疫沉淀（Co-IP）， 染色质免疫沉淀（ChIP） RNA结合蛋白免疫沉淀（RIP） 酶测定 质谱法 亲和纯化 在IP中，25µL的珠悬浮液用于约500µL的粗总细胞裂解物溶液。 最佳稀释度/浓度应由最终用户确定。
特性 免疫原 这种纳米抗体是用带有 GFP 蛋白的羊驼制成的。 形成 磁珠共轭抗 GFP 纳米抗体，该产品在 10 mM PBS、pH 7.4 和作为防腐剂的 0.02% (w/v) 叠氮hua钠中提供。 储存说明 储存于 4 °C。不要冻结
该抗体为纳米抗体，来自aplaca，其优点如下：
• 快速、可靠和高效的一步免疫沉淀
• 即用型、高稳定性、高亲和力
• 下游 WB 无重抗体链和轻抗体链干扰
• 在苛刻的洗涤条件下稳定
• 适用于下游质谱、CoIP、ChIP、RIP、蛋白质纯化等
• 适用于以下样本：哺乳动物、植物、细菌、酵母、昆虫等。
结构图
结合能力
~1mg GFP 蛋白/ml 珠悬浮液
珠子直径
~ 40 微米
哺乳动物细胞裂解物中 GFP 融合蛋白的免疫沉淀 (IP/CoIP) 方案
该方案旨在对 GFP 标记的融合蛋白进行免疫沉淀，以通过蛋白质免疫印迹或活性测定进行分析。
溶液和试剂
1X 细胞裂解缓冲液：50 mM Tris (pH 7.5)、150 mM NaCl、1 mM EDTA、1 mM EGTA、1% Triton X-100。 建议在使用前添加 1 mM PMSF。
1X 洗涤缓冲液：TBS（50 mM Tris HCl，150 mM NaCl，pH 7.5）
5X SDS 上样缓冲液
1. 准备细胞裂解物
1. 要在非变性条件下收获细胞，去除培养基并用冰冷的 PBS 冲洗细胞一次。 去除 PBS 并向每个板（10 cm，106-107 个细胞）中加入 0.5 mL-1mL 1X 冰冷细胞裂解缓冲液（添加蛋白酶抑制剂混合物和 PMSF），并将板在冰上孵育 30-40 分钟，4 °旋转摄氏度。
2. 从平板上刮下裂解的细胞并转移到微量离心管中。 继续冰上。
3. 在冰上对样品进行超声处理 3 次，每次 5 秒（可选步骤）。
4. 4°C、14,000 xg 微量离心 10 分钟，将上清液转移到新管中。 如有必要，可将裂解物储存在 –80°C 下。
注意： 如果目的蛋白是核蛋白，请使用RIPA裂解液裂解细胞，并加入PIC、1mM PMSF、2.5mM Mgcl2和1mg/ml DNase I。
2. 平衡珠子
1. 颠倒产品管或轻轻上下吹打以重悬珠子。 不要涡旋珠子。
2. 吸取 25 µL 珠浆到 EP 管（1.5 mL）中，然后加入 1 mL 冰冷的洗涤缓冲液。 用手轻轻摇晃 1-2 分钟。 不要涡旋珠子。
3、磁选60秒。
4. 弃去上清，重复洗涤 3 次。
3. 免疫沉淀
1. 取 500 μL 细胞裂解液，加入 25 μL 抗体偶联磁珠悬液，4°C 孵育 1-3 小时或 4°C 过夜。
4. 清洗蛋白质-纳米抗体-珠复合体
注意：如果研究了 Co-IP 相互作用的蛋白质，请减少洗涤次数，并降低洗涤缓冲液的离子强度。
加入 1.0 mL 的 Wash Buffer 并悬浮珠子复合物，磁选，然后弃去上清液。 重复上述步骤至少四次。
5. 下游分析的洗脱
GFP 融合蛋白的洗脱-根据蛋白质特性或进一步用途推荐两种洗脱方法：
选项 A：天然洗脱
在酸性条件下用 0.2 M 甘氨酸 (pH 2.5) 洗脱。 这是一种快速有效的洗脱方法。 用中和缓冲液（1 M Tris，pH 10.4）中和洗脱的蛋白质可能有助于保持其活性。 中和缓冲液需要预先放入收集管中。
注意： 需提前做初步实验，确定中和甘氨酸（PH 2.5）需要多少中和缓冲液
选项 B：SDS-PAGE 的变性洗脱
在凝胶电泳和免疫印迹的变性条件下用样品上样缓冲液洗脱。
A：用 0.2 M 甘氨酸 (pH 2.5) 洗脱 – 该过程应在室温下进行。 注意：不要将珠子留在该缓冲液中超过 20 分钟。
1. 向每个样品和对照珠复合物中加入 50 µL 0.2 M 甘氨酸 (pH 2.5)。
2. 在 4°C 下轻轻摇动或在旋转器上孵育样品和对照 5-10 分钟。
3. 将试管放入磁力分离器中以收集珠子。 将上清液转移到含有 25-35 μL 中和缓冲液的新管中。 小心不要转移任何珠子。
4. 重复步骤 1-3 以提高洗脱效率，将洗脱液集中在同一管中或通过不同管收集洗脱液。
6. 如需立即使用，请将洗脱液储存在 2-8 °C。 储存在 –20 °C 以进行长期储存。
B：用 SDS-PAGE 上样缓冲液洗脱
1. 用 30 µL 1X SDS 样品上样缓冲液重悬每个样品（6 µL 5X SDS 样品上样缓冲液可以添加到 24 µL 细胞裂解缓冲液中）。 涡流。
2. 在 95 – 100°C 下将样品管和对照管煮沸 10 分钟。
3. 将试管放入磁力分离器中以收集珠子。 将上清液转移到新管中。 样品和对照已准备好加载到 SDS-PAGE 上，并使用抗 GFP 或针对融合蛋白的特异性抗体进行免疫印迹。
上海金畔生物科技有限公司 是一家专注于分子生物学、细胞生物学、细菌学、遗传学、免疫学、生物化学、蛋白质学、细胞治疗、临床应用等领域，以销售为主的生物技术公司。销售的产品涉及，细胞株和菌株、胎牛血清、生化试剂、ELISA试剂盒、抗体和抗原、细胞因子、技术服务、实验耗材和消耗品、仪器设备等。
Engibody Biotechnology，Inc被Engibody Biotechnology，Inc.收购。Engibody 是用于信号转导途径的试剂产品的。我们为免疫学，肿瘤学，细胞生物学，干细胞生物学和细胞凋亡提供抗体，抑制剂和试剂的全面创新的产品组合。Engibody 通常首先将关键试剂推向市场， 然后 开发了800多种用于抗体和抑制剂的产品。
除抗体外， Engibody 还提供用于细胞因子，生长因子和原代细胞的多种试剂。我们为生物系统分析提供完整的解决方案。
Engibody 已成长为所有实验室试剂（包括抑制剂，抗体和细胞因子）的可靠供应商。 Engibody 近建造了一个全新的先进设施，以适应其不断增长的产品线。
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