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F-DH5aChemically Competent Cell 大肠杆菌化学感受态细胞

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F-DH5aChemically Competent Cell 大肠杆菌化学感受态细胞

货号： MF2348-10000UL 品牌： Jinpan 标签： 分子生物学

描述

F-DH5a Chemically Competent Cell 大肠杆菌化学感受态细胞

产品标签：

F-DH5a；F-TOP10；DH10B；JM109；EPI400；羧苄青霉素钠；卡那霉素；链霉素；

 

产品订购：更大包装或产品技术问题，请来电/在线咨询，电话：021-50837765 。

货号 产品名称 规格 价格（元）  
MF2348-2000UL    F-DH5a Chemically Competent Cell 大肠杆菌化学感受态细胞  20×100μl      280
MF2348-10000UL F-DH5a Chemically Competent Cell 大肠杆菌化学感受态细胞 100×100μl 1280

【好消息】：见我司的感受态细胞促销活动。买感受态细胞得京东卡，发表使用评论，赢红包，双重惊喜，行动起来啦。

 

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货号（规格）

MF2348-2000UL    

MF2348-10000UL   
MF2348-A F-DH5a Competent Cell 20×100μl 100×100μl
MF2348-B Control Vector puC19, 10pg/μl     10μl 10μl

 

菌株描述

DH5α是实验室最常用的一种质粒克隆用菌株，其φ80lacZ△M15基因的产物可与载体编码的 β-半乳糖苷酶氨基端实现α互补，可用于蓝白斑筛选。recA1和endA1的突变有利于克隆DNA的稳定和高纯度质粒DNA的提取。特别适用于高效的质粒DNA克隆并能保证高拷贝质粒的稳定复制。

DH5a菌株基因型：F-φ80 lac ZΔM15 Δ(lacZYA-arg F) U169 endA1 recA1 hsdR17(rk-,mk+) supE44λ- thi-1 gyrA96 relA1 phoA

 

产品描述

本品是大肠杆菌DH5a菌株经特殊工艺制作所得的快速转化感受态细胞，无需42℃热激，37℃孵育步骤，只需冰浴，10min内能完成转化、涂板步骤。经pUC19质粒检测转化效率可达1~5×108 cfu/μg DNA。且在-80℃能稳定保存几个月转化效率不发生改变。

 

保存与运输条件：

保存：-80℃保存，六个月有效。

运输：干冰运输。

 

注意事项

1）   感受态细胞必须用干冰运输。感受态细胞应在-80℃保存，不可反复冻融且放置时间过长，否则会减低感受态细胞的转化效率。

2）   最好在冰上融化感受态细胞。在冰上融化后立即加入目标DNA，不可在冰上放置时间过长。长时间存放会降低转化效率，混入目的DNA时需轻柔操作。

3）   进行转化操作时，需在相应温度及无菌条件下进行。

4）   为防止转化实验不成功，可保留部分连接反应液以重新转化，将损失降到最低。

5）   产品包装内含质粒pUC19 DNA(10pg/μl)，供对照实验用。

6）   为了您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作。

使用方法【所有操作均在无菌条件的标准下进行】

一、  快速转化操作（10min）

1.1    提前15min将用到的筛选培养平板拿到37℃预热。

1.2    取F-DH5a感受态细胞从-80℃取出，迅速插入冰中，5min后待菌块融化，加入目的DNA（质粒或连接产物），并用手拨打管底轻轻混匀，冰中静置5min。

1.3    用移液枪将感受态细胞-DNA混合物转移到37℃预热的LB筛选培养平板上，用无菌的涂布棒将细胞均匀涂开，表面无水渍。

1.4    将平板倒置于37℃过夜培养。如果进行蓝白斑筛选，至少培养15h。

【注意】：F-DH5a感受态细胞涂含氨苄或羧苄筛选培养平板时效率最高，若涂卡那霉素或其他抗生素平板，转化效率会下降（由于没有孵育步骤，卡那霉素等对菌体毒性较大）。若要提高卡那霉素或其他抗性质粒的转化效率，按照快速热激转化操作。

二、  快速热激转化操作（25min，能提高转化效率）

2.1    取F-DH5a感受态细胞从-80℃取出，迅速插入冰中，5min后待菌块融化，加入目的DNA（质粒或连接产物），并用手拨打管底轻轻混匀，冰中静置5min。

2.2    42℃水浴热激45s，迅速放回冰上并静置2min。 此过程不要摇动离心管。

2.3    加入700μl 无菌的LB培养基（不含抗生素），混匀后置于37℃ 摇床，200 rpm振荡培养10min。

2.4    用移液枪将感受态细胞-DNA混合物转移到37℃预热的LB培养平板（含抗生素）上，用无菌的涂布棒将细胞均匀涂开，表面无水渍。

2.5    将平板倒置于37℃过夜培养。如果进行蓝白斑筛选，至少培养15h。

【注意】：当质粒＞7kb，通过以下热激转化操作：取F-DH5a感受态细胞从-80℃取出，迅速插入冰中，5min后待菌块融化，加入目的DNA（质粒或连接产物），并用手拨打管底轻轻混匀，冰中静置20min。

42℃水浴热激45s，迅速放回冰上并静置2min。加入700μl 无菌的LB培养基（不含抗生素），混匀后置于37℃ 摇床，200 rpm振荡培养30min。之后涂板。

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JP0021-10G Chloramphenicol, USP Grade氯霉素 10g
JP0018-10G Ampicillin, Sodium Salt氨苄青霉素钠 10g
JP0017-5G Carbenicillin, Disodium Salt羧苄青霉素二钠盐 5g
JP0019-10G Kanamycin Sulfate硫酸卡那霉素 10g
JP0014-1G Rifampicin, USP Grade利福平 1g

 

 

 

规格信息

品牌：

Jinpan
CAS:

N/A
规格：

100×100μl
货期：

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F-DH5aChemically Competent Cell 大肠杆菌化学感受态细胞

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F-DH5aChemically Competent Cell 大肠杆菌化学感受态细胞

货号： MF2348-2000UL 品牌： Jinpan 标签： 分子生物学

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F-DH5a Chemically Competent Cell 大肠杆菌化学感受态细胞

产品标签：

F-DH5a；F-TOP10；DH10B；JM109；EPI400；羧苄青霉素钠；卡那霉素；链霉素；

 

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货号 产品名称 规格 价格（元）  
MF2348-2000UL    F-DH5a Chemically Competent Cell 大肠杆菌化学感受态细胞  20×100μl      280
MF2348-10000UL F-DH5a Chemically Competent Cell 大肠杆菌化学感受态细胞 100×100μl 1280

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MF2348-2000UL    

MF2348-10000UL   
MF2348-A F-DH5a Competent Cell 20×100μl 100×100μl
MF2348-B Control Vector puC19, 10pg/μl     10μl 10μl

 

菌株描述

DH5α是实验室最常用的一种质粒克隆用菌株，其φ80lacZ△M15基因的产物可与载体编码的 β-半乳糖苷酶氨基端实现α互补，可用于蓝白斑筛选。recA1和endA1的突变有利于克隆DNA的稳定和高纯度质粒DNA的提取。特别适用于高效的质粒DNA克隆并能保证高拷贝质粒的稳定复制。

DH5a菌株基因型：F-φ80 lac ZΔM15 Δ(lacZYA-arg F) U169 endA1 recA1 hsdR17(rk-,mk+) supE44λ- thi-1 gyrA96 relA1 phoA

 

产品描述

本品是大肠杆菌DH5a菌株经特殊工艺制作所得的快速转化感受态细胞，无需42℃热激，37℃孵育步骤，只需冰浴，10min内能完成转化、涂板步骤。经pUC19质粒检测转化效率可达1~5×108 cfu/μg DNA。且在-80℃能稳定保存几个月转化效率不发生改变。

 

保存与运输条件：

保存：-80℃保存，六个月有效。

运输：干冰运输。

 

注意事项

1）   感受态细胞必须用干冰运输。感受态细胞应在-80℃保存，不可反复冻融且放置时间过长，否则会减低感受态细胞的转化效率。

2）   最好在冰上融化感受态细胞。在冰上融化后立即加入目标DNA，不可在冰上放置时间过长。长时间存放会降低转化效率，混入目的DNA时需轻柔操作。

3）   进行转化操作时，需在相应温度及无菌条件下进行。

4）   为防止转化实验不成功，可保留部分连接反应液以重新转化，将损失降到最低。

5）   产品包装内含质粒pUC19 DNA(10pg/μl)，供对照实验用。

6）   为了您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作。

使用方法【所有操作均在无菌条件的标准下进行】

一、  快速转化操作（10min）

1.1    提前15min将用到的筛选培养平板拿到37℃预热。

1.2    取F-DH5a感受态细胞从-80℃取出，迅速插入冰中，5min后待菌块融化，加入目的DNA（质粒或连接产物），并用手拨打管底轻轻混匀，冰中静置5min。

1.3    用移液枪将感受态细胞-DNA混合物转移到37℃预热的LB筛选培养平板上，用无菌的涂布棒将细胞均匀涂开，表面无水渍。

1.4    将平板倒置于37℃过夜培养。如果进行蓝白斑筛选，至少培养15h。

【注意】：F-DH5a感受态细胞涂含氨苄或羧苄筛选培养平板时效率最高，若涂卡那霉素或其他抗生素平板，转化效率会下降（由于没有孵育步骤，卡那霉素等对菌体毒性较大）。若要提高卡那霉素或其他抗性质粒的转化效率，按照快速热激转化操作。

二、  快速热激转化操作（25min，能提高转化效率）

2.1    取F-DH5a感受态细胞从-80℃取出，迅速插入冰中，5min后待菌块融化，加入目的DNA（质粒或连接产物），并用手拨打管底轻轻混匀，冰中静置5min。

2.2    42℃水浴热激45s，迅速放回冰上并静置2min。 此过程不要摇动离心管。

2.3    加入700μl 无菌的LB培养基（不含抗生素），混匀后置于37℃ 摇床，200 rpm振荡培养10min。

2.4    用移液枪将感受态细胞-DNA混合物转移到37℃预热的LB培养平板（含抗生素）上，用无菌的涂布棒将细胞均匀涂开，表面无水渍。

2.5    将平板倒置于37℃过夜培养。如果进行蓝白斑筛选，至少培养15h。

【注意】：当质粒＞7kb，通过以下热激转化操作：取F-DH5a感受态细胞从-80℃取出，迅速插入冰中，5min后待菌块融化，加入目的DNA（质粒或连接产物），并用手拨打管底轻轻混匀，冰中静置20min。

42℃水浴热激45s，迅速放回冰上并静置2min。加入700μl 无菌的LB培养基（不含抗生素），混匀后置于37℃ 摇床，200 rpm振荡培养30min。之后涂板。

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JP0018-10G Ampicillin, Sodium Salt氨苄青霉素钠 10g
JP0017-5G Carbenicillin, Disodium Salt羧苄青霉素二钠盐 5g
JP0019-10G Kanamycin Sulfate硫酸卡那霉素 10g
JP0014-1G Rifampicin, USP Grade利福平 1g

 

 

 

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20×100μl
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OrigamiB(DE3) Chemically Competent Cell 大肠杆菌化学感受态细胞

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OrigamiB(DE3) Chemically Competent Cell 大肠杆菌化学感受态细胞

货号： MF2346-5000UL 品牌： Jinpan 标签： 分子生物学, 感受态细胞

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OrigamiB(DE3) Chemically Competent Cell

大肠杆菌化学感受态细胞

 

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  货号                           产品名称   规格                 价格（元）             
  MF2346-1000UL                    OrigamiB(DE3) Chemically Competent Cell化学感受态细胞        10×100μl   396
  MF2346-5000UL   OrigamiB(DE3) Chemically Competent Cell化学感受态细胞     50×100μl   1696

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   组分编号                  

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                                  货号（规格）
MF2346-1000UL                       MF2346-5000UL                    
   MF2346-A OrigamiB(DE3) Competent Cell                   10×100μl 50×100μl
   MF2346-B Control Vector puC19,10pg/μl 10μl 10μl

菌株描述

OrigamiB菌株与原始菌Origami一样，包含突变的硫氧还蛋白还原酶（Thioredoxin Reductase, trxB）和谷胱甘肽还原酶（glutathione reductase,gor），表达主要还原途径的两个关键酶，有利于形成正确折叠的含二硫键的蛋白，增强蛋白的可溶性。该菌株包含BL21的lon和ompT缺失，能提高蛋白稳定性。

DE3命名表明该菌株染色体上整合λ噬菌体DE3溶原体（携带lacUV5启动子调控的T7 RNA聚合酶基因）。这种菌株适用于目的基因克隆在pET载体上的蛋白生产，由IPTG诱导表达。

OrigamiB(DE3)菌株具有卡那霉素和四环素抗性，因此不适合与仅能用卡那霉素或四环素筛选的质粒联用。

OrigamiB(DE3)菌株基因型：F- ompT hsdSB(rB- mB-) gal dcm lacY1 ahpC (DE3) gor522:: Tn10 trxB (KanR, TetR)

产品描述

本品是大肠杆菌OrigamiB(DE3)菌株经特殊工艺制作所得的感受态细胞，可用于DNA的热击转化。经pUC19质粒检测转化效率可达108 cfu/μg DNA。且在-80℃能稳定保存几个月转化效率不发生改变。

 

保存与运输条件：

保存：-80℃保存，6个月有效。

运输：干冰运输。

 

注意事项

  1. 感受态细胞必须用干冰运输。感受态细胞应在-80℃保存，不可反复冻融且放置时间过长，否则会减低感受态细胞的转化效率。
  2. 最好在冰上融化感受态细胞。
  3. 进行转化操作时，需在相应温度及无菌条件下进行。
  4. 为防止转化实验不成功，可保留部分连接反应液以重新转化，将损失降到最低。
  5. 产品包装内含质粒pUC19 DNA(10pg/μl)，供对照实验用。
  6. OrigamiB(DE3)菌株具有卡那霉素和四环素抗性，不能用于具此抗性质粒的表达。
  7. 诱导时，IPTG浓度范围可选：0.1~2mM。
  8. 为了得到足量的蛋白，需就最佳诱导时间、温度、IPTG浓度进行优化。
  9. 为了您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作。

 

使用方法【所有操作均在无菌条件的标准下进行】

  1. 从-80℃冰箱取出取感受态细胞，迅速置于冰浴中，5min后待菌块融化，加入目的DNA，用手轻弹管底轻轻混匀，冰浴静置25min。
  2. 42℃水浴热激45s，迅速将离心管转移到冰浴中，冰上静置2min。此过程不要摇动离心管。
  3. 向每个离心管中加700 μl无菌的LB培养基（不含抗生素），混匀后置于37℃摇床，200 rpm振荡培养60min，目的使质粒上相关的抗性标记基因表达，使菌体复苏。
  4. 低速离心收菌（比如5000rpm，1min），留取100μl左右上清，用枪轻轻吹打重悬菌块，之后加到所选质粒筛选抗生素的LB固体琼脂培养基上，用无菌的涂布棒将细胞均匀涂开，将平板置于室温（或37℃）直至液体被吸收，倒置培养，37℃培养过夜。【注意】：

    a）涂布用量可根据具体实验调整。若转化的DNA总量较多，可不用离心，直接取少量转化产物涂布平板；反之，若转化的DNA总量较少，则通过离心（4,000 rpm，2min）后吸除部分培养液，悬浮菌体后将其涂布于一个平板中。

    b）新制备的固体培养基不易涂干，可将平板正置于37℃直至液体被吸收后再倒置培养。

    c）涂布剩余的菌液可置于4℃保存，如果次日的转化菌落数过少，可以将剩下的菌液再涂布新培养基进行培养。

 

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附录I 蛋白诱导步骤（仅作参考）

1）从新鲜涂布平板上挑取一单克隆，转移到含相应抗生素的3ml LB液体培养基内。

2）37℃，200rpm摇菌培养过液。

3）将步骤2）中过夜培养的菌液吸取0.5ml接种到含相应抗生素的50ml LB液体培养基内（建议使用500ml三角瓶培养）。

4）37℃，150rpm摇菌培养直至OD600达到0.6~0.8（建议0.6，约2.5h）。

5）【可选】用移液枪吸取1ml培养物到干净的离心管内，置于冰上直至用于凝胶分析或保存在-20℃。这是非诱导的对照样本。

5）加入IPTG使其终浓度为1mM。目的蛋白的最佳诱导时间可能在2~16h，依蛋白而异。

6）37℃，120rpm培养2~4h。为了确定目的蛋白的最佳诱导时间，建议作一个时间周期优化实验，范围从2~16h。

7）将培养物冰浴10min。4℃，5,000 x g离心10min收集菌株。

8）吸掉上清，将沉淀保存在-20℃（也能保存在更低的温度）。

IPTG母液（1M）配制

称量2.38g IPTG（Mw: 238.30）溶于适量去离子水，充分溶解后，调整终体积到10ml，并过滤除菌，即得到1M ITPG母液。

 

 

规格信息

品牌：

Jinpan
CAS:

N/A
规格：

50×100μl
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BL21-AI Chemically Competent Cell 大肠杆菌化学感受态细胞

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BL21-AI Chemically Competent Cell 大肠杆菌化学感受态细胞

货号： MF2336-5000UL 品牌： Jinpan 标签： 分子生物学

描述

BL21-AI Chemically Competent Cell 大肠杆菌化学感受态细胞

 

产品标签：

BL21 Star (DE3) pLysS；Rosetta (DE3)；BL21 (DE3)；表达感受态细胞；pET表达载体；IPTG诱导；非毒性蛋白表达；

 

产品订购：更大包装或产品技术问题，请来电/在线咨询，电话：021-50837765 。

货号 产品名称 规格                价格（元）   
MF2336-1000UL     BL21-AI Chemically Competent Cell 大肠杆菌化学感受态细胞      10×100μl 396
MF2336-5000UL BL21-AI Chemically Competent Cell 大肠杆菌化学感受态细胞 50×100μl 1696

【好消息】：见我司的感受态细胞促销活动。买感受态细胞得京东卡，发表使用评论，赢红包，双重惊喜，行动起来啦。

【好消息】：见我司整理的BL21系列表达感受态细胞常见问题。 

 

产品组分：

组分编号 组分名称

货号（规格）
MF2336-1000UL       MF2336-5000UL     
MF2336-A      BL21-AI Competent Cell 10×100μl 50×100μl
MF2336-B Control Plasmid puC19, 10pg/μl     10μl 10μl

 

菌株描述

BL21-AI菌株来源于BL21菌株，是一种大肠杆菌B/r菌株（E. Coli B/r）。含有一个染色体整合的编码T7 RNA聚合酶（T7 RNAP）的基因到araBAD操纵子的araB位点，通过操控araBAD启动子来调节T7 RNA聚合酶的表达。此菌株已经敲除araB基因。tetA基因赋予四环素抗性，允许用四环素来验证菌株。

由于T7 RNAP基因位于araBAD操纵子的araB位点，因此，可通过糖类（L-阿拉伯糖和葡萄糖）来调节T7 RNA聚合酶的表达。在培养基内加入L-阿拉伯糖，能够诱导araBAD启动子下游T7 RNA聚合酶表达，进而促进目的蛋白表达；而在培养基加入葡萄糖，能够抑制araBAD启动子下游T7 RNA聚合酶表达，进而抑制目的蛋白表达。BL21-AI菌株适用于任何以T7启动子为基础的表达载体，进行高水平的重组蛋白表达。由于T7 RNA聚合酶的表达水平能被高度调控，该菌株特别适用于表达对其他BL21菌株有毒或抑制生长的蛋白。

BL21-AI菌株缺乏lon蛋白酶和外膜蛋白酶OmpT的基因，这两种酶的缺失能够降低外源重组蛋白在菌体内的降解，从而增加了蛋白表达量。最终，BL21-AI菌株表达所得的重组蛋白产量与其他BL21菌株相近。

BL21-AI菌株基因型：F-ompT hsdSB (rB-mB-) gal dcm araB::T7RNAP-tetA

需求条件

建议在以下几个情况下选择BL21-AI菌株来表达您的目的基因：

a）   正在使用T7启动子为基础的表达载体（高拷贝或低拷贝皆可）

b）   当使用其他BL21菌株发现生长抑制现象（比如毒性）

c）   正要表达一种已知的毒性蛋白

产品描述

本品是大肠杆菌BL21-AI菌株经特殊工艺制作所得的感受态细胞，可用于DNA的热激转化。特别适合任何以T7启动子为基础的表达载体系统，且要求严格调控和大量表达毒性蛋白的应用。经pUC19质粒检测转化效率可达108 cfu/μg DNA。且在-80℃能稳定保存几个月转化效率不发生改变。

 

保存与运输条件：

保存：-80℃保存，六个月有效。

运输：干冰运输。

 

注意事项

1）   感受态细胞必须用干冰运输。感受态细胞应在-80℃保存，不可反复冻融且放置时间过长，否则会减低感受态细胞的转化效率。

2）   最好在冰上融化感受态细胞。

3）   进行转化操作时，需在相应温度及无菌条件下进行。

4）   为防止转化实验不成功，可保留部分连接反应液以重新转化，将损失降到最低。

5）   产品包装内含质粒pUC19 DNA(10pg/μl)，供对照实验用。

6）   为了您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作。

使用方法【所有操作均在无菌条件的标准下进行】

1）  从-80℃冰箱取出取感受态细胞，迅速置于冰浴中，5min后待菌块融化，加入目的DNA，用手轻弹管底轻轻混匀，冰浴静置25min。

2）   42℃热激45s，迅速将离心管转移到冰浴中，冰上静置2-3min。此过程不要摇动离心管。

3）   向每个离心管中加700 μl无菌的SOC或LB培养基（不含抗生素），混匀后置于37℃ 摇床，200 rpm振荡培养60min，目的使质粒上相关的抗性标记基因表达，使菌体复苏。

4）   低速离心收菌（比如4000rpm，2min），留取100μl左右上清，用枪轻轻吹打重悬菌块，之后加到含相应抗生素的SOC或LB固体琼脂培养基上，用无菌的涂布棒将细胞均匀涂开，将平板置于室温（或37℃）直至液体被吸收，倒置培养，37℃培养12-16h。

【注意】：

a）涂布用量可根据具体实验调整。若转化的DNA总量较多，可不用离心，直接取少量转化产物涂布平板；反之，若转化的DNA总量较少，则通过离心（4,000 rpm，2min）后吸除部分培养液，悬浮菌体后将其涂布于一个平板中。

b）新制备的固体培养基不易涂干，可将平板正置于37℃直至液体被吸收后再倒置培养。

c）涂布剩余的菌液可置于4℃保存，如果次日的转化菌落数过少，可以将剩下的菌液再涂布新培养基进行培养。

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货号 名称 规格
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JP0019-10G Kanamycin Sulfate硫酸卡那霉素 10g
JP0014-1G Rifampicin, USP Grade利福平 1g

 

 

 

规格信息

品牌：

Jinpan
CAS:

N/A
规格：

50×100μl
货期：

咨询客服

BL21-AI Chemically Competent Cell 大肠杆菌化学感受态细胞

发表于由

BL21-AI Chemically Competent Cell 大肠杆菌化学感受态细胞

货号： MF2336-1000UL 品牌： Jinpan 标签： 分子生物学

描述

BL21-AI Chemically Competent Cell 大肠杆菌化学感受态细胞

 

产品标签：

BL21 Star (DE3) pLysS；Rosetta (DE3)；BL21 (DE3)；表达感受态细胞；pET表达载体；IPTG诱导；非毒性蛋白表达；

 

产品订购：更大包装或产品技术问题，请来电/在线咨询，电话：021-50837765 。

货号 产品名称 规格                价格（元）   
MF2336-1000UL     BL21-AI Chemically Competent Cell 大肠杆菌化学感受态细胞      10×100μl 396
MF2336-5000UL BL21-AI Chemically Competent Cell 大肠杆菌化学感受态细胞 50×100μl 1696

【好消息】：见我司的感受态细胞促销活动。买感受态细胞得京东卡，发表使用评论，赢红包，双重惊喜，行动起来啦。

【好消息】：见我司整理的BL21系列表达感受态细胞常见问题。 

 

产品组分：

组分编号 组分名称

货号（规格）
MF2336-1000UL       MF2336-5000UL     
MF2336-A      BL21-AI Competent Cell 10×100μl 50×100μl
MF2336-B Control Plasmid puC19, 10pg/μl     10μl 10μl

 

菌株描述

BL21-AI菌株来源于BL21菌株，是一种大肠杆菌B/r菌株（E. Coli B/r）。含有一个染色体整合的编码T7 RNA聚合酶（T7 RNAP）的基因到araBAD操纵子的araB位点，通过操控araBAD启动子来调节T7 RNA聚合酶的表达。此菌株已经敲除araB基因。tetA基因赋予四环素抗性，允许用四环素来验证菌株。

由于T7 RNAP基因位于araBAD操纵子的araB位点，因此，可通过糖类（L-阿拉伯糖和葡萄糖）来调节T7 RNA聚合酶的表达。在培养基内加入L-阿拉伯糖，能够诱导araBAD启动子下游T7 RNA聚合酶表达，进而促进目的蛋白表达；而在培养基加入葡萄糖，能够抑制araBAD启动子下游T7 RNA聚合酶表达，进而抑制目的蛋白表达。BL21-AI菌株适用于任何以T7启动子为基础的表达载体，进行高水平的重组蛋白表达。由于T7 RNA聚合酶的表达水平能被高度调控，该菌株特别适用于表达对其他BL21菌株有毒或抑制生长的蛋白。

BL21-AI菌株缺乏lon蛋白酶和外膜蛋白酶OmpT的基因，这两种酶的缺失能够降低外源重组蛋白在菌体内的降解，从而增加了蛋白表达量。最终，BL21-AI菌株表达所得的重组蛋白产量与其他BL21菌株相近。

BL21-AI菌株基因型：F-ompT hsdSB (rB-mB-) gal dcm araB::T7RNAP-tetA

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a）   正在使用T7启动子为基础的表达载体（高拷贝或低拷贝皆可）

b）   当使用其他BL21菌株发现生长抑制现象（比如毒性）

c）   正要表达一种已知的毒性蛋白

产品描述

本品是大肠杆菌BL21-AI菌株经特殊工艺制作所得的感受态细胞，可用于DNA的热激转化。特别适合任何以T7启动子为基础的表达载体系统，且要求严格调控和大量表达毒性蛋白的应用。经pUC19质粒检测转化效率可达108 cfu/μg DNA。且在-80℃能稳定保存几个月转化效率不发生改变。

 

保存与运输条件：

保存：-80℃保存，六个月有效。

运输：干冰运输。

 

注意事项

1）   感受态细胞必须用干冰运输。感受态细胞应在-80℃保存，不可反复冻融且放置时间过长，否则会减低感受态细胞的转化效率。

2）   最好在冰上融化感受态细胞。

3）   进行转化操作时，需在相应温度及无菌条件下进行。

4）   为防止转化实验不成功，可保留部分连接反应液以重新转化，将损失降到最低。

5）   产品包装内含质粒pUC19 DNA(10pg/μl)，供对照实验用。

6）   为了您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作。

使用方法【所有操作均在无菌条件的标准下进行】

1）  从-80℃冰箱取出取感受态细胞，迅速置于冰浴中，5min后待菌块融化，加入目的DNA，用手轻弹管底轻轻混匀，冰浴静置25min。

2）   42℃热激45s，迅速将离心管转移到冰浴中，冰上静置2-3min。此过程不要摇动离心管。

3）   向每个离心管中加700 μl无菌的SOC或LB培养基（不含抗生素），混匀后置于37℃ 摇床，200 rpm振荡培养60min，目的使质粒上相关的抗性标记基因表达，使菌体复苏。

4）   低速离心收菌（比如4000rpm，2min），留取100μl左右上清，用枪轻轻吹打重悬菌块，之后加到含相应抗生素的SOC或LB固体琼脂培养基上，用无菌的涂布棒将细胞均匀涂开，将平板置于室温（或37℃）直至液体被吸收，倒置培养，37℃培养12-16h。

【注意】：

a）涂布用量可根据具体实验调整。若转化的DNA总量较多，可不用离心，直接取少量转化产物涂布平板；反之，若转化的DNA总量较少，则通过离心（4,000 rpm，2min）后吸除部分培养液，悬浮菌体后将其涂布于一个平板中。

b）新制备的固体培养基不易涂干，可将平板正置于37℃直至液体被吸收后再倒置培养。

c）涂布剩余的菌液可置于4℃保存，如果次日的转化菌落数过少，可以将剩下的菌液再涂布新培养基进行培养。

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JP0018-10G Ampicillin, Sodium Salt氨苄青霉素钠 10g
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JP0014-1G Rifampicin, USP Grade利福平 1g

 

 

 

规格信息

品牌：

Jinpan
CAS:

N/A
规格：

10×100μl
货期：

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