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lumiprobe 近红外 (NIR) 荧光染料概述

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lumiprobe 近红外 (NIR) 荧光染料概述

大多数荧光团在光谱的可见光或紫外部分工作，但近红外 (NIR) 区域对于荧光检测和成像非常有前景。

在红外光下，在微阵列和组织样本上观察到的背景荧光要少得多。这使得近红外染料成为低背景和高信噪比至关重要的情况的理想选择。

生物组织具有 700 nm 以上透明度的“近红外窗口”（实际值取决于组织类型）。这允许以实时、非破坏性的方式对生物体进行深度成像。用近红外染料标记生物分子（肽、蛋白质或其他）可以对其进行跟踪并研究该分子在生物体中的分布。这种类型的成像是生命科学和药物设计的工具。

Lumiprobe 提供两种近红外荧光团：Cy7和Cy7.5。

该染料属于花青族，具有高消光系数。内部聚次甲基链包含环己烷部分以增加刚性和量子产率。与母体结构相比，荧光量子产率提高了 20%。

  CY7 CY7.5
激发波长 750纳米 788纳米
λ max ex处消光 199,000 223,000
发射波长 773纳米 808纳米
斯托克斯位移 23纳米 20纳米
可用性 NHS 酯（胺反应性）
NHS 酯，水溶性（胺反应性）
马来酰亚胺（硫醇反应性）
马来酰亚胺，水溶性（硫醇反应性）
酰肼（羰
基反应性） 伯胺
伯胺，水溶性
羧酸
羧酸，水溶性叠
氮化物（用于 сlick 化学）
水溶性叠氮化物（用于сlick 化学）
炔
烃（用于 сlick 化学） 炔烃，水溶性（用于 сlick 化学）
四嗪（用于 сlick 化学）
DBCO（用于 сlick 化学）		 NHS 酯（胺反应性）
NHS 酯，水溶性（胺反应性）
马来酰亚胺（硫醇反应性）

酰肼（羰基反应性）
伯胺

羧酸
羧酸，水溶性 叠氮化
物（用于 сlick 化学）叠
氮化物，水溶性（用于сlick 化学）
炔烃（用于 сlick 化学）
水溶性炔烃（用于 сlick 化学）
四嗪（用于 сlick 化学）



琥珀酰亚胺酯适用于标记各种生物分子（例如蛋白质和肽）中的氨基。叠氮化物和炔烃是用于先进、高效点击化学反应的活性染料。我们还建议通过合成后点击化学用染料叠氮化物标记炔基化寡核苷酸来制备近红外染料标记的寡核苷酸。

D-荧光素钠盐 CAS 103404-75-7介绍

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D-荧光素钠盐 CAS 103404-75-7介绍

D-荧光素钠盐 CAS 103404-75-7

荧光素是受欢迎和通用的生物发光基质。萤火虫荧光素酶/荧光素生物发光系统存在于萤火虫和其他几种甲虫中。荧光素酶通过二氧杂环丁酮中间体氧化ATP激活的荧光素。萤火虫荧光素酶通过依赖ATP的荧光素氧化产生光。该反应产生的560 nm化学发光在几秒钟内达到峰值，当荧光素和ATP过量时，光输出与荧光素酶活性成正比。萤火虫荧光素酶长期以来一直与抗体结合，并在使用荧光素作为检测底物的免疫测定中用作标记。与HRP和碱性磷酸酶相比，荧光素酶对化学修饰的耐受性较低。这种酶的一个特别优点是，除了其高灵敏度之外，哺乳动物组织中的内源性荧光素酶活性很低。荧光素酶的另一个重要用途是在卫生监测领域。荧光素酶/荧光素系统可用于检测污染，因为所有活生物体都需要ATP来产生发光。这种ATP生物发光的主要应用是通过测试食品加工厂的表面来确定设备或产品是否受到污染，从而确保质量。

D-荧光素钠盐 CAS 103404-75-7介绍

使用荧光核酸染色剂 LUCS 13 对活细胞进行染色

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使用荧光核酸染色剂 LUCS 13 对活细胞进行染色

LUCS 13 是一种可渗透细胞的核酸染料，在与核酸结合后呈现绿色荧光。该染料具有高荧光产量，且结构与 SYTO™13 染料相同。

LUCS 13 用于对活的和死的真核细胞以及革兰氏阳性和革兰氏阴性细菌中的 DNA 和 RNA 进行染色。染料被 488 nm 的蓝色激光激发。其荧光发射在荧光素通道中检测到，与 DNA 结合时峰值为 509 nm，与 RNA 结合时峰值为 514 nm。

该染料可用于同时标记细胞不可渗透的核标记物（例如 YoDi-3），以使用荧光显微镜和流式细胞术评估细胞活力。

协议

确切的方案取决于具体的细胞类型和实验任务。一般来说，可以描述如下：

  1. 准备 50 µM LUCS 13 储备溶液。为此，将 990 µl 去离子水添加到 10 µl 5 mM LUCS 13 溶液中。储备液可以等分并冷冻以供长期储存。

  2. 要制备 1 µM LUCS 13 工作溶液，请将 20 µl 50 µM LUCS13 库存添加到 980 µl PBS 中。

  3. 以合适的方式小心地从生长表面去除贴壁细胞。对于悬浮细胞，从下一点开始工作。

  4. 用冷 PBS（pH 7.4）清洗细胞一次。 300 g离心 5 分钟获得种子细胞 。

  5. 将细胞在 1 ml 1 μM LUCS 13 工作溶液中于 37°C 孵育 30 分钟。

  6. 300 g离心 5 分钟去除染料溶液 。

  7. 用 PBS 清洗细胞一次。

  8. （可选）如有必要，可以将细胞在含 3.7% 甲醛的 PBS 中固定 15 分钟，用 PBS 洗涤，然后用另一种染色剂重新染色。

重要的

  • 处理 LUCS 13 溶液时请使用塑料瓶，因为稀释的染料可能会粘在玻璃上。

  • 使用无磷酸盐缓冲液（例如盐水中的 15 mM HEPES）可获得更明亮的染色结果。

  • 在开始实验之前，测试几种染料浓度范围从 10 nM 到 5 µM，以确定最佳的染料稀释度。染色结果受许多因素影响：生长培养基、细胞密度、其他细胞类型的存在、染色持续时间等。

squarix探针和染料——RPA产品信息

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squarix探针和染料——RPA产品信息

RDA 用作生物样品中 Fe 2+的选择性高量子产率荧光标记物。它对铁的亲和力比 RPA 略低。膜渗透性化合物的阳离子荧光团允许通过例如荧光显微镜进行观察，并且基于线粒体的负膜电位，尤其靶向活细胞的线粒体。在无细胞系统中，RDA 荧光（λ最大598 nm）会被 Fe 2+离子以化学计量（3:1）强烈猝灭。

squarix探针和染料——RPA产品信息

A:无细胞系统中 RPA 的吸收和发射光谱（“简单缓冲溶液“(SBS) 中的 20 µM RPA：2mM 抗坏血酸、0.15% SDS 和 10mM Tris/HCl，pH 8.2）。

B:Fe 2+对“SBS”中 RPA (20-45 µM) 荧光的影响：Fe 2+是随着硫酸亚铁铵/脱水柠檬酸三钠盐 (FAS) 浓度的增加而从添加的储备溶液 (1mM) 中添加的。含有 20mM 抗坏血酸，与培养基混合。 2 分钟后，RPA/Fe 2+复合物形成后，测定含有已知浓度的 RPA 和 Fe 2+的培养基部分的荧光（以任意单位 au 表示）。零荧光等于不含染料的介质的荧光。

RDA 选择性地积聚在细胞（例如培养的肝细胞）的线粒体中(1,2)。当铁以透膜形式添加到细胞中时，线粒体内 RDA 荧光会被猝灭。当添加膜渗透性过渡金属螯合剂吡哆醛异烟酰腙和 1,10-菲咯啉后，实验性地减少线粒体可螯合铁时，它会增加。 RDA 荧光的增加允许使用异位校准对活细胞中的线粒体可螯合铁进行特异性定量(1)。

Application in a cellular system

RDA 可以按照 Lit 中的描述使用。 1. 例如，在盖玻片上培养的活细胞与 RDA（0.01-10 µM，由 DMSO 中的 10 µM 或 1-5 mM 储备溶液制备）在 HBSS（“Hanks 平衡“）中于 37°C 孵育 10-20 分钟盐溶液“）。随后用无染料 HBSS 洗涤细胞 3 次。为了避免 RPA 与腔室结合并改善线粒体负载，应在 RPA 负载后将细胞转移到第二个（无指示剂）Pentz 腔室并再孵育 15 分钟。 37°C。现在应在 37°C 下用适当的培养基（例如用于肝细胞的 HBBS 或 L-15 培养基）覆盖细胞。使用例如定量激光扫描显微镜测定线粒体内RPA荧光。 RPA 的红色荧光在 λ exc 处被激发。= 543 nm 并通过 λ exc 附近的长通滤波器收集。 = 601 纳米。定量和定性测量的扫描参数取决于实验所用的显微镜系统。测量开始后 5-10 分钟，可通过添加 FeCl 3 /8-羟基喹啉复合物 (5-15 µM) 或膜渗透铁螯合剂，例如 PIH（吡哆醛异烟酰腙，2mM）来控制线粒体内可螯合铁的水平。 ) 或 1,10-菲咯啉 (2 mM)。对于对照测量，平行培养物加载含有一些荧光团的铁不敏感对照 RPAC（罗丹明 B-[（菲-9-基）氨基羰基]苄酯）。应使用与上述相同的负载条件。

化学名称：Rhodamine B-[(1,10-phenanthroline-5-yl)-aminocarbonyl]benzyl ester (RPA)-

分子分子式:C 48 H 44 BrN 5 O 4

分子量 [克/摩尔]:834.7981 (79.9045+754.8935)

最大吸收:λ max (log ε) = 562 nm (4.95), 510-535

最大排放量:最大波长601 nm

稳定:< 4 o C，干燥避光保存

外貌:紫色固体

纯度:97%+（1 H NMR，500 MHz）

淬火化学计量:RPA/Fe 2+ : 3:1 [摩尔/摩尔]

体外毒性:无毒

evrogen新产品推荐：远红荧光蛋白Katushka2S

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evrogen新产品推荐：远红荧光蛋白Katushka2S

Katushka2S 是下一代远红荧光蛋白 TurboFP635 (Katushka) [Luker等人。 , 2015;谢尔博等人。，2009；古斯卡娅等人。，2011]。与 TurboFP635 和许多其他可用的远红荧光蛋白相比，Katushka2S 表现出最高的亮度、最快的成熟和好信噪比：E2-Crimson、mNeptune、mNeptune2.5、mCardinal、TurboFP650 和NirFP，2015]，这使其成为活体组织内可视化的优选蛋白质。 Katushka2S 也可以与 iRFP720 一起使用用于双色全身成像。

– 超亮远红荧光
– 高信噪比，快速成熟
– 推荐用于全身成像

主要性能

分子量，kDa 26
多肽长度，aa 235
荧光色 远红
激发最大值，纳米 第588章
发射最大值，纳米 第633章
量子产率 0.44
消光系数，M -1 cm -1 67 000
亮度* 29.5
亮度，EGFP 的百分比 89
酸度 5.4
结构 二聚体
聚合 不
37°C 的成熟率 超级快
光稳定性，宽场（秒） 72
细胞毒性 没有观察到
主要优点 超亮且快速成熟的远红荧光蛋白；高 pH 稳定性
可能的限制 二聚体，融合生成的适用性有限，中等光稳定性

* 亮度是消光系数和量子产率的乘积除以 1000。

evrogen新产品推荐：远红荧光蛋白Katushka2S

Katushka2S 归一化激发（细线）和发射（粗线）光谱。