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细胞周期
| 品名 | 货号 | 用途 |
|---|---|---|
| 细胞周期检测试剂盒-PI/RNase Staining | C543 | 细胞周期（PI通道流式检测） |
| Cell Cycle Assay Solution Blue试剂 | C549 | 细胞周期（ Pacific Blue 通道流式检测） |
| Cell Cycle Assay Solution Deep Red试剂 | C548 | 细胞周期（APC-Cy7通道流式检测） |
产品名称：Pall 颇尔PTFE膜的AcroPak 300囊式过滤器
产品型号：12082
产品报价：13
产品特点：Pall 颇尔PTFE膜的AcroPak 300囊式过滤器，美国颇尔公司（Pall Corporation）涉及领域Z广的专门从事过滤、分离和纯化的公司。颇尔的技术专长，产品系列和网络使其成为该市场的者。
Pall 颇尔PTFE膜的AcroPak 300囊式过滤器
订购信息
| 货号 |
说明 |
包装 |
| 12082 | 0.2μm，软管接口 | 3个/包装 |
Pall 颇尔PTFE膜的AcroPak 300囊式过滤器
产品简介
用于气流流速较高的通风
应用
技术规格
滤材：在聚丙烯衬底上的聚四氟乙烯
外罩：聚丙烯
密封技术：热接合
有效过滤面积：300cm2
长度：10.5cm(4.1in.),带有刺管
带有通风孔的外罩直径：6.7cm(2.6in.)
不带通风孔的外罩直径：5.3cm(2.1in.)
典型纳污量：<6mL
入口/出口连接：软管接口,直径为6.4-12.7mm(1/4-3/8in.)
zui大操作温度：在2.1bar(219kPa,30psi)时为60oC(140oF)
推荐的完整性检测zui小泡点：60% IPA/40%水(v:v), 1.2bar(120kPa,18psi)
zui大操作压力：在环境温度下为4.1bar(410kPa, 60psi)
典型液体流速(1cp)：0.8L/min/0.1bar(10kPa,0.6L/min/psi)
典型空气流速：32L/min/0.07bar(7kPa,1psi)
细菌截留：改良的ASTM F838-83的B.diminuta批样本的zui低截留率为10000000cfu/cm2。
内毒素等级：使用鲎变形细胞溶菌液(LAL)检测时<0.25EU/mL
生物安全性：通过了美国药典(USP)生物反应检测“体内”
消毒方式
如果需要，可以在使用前121-123oC(250-253oF)的温度下高压灭菌，时间zui多为20分钟，只能进行一次灭菌操作。在每次高压灭菌后和使用前都要进行完整性检测。
美国Whatman 沃特曼 囊式滤器 Polycap 75 HD
Whatman产品是由高质量的原料、在干净的室内条件下使用ISO控制生产流程制造而成的。我们有各种孔径和过滤材质供您选择，而且我们所有的囊式过滤器不含任何添加剂保证了样品的纯度。在任何应用中大多数可靠的表现使我们相信美国Whatman 沃特曼 囊式滤器 Polycap 75 HD 具有广泛的适应性。
无论您是进行研究、试生产、过滤大容量或难过滤的样品，Whatman 总有一套过滤方法满足您的需求。
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囊式滤器选择指南
产品介绍：
Polycap HD
Polycap HD(高强度)是一种精心设计的产品，由于它的原料和生产方法使得它有很高的过滤效率和极好的纯度。
Polycap HD在过程应用中展示了它的优点，它的性能合适在粗过滤和zui终的微孔滤膜之间起作用。
特性和优点
l 100%聚丙烯过滤材质、支持物和外壳，可用于大范围的溶
液、pH和温度
l 高流速和高保留力
l 结构材料通过FDA允许用于食品接触
l 可在121°C下高压灭菌20分钟
l 手动螺旋阀门可排出上游的气体，亦可用于注射或进样口
l 有0.2、0.45、1.0、5.0和10.0μm孔径和多种接口
l ISO质量体系下在10000级清洁室条件下生产
应用
l 缓冲液
l 清洁空气和气体设备
l 化妆品和个人保健用品
l 食品和饮料
l 一般细颗粒过滤
l 墨水和染料
l 制药溶液
l 感光乳胶和化妆水
l RO/UF/MF预滤膜
l 试剂
l 样品制备
l 半导体和磁性介质
l 溶剂
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特点：
● 高特异性核仁定位
● 可通过共聚焦定量细胞成像仪进行定量分析
● 两种颜色可供选择
活动进行中
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产品概述
Nucleolus Bright是一种选择性与RNA结合并产生荧光的小分子荧光染料，只需在固定细胞中加入试剂即可成像。虽然Nucleolus Bright也会和在核仁以外存在的RNA反应，不过核仁作为细胞内RNA最多存在rRNA的产生场所，荧光尤为强烈。
成像时，通过与核染色试剂DAPI[产品货号：D523]共染色，可以更清楚地确认核仁。有关详细信息，请参阅使用说明书中的实验例。
原理
核仁是不带膜的核内结构体，也是核糖体生物合成的起点。核仁中存在许多核糖体RNA(rRNA)，并且是 rRNA基因转录以及合成加工的场所。由于蛋白质合成的早期阶段在核仁中进行，因此核仁的变化被认为与多种细胞活动有关。核仁的形态变化已被公认为判断癌症的指标之一，近年来也有一系列的报道论述了核仁应激与DNA损伤、自噬、病毒感染和细胞衰老的关系，因此核仁在这些方面的研究也受到越来越多的关注。
核仁染色试剂的比较
| 最大激发波长 | 最大发射波长 | MeOH固定后染色 | PFA固定后染色 | 活细胞染色 | |
| Nucleolus Bright Green | 513 nm | 538 nm | 〇 | 〇 | △※ |
| Nucleolus Bright Red | 537 nm | 605 nm | 〇 | 〇 | △※ |
※希望通过活细胞进行评价时，请咨询公司技术支持。
产品特点
特点1：清晰地观察核仁
用4％ PFA或MeOH固定HeLa细胞后，用PBS洗净后用1％ Triton X-100进行破膜处理，加入Nucleolus Bright Green或Red和核染色
试剂 (DAPI) 并培养，然后用共聚焦荧光显微镜观察。
结果证实DAPI染色的细胞核内 (蓝色)有数个核仁存在。
<染色条件>
・PFA 固定
细胞在4％PFA室温下浸泡5 min，再用Triton X-100在室温下浸泡20 min，加入各种荧光探针后培养5 min。
・MeOH 固定
细胞在冷的MeOH中浸泡1 min，再用Triton X-100在室温下浸泡20 min，加入各种荧光探针后培养5 min。
| <检测条件> |
Nucleolus Bright Green Ex: 488 nm / Em: 500-600 nm
Nucleolus Bright Red Ex: 561 nm / Em: 565-650 nm
DAPI Ex: 405 nm / Em: 450-495 nm
特点2：核仁定位
用4％PFA固定WI-38细胞后，用抗Fibrillarin一抗和荧光标记的二抗免疫染色，并加入Nucleolus Bright Green或Red和核染色试剂
(DAPI) ，培养后，用落射式荧光显微镜 (Keyence，BZ-X710) 观察。
结果证实Nucleolus Bright Green和Nucleolus Bright Red与核仁标记物(Dense Fibrillar Component)的染色部位一致。
＜检测条件＞
Nucleolus Bright Green：Ex: 450-490 nm / Em: 500-550 nm
Nucleolus Bright Red：Ex: 533-548 nm / Em: 570-640 nm
DAPI：Ex: 340-380 nm / Em: 435-485 nm
Anti-Fibrillarin 抗体：Ex: 590-650 nm / Em: 668-733 nm
特点:3：与核仁相关的领域的报告示例
| 相关领域 | 概要 | 文献 | ||
| 评论(衰老） | 关于各种参与细胞功能的核仁， 包括与癌症和早老症的已知关系、 特别是关于衰老的核仁功能。 |
V. Tiku, A. Antebi, “Nucleolar Function in Lifespan Regulation.”, Trends Cell Biol., 2018, 28(8), 662. | ||
| 细胞衰老 | 由于与抑制衰老有关的蛋白质缺损、 核仁数量的减少和核仁总面积的加。 |
H. Tanaka, S. Takebayashi, A. Sakamoto, T. Igata, Y. Nakatsu, N. Saitoh, S. Hino, M. Nakao, “The SETD8/PR-Set7 Methyltransferase Functions as a Barrier to Prevent Senescence-Associated Metabolic Remodeling.”, Cell Rep.,2017, 18(9), 2148. | ||
| 细胞衰老 | 由于rRNA加工因子的枯竭导致 核仁肥大化， 同时SA-βGal和p16表达增加。 |
K. Nishimura, T. Kumazawa, T. Kuroda, N. Katagiri, M. Tsuchiya, N. Goto, R. Furumai, A. Murayama, J. Yanagisawa, K. Kimura, “Perturbation of ribosome biogenesis drives cells into senescence through 5S RNP-mediated p53 activation.”, Cell Rep., 2015, 10(8), 1310. | ||
| 自噬 | 通过抑制RNA聚合酶的转录， 确认自噬的诱导和核仁的形状变化。 |
N. Katagiri, T. Kuroda, H. Kishimoto, Y. Hayashi, T. Kumazawa and K. Kimura, “The nucleolar protein nucleophosmin is essential for autophagy induced by inhibiting Pol I transcription”, Scientific Reports, 2015, 8903, DOI: 10.1038/srep08903. | ||
衰老细胞的评价例
将不同传代数的WI-38细胞用4％ PFA固定后，用PBS洗净并用1％ Triton X-100进行破膜处理，然后加入Nucleolus Bright Green或
Red和核染色试剂 (DAPI)，培养后用共聚焦荧光显微镜观察。
结果证实第3代细胞 (P3) 中的一个细胞核内存在多个核仁，而第18代细胞 (P18) 中核仁变大并成为一体。
<染色条件>
细胞在4％ PFA室温下浸泡5 min，再用Triton X-100在室温下浸泡20 min，加入各种荧光探针后培养5 min。
＜检测条件＞
Nucleolus Bright Green Ex: 488 nm / Em: 500-600 nm
Nucleolus Bright Red Ex: 561 nm / Em: 565-650 nm
DAPI Ex: 405 nm / Em: 450-495 nm
产品实验例
实验例：通过共聚焦定量细胞成像仪进行定量分析
使用共聚焦定量细胞成像仪 (横河电机株式会社 CQ1)对衰老细胞的定量分析。
将传代数不同的WI-38细胞固定后，分别用Nucleolus Bright Green和DAPI染色核仁，并用共聚焦定量细胞成像仪进行定量分析
通过图像对核仁进行分析
用共聚焦定量细胞成像仪在405nm处拍摄细胞核图像，在488nm处拍摄核仁体像，通过分析软件Cell Pathfinder识别各个细胞核内的核仁，并计算出其数量。
横河电机CQ1拍摄条件
使用板：96孔板
物镜：40倍
激发波长：
405nm（DAPI）：蓝色
488nm（Nucleolus Bright Green）：绿色
视野：16视野
<解析图像>
蓝框线：核
红框线：核仁
核仁数分析
在传代数较多的细胞中，得到了1个细胞核中只有1个核仁的比例增加，而2个及以上核仁的比例减少的结果。该结果与下述论文中衰老的WI-38细胞中核仁数的减少(论文中的Table3)*1，以及通过SETD8敲低诱导衰老的细胞核仁的变化(论文中的Figure4D)*2得到了相同的结果。
*1 P. M. Bemiller, L. Lee, “Nucleolar changes in senescing WI-38 cells”, Mech. Ageing Dev., 1978, 8 , 417.
*2 H. Tanaka, S. Takebayashi, A. Sakamoto, T. Igata, Y. Nakatsu, N. Saitoh, S. Hino, M. Nakao, “The SETD8/PR-Set7 Methyltransferase Functions as a Barrier to Prevent Senescence-Associated Metabolic Remodeling.”, Cell Rep., 2017, 18(9), 2148.
荧光特性
常见问题Q&A
| Q1：可以染色活细胞吗？ |
| A1：本试剂建议用于固定细胞染色，不建议用活细胞染色。如果您想用活细胞染色，请联系我们的技术支持。 |
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