MCI Buffer L-8500-PF-1 MCI缓冲溶液 L-8500-PF-1 品牌:Mitsubishi Chem CAS No.:


品牌:Mitsubishi Chem
CAS No.:
储存条件:2-10℃
纯度:
产品编号

(生产商编号)

等级 规格 运输包装 零售价(RMB) 库存情况 参考值

601-07473

1 L×10 咨询


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同仁化学死细胞标记试剂–Blue货号:C555 死细胞标记试剂–Blue| 日本DOJINDO

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死细胞标记试剂–Blue货号:C555
死细胞标记试剂–Blue
Dead Cell Makeup Blue – Higher Retention than PI
商品信息
储存条件:0-5°C,避光
运输条件:常温运输

特点:

 

● 染料不会从死细胞中泄漏

● 储备溶液可以冷冻保存6个月

● 有两种不同的颜色可供选择

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C555/C556宣传资料

选择规格:
100tests

现货

死细胞标记试剂–Blue货号:C555 死细胞标记试剂–Blue

死细胞标记试剂–Blue货号:C555 死细胞标记试剂–Blue

产品概述
技术信息
DMSO 储存溶液的保质期
与现有 PI 方法的比较
实验案例: 诱导 MOLT-4 细胞衰竭后的 PD-1 检测
常见问题Q&A

产品概述

该试剂可与细胞表面和细胞内的蛋白质共价结合,对膜受损的死亡细胞进行强染色。此外,染色剂在固定和渗透细胞后不会渗漏。染色后,活细胞和死细胞的荧光强度差异显著,通过流式细胞仪分析,死细胞很容易区分和排除。

技术信息

区分和排除死细胞对使用流式细胞仪 (FCM) 获得准确数据至关重要,近年来,这一过程已成为发表论文时越来越常见的要求。碘化丙啶(PI)可用于区分死细胞,但细胞膜的固定或渗透会导致 PI 从细胞中渗出,从而难以获得准确的数据。这种试剂具有与细胞表面和细胞内部蛋白质共价结合的特性,因此即使细胞被固定或渗透后,染料也不会渗出。此外,染色后活细胞和死细胞的荧光强度差异很大,因此 FCM 可以轻松区分死细胞并将其排除在分析之外。

死细胞标记试剂–Blue货号:C555 死细胞标记试剂–Blue

DMSO 储存溶液的保质期

本产品的 DMSO 储备溶液可冷冻保存六个月。

死细胞标记试剂–Blue货号:C555 死细胞标记试剂–Blue

与现有 PI 方法的比较

死细胞标记试剂–Blue货号:C555 死细胞标记试剂–Blue

 

 

实验案例: 诱导 MOLT-4 细胞衰竭后的 PD-1 检测

MOLT-4 细胞在含有 Ionomycin(500 ng/ml)和 PMA(Phorbol 12-myristate 13-acetate,50 ng/ml)的 RPMI 培养基中刺激 48 小时。死细胞用本品染色,PD-1 表达用免疫染色法检测(一抗:抗 PD-1 小鼠抗体,二抗:抗小鼠抗体-Alexa488)。结果表明,死细胞和活细胞可以清楚地区分开来,而且在只选取活细胞的情况下,受刺激细胞组的 PD-1 表达升高。

实验步骤

死细胞标记试剂–Blue货号:C555 死细胞标记试剂–Blue

试验结果

死细胞标记试剂–Blue货号:C555 死细胞标记试剂–Blue

常见问题Q&A

Q1:能否测量贴壁细胞?
A1:可对贴壁细胞进行检测。用胰蛋白酶消化细胞或用刮板收集细胞,以制备细胞悬液。
Q2:胰蛋白酶会干扰测量吗?
A2:通过以下实验证实胰蛋白酶对 HeLa 细胞的影响。我们将胰蛋白酶处理与使用刮板进行了比较,确认两种情况下的分析结果没有区别。

死细胞标记试剂–Blue货号:C555 死细胞标记试剂–Blue

Q3:是否可以用显微镜进行观察?
A3:我们已经证实,可以对染色后的 HeLa 细胞进行成像。用这种染料染色的 HeLa 细胞在固定和膜渗透后的成像结果如下。

死细胞标记试剂–Blue货号:C555 死细胞标记试剂–Blue

Q4:染色是否会产生细胞毒性?
A4:使用CCK-8 来评估染色对 HeLa 细胞的细胞毒性,结果显示几乎没有细胞毒性。
Q5:染色后能否保存固定的细胞?
A5:不建议保存。由于荧光强度在固定后会随着时间的推移而降低,因此染色后的样本应在当天进行检测。
Q6:DMSO stock solution的稳定性如何?
A6:该产品在 -20°C 下冷冻保存 6 个月是稳定的。本品受潮后会降解;如果考虑长期储存超过 6 个月,请使用未开封且含水量低的DMSO。

此外,如有必要,可将产品分成小份储存

Q7:如何对细胞进行栅极化?
A7:以下是使用 Becton Dickinson (BD) 流式细胞仪的方法。

 

 

死细胞标记试剂–Blue货号:C555 死细胞标记试剂–Blue

死细胞标记试剂–Blue货号:C555 死细胞标记试剂–Blue

253E0 | Sulfo-Cyanine7 tetrazine, 5 mg – Lumiprobe荧光染料

上海金畔生物科技有限公司代理lumiprobe荧光染料全线产品,欢迎访问官网了解更多信息

253E0 | Sulfo-Cyanine7 tetrazine, 5 mg

¥3,770.00

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SKU: Lumiprobe.253E0 分类: 荧光探针与染料

  • 其他信息

其他信息

保存温度

-20°C

产地

美国

产品详情链接

https://www.lumiprobe.com/p/sulfo-cy7-tetrazine

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Ultipor membrane 47mm 0.2um 品牌:Pall CAS No.:


品牌:Pall
CAS No.:
储存条件:室温
纯度:
产品编号

(生产商编号)

等级 规格 运输包装 零售价(RMB) 库存情况 参考值

366-09371

5 plates 咨询


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同仁化学PlasMem Bright Green细胞膜染色试剂货号:P504 细胞膜染色试剂—绿色| 日本DOJINDO

上海金畔社生物科技有限公司日本同仁化学dojindo全线产品代理 中国代理商

PlasMem Bright Green细胞膜染色试剂货号:P504
细胞膜染色试剂—绿色
PlasMem Bright Green
商品信息
储存条件:-20度保存,避光防潮
运输条件:室温

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选择规格:
100 μl

现货

细胞染色

PlasMem Bright Green细胞膜染色试剂货号:P504 细胞膜染色试剂—绿色

PlasMem Bright Green细胞膜染色试剂货号:P504 细胞膜染色试剂—绿色

产品特性
与其他公司产品的比较
细胞膜上的停留时间
实验例
关联产品
常见问题Q&A
产品文献

产品特性

细胞膜起着分隔细胞内和细胞外的作用,并且与细胞的移动和生长、神经信号的传达等细胞功能密切相关。因此,细胞膜的异常与各种细胞状态异常所造成的疾病(如离子通道病Channelopathy)有很密切的关联,被认为是非常重要的生物标记物之一。

由于操作简便并且可用于活细胞染色,小分子荧光探针是最常用的细胞膜染色方法。但是小分子荧光探针普遍存在细胞内停留时间短、水溶性差的问题。而PlasMem Bright是一种克服了现有小分子荧光探针问题的产品。 用PlasMem Bright观察细胞膜时,可以在染色后的1天以上进行长时间的荧光观察。

PlasMem Bright Green细胞膜染色试剂货号:P504 细胞膜染色试剂—绿色

与其他公司产品的比较

PlasMem Bright系列产品克服了现有市面上的细胞膜染色试剂的诸多缺点(细胞毒性高、停留时间短、不同实验系的兼容性差)。并且分别有Green/ Red两种产品,方便多重染色时自由选择。

产品名 细胞

毒性

染色后

的清洗

含血清

培养基

停留

时间

染色后

的固定

PlasMem Bright 不需要 可使用 24 h 可以(PFA)
S公司 产品P 需要 不可使用 可以
T公司 产品D 需要 可使用 不可以
T公司 产品C 需要 可使用 1.5 h 可以(PFA)

*通过细胞核染色试剂染色后,神经细胞的形态变化(凝集)的比较得出的结论

细胞膜上的停留时间

使用各种细胞膜染色试剂进行染色HeLa细胞,经过24 h培养后对各染色试剂的荧光图像进行比较。结果发现,与其他公司的细胞膜染色试剂相比,PlasMem Bright系列产品的染色时间更长,膜上的停留时间也更长。

PlasMem Bright Green细胞膜染色试剂货号:P504 细胞膜染色试剂—绿色

实验例

实验例:ES细胞群内部的细胞膜染色

将小鼠ES细胞在涂有明胶的玻璃底皿中培养4天,并将获得的细胞群,用PlasMem Bright Green(200倍稀释)染色15分钟,并使用共聚焦显微镜(Zeiss:LSM710)中观察。

结果,细胞群内部的细胞膜也可以用PlasMem Bright Green可视化观察。

PlasMem Bright Green细胞膜染色试剂货号:P504 细胞膜染色试剂—绿色

<观察条件>

细胞膜(PlasMem Bright Green【绿】):Ex.488 nm/Em.500-560 nm.

*此实验例由庆应义塾大学医学院的石津 大嗣老师提供。

实验例:轴突神经细胞形态和线粒体定位的观察

由神经母细胞瘤细胞SH-SY5Y分化诱导的神经细胞,分别用PlasMem Bright Green (绿)、MitoBright LT Red (红)、Hoechst 33342 (蓝) 进行染色。可以鲜明的观察到细胞的形状以及轴突内的线粒体。

PlasMem Bright Green细胞膜染色试剂货号:P504 细胞膜染色试剂—绿色

(比例尺:200 μm)

<观察条件>

细胞膜(PlasMem Bright Green【绿】):Ex.488 nm/Em.500-560 nm。

线粒体(MitoBright LT Red【红】):Ex.561 nm/Em.560-620 nm。

细胞核(Hoechst33342【蓝】):Ex.405 nm/Em.400-450 nm。

<实验步骤>

(1)诱导神经芽细胞(SH-SY5Y)为神经细胞。

(2)去除上清液,添加使用培养基中稀释200倍的PlasMem Bright Green、Hoechst 33342(终浓度:5μg/ml)以及MitoBright LT Red(终浓度0.1 μmol/l)。

(3)培养30分钟。

(4)去除上清液,添加HBSS。

(5)使用荧光显微镜观察。

实验例:神经芽细胞(SH-SY5Y)中的线粒体检测

分别用PlasMem Bright Green (绿)、MitoBright LT Red (红)、Hoechst 33342 (蓝) 对神经母细胞瘤细胞SH-SY5Y进行染色,用共聚焦显微镜获得3D图像。可以鲜明的观察到细胞形态以及线粒体和细胞核的情况。

PlasMem Bright Green细胞膜染色试剂货号:P504 细胞膜染色试剂—绿色

(比例尺:10 μm)

<观察条件>

细胞膜(PlasMem Bright Green【绿】):Ex.488 nm/Em.500-560 nm。

线粒体(MitoBright LT Red【红】):Ex.561 nm/Em.560-620 nm。

细胞核(Hoechst33342【蓝】):Ex.405 nm/Em.400-450 nm。

<实验步骤>

(1)使用HBSS清洗SH-SY5Y细胞。

(2)添加使用培养基中稀释200倍的PlasMem Bright Green、Hoechst 33342(终浓度:5μg/ml)以及MitoBright LT Red(终浓度0.1 μmol/l)。

(3)培养10分钟。

(4)使用HBSS清洗细胞2次

(5)使用荧光显微镜观察。

  实验例:脑源性小鼠神经母细胞瘤的延时成像

使用培养基中稀释200倍的PlasMem Bright Green,染色N1E-115细胞30分钟并进行延时成像时,可以清楚地观察到神经细胞内树突和突起中的变化。

 

<培养条件>

・细胞:N1E-115细胞(脑源性小鼠神经母细胞瘤)

・培养基:5%FBS,1%含谷氨酰胺的D-MEM(低葡萄糖)

・培养设备:35 mm 玻璃底皿

<拍摄条件>

・成像设备:带培养箱的荧光显微镜

・拍摄时间:1小时,拍摄间隔:2分钟

*此实验例由芝浦理工大学系统科学与工程学院的涌澤 充 様、福井 浩二教授提供。


 实验例:与外泌体共染色

 

向PlasMem Bright Green染色的HeLa细胞中加入外泌体膜荧光染色试剂盒(ExoSparkler Exosome Membrane Labeling Kit-Red)染色的外泌体。可以观察到,由活细胞的细胞膜产生的内体(Endosome)中的外泌体,以及没有摄入外泌体的内体。另外,即使在固定染色的细胞之后,也可以像活细胞一样使存在于细胞膜来源的囊泡(内体)中的外泌体可视化。

PlasMem Bright Green细胞膜染色试剂货号:P504 细胞膜染色试剂—绿色

PlasMem Bright Green细胞膜染色试剂货号:P504 细胞膜染色试剂—绿色

(比例尺:5 μm)

PlasMem Bright Green细胞膜染色试剂货号:P504 细胞膜染色试剂—绿色

PlasMem Bright Green细胞膜染色试剂货号:P504 细胞膜染色试剂—绿色

(比例尺:10 μm)

<观察条件>

细胞膜 (PlasMem Bright Green, 绿)  Ex. 488 nm / Em. 500-560 nm。

外泌体 (ExoSparkler Exosome Membrane Labeling Kit-Red, 红)  Ex. 561 nm / Em. 560-620 nm。

 

<实验步骤>

(1)接种Hela细胞,24小时培养。

(2)去除上清液,添加使用培养基稀释的PlasMem Bright Green(100倍稀释)。

(3)培养10分钟。

(4)使用HBSS清洗细胞3次。

(5)添加175 μlMEM培养基与ExoSparkler Exosome Membrane Labeling Kit-Red染色过的Exosome溶液25 μl。

(6)在CO2培养箱中过夜培养。

(固定情况下)细胞使用HBSS清洗2次后添加4%PFA,培养15分钟后,使用HBSS清洗细胞2次。

(7)使用共聚焦显微镜观察

 

 实验例:烟草BY2细胞的膜染色

用PlasMemBright Green (200倍稀释)染色烟草BY2细胞5分钟,清洗后每5分钟拍摄一次并进行长时间观察。实验中可以清晰的观察到BY2细胞膜的荧光以及细胞分裂所形成的细胞板。

(数据由名古屋大学栗原大辅老师友情提供)

<检测条件>

・转盘式共聚焦显微镜观察

・Ex: 488 nm; Em: 520/35 (502.5-537.5 nm)

・图中的时间按照00:00 (小时:分钟)表示

 

 实验例:拟南芥根的染色

用PlasMemBright Green (200倍稀释)染色拟南芥根15分钟,采用Z轴景深连续拍照的方法进行荧光观察,可以清晰的观察到立体的细胞膜分布情况。

 

(数据由名古屋大学栗原大辅老师友情提供)

<检测条件>

 

・转盘式共聚焦显微镜观察,Z轴摄影

・Ex: 488 nm; Em: 520/35 (502.5-537.5 nm)

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PlasMem Bright Green细胞膜染色试剂货号:P504 细胞膜染色试剂—绿色PlasMem Bright Green细胞膜染色试剂货号:P504 细胞膜染色试剂—绿色

常见问题Q&A

Q1:   是否可以用固定化细胞?
A: 可以用4% 多聚甲醛(PFA)进行固定。

但是请注意不可以改变细胞膜的渗透性,否则会操造成没有荧光。

Q2:  是否可以进行动态荧光成像?
A:可以。   但是请注意将激发光保持在最低水平并提高检测灵敏度。另外,长时间的激发光照射可能会对细胞造成伤害,也更容易使荧光染料分解,请考虑采用时间间隔等方法尽量避免。
Q3:   在配制Working solution的时候是否可以用无血清培养基或Buffer进行稀释?
A: 可以。
Q1:  染色后清洗细胞时建议使用什么?
A: 无血清培养基、PBS、HBSS等各种缓冲液均可以使用。
Q4:   添加Working solution后,是否可以马上观察?
A:添加后马上观察也可以。操作手册上的步骤是加入试剂后培养5 min再观察。
Q5:   细胞膜以外的地方也有被染色的情况,请问是什么原因?
A: 感觉观察到细胞膜以外也被染色的情况,可能有如下两个原因

1) 细胞膜上的试剂,随着时间的推移,通过细胞内吞作用进入细胞内。

请参考本产品网页上“细胞膜上的停留时间”的部分,有染色后24 h的照片。

2)荧光成像时的焦点在底面(细胞底部的接触面)上,如下图A。

荧光成像时的焦点请尽量像下图B那样调整Z轴的高度。

PlasMem Bright Green细胞膜染色试剂货号:P504 细胞膜染色试剂—绿色

PlasMem Bright Green细胞膜染色试剂货号:P504 细胞膜染色试剂—绿色

产品文献

编号 文献 IF
1 The formation of migrasomes is   initiated by the assembly of sphingomyelin synthase 2 foci at the leading   edge of migrating cells,

Nature Cell Biology,2023 ,25(8):1173-1184.

2023 21