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Cell Counting Kit-Luminescence试剂盒货号:CK18
细胞活性(ATP检测)
ATP Assay Kit-Luminescence
商品信息
储存条件:0-5度保存
运输条件:室温

特点:

 

● 操作简便,检测仅需10分钟

● 灵敏度高,微量细胞也可检测

● 悬浮细胞和原代细胞适合

选择规格:
200 tests
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2000 tests

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Cell Counting Kit-Luminescence试剂盒货号:CK18

Cell Counting Kit-Luminescence试剂盒货号:CK18

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NO.1.    Cell Counting Kit-8    细胞增殖毒性检测

NO.2.    Cytotoxicity LDH Assay Kit-WST    乳酸脱氢酶(LDH)检测

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NO.5.    ROS Assay Kit -Highly Sensitive DCFH-DA-    ROS检测

产品原理

ATP是生物体内最直接的能量来源,在肌肉收缩、代谢反应、主动运输等方面被广泛使用,甚至被称作生物体内的能量货币。同仁化学研究所开发的Cell Counting Kit-Luminescence试剂盒是一种通过Luciferase来确定细胞中的腺苷三磷酸(ATP)的细胞增殖-毒性检测试剂盒。

本试剂盒只需将各试剂混合后加入孔板,10 分钟后即可检测。不需要去除培养基、清洗细胞等复杂的操作。此外,本试剂盒还有诸如发光的半衰期在3 小时以上、数据的重现性高 、兼容96孔板 、384孔板的多样品检测等诸多优点。

Cell Counting Kit-Luminescence试剂盒货号:CK18

图1. Cell Counting Kit Luminescence 检测原理

实验注意事项

检测方法:多功能酶标仪

检测结果:化学发光值

Cell Counting Kit-Luminescence试剂盒货号:CK18

注意:该试剂盒只能比较实验组对照组结果,但是不能完全定量检测

(试剂盒内不含标准品)

实验操作步骤

1. 白色 96 孔板中,每孔加入 100 μl 细胞悬液(白色 384 孔板,每孔加入 25 μl 细胞悬液)。

*为了获得更准确的检测结果,建议每个实验组至少设置三个复孔(n=3)。

2. 各孔中加入 100 μl Working solution(白色 384 孔板,每孔加入 25 μl Working solution)。

*气泡会对实验结果产生影响,如果孔中有气泡请尽量清除。 使用电动移液器时,建议使用反向吸液模式(RevPIP Mode)。

*加入 Working solution 后,建议用酶标仪的振荡混匀功能震荡 2 min。由于光照会影响检测结果,如果必须在 有光源的地方震荡,建议用铝箔纸包覆孔板。

3. 将孔板静置于温度设定在 25℃的酶标仪内 10 min。

*如果酶标仪没有温度设定的功能,请将孔板至于 25℃培养箱或 25℃左右室温下,避光培养 10 min。

*为了保证发光信号的稳定性,建议此处的培养时间不要低于 10 min。

4. 检测发光值(RLU)。

CCK-L,仪器检测实验例,详见如下:(实验例仅供参考)

细胞内ATP活性检测(CCK-L)的仪器设置

参考文献

编号 文献 IF
1 Impact   of the combined timing of PD-1/PD-L1 inhibitors and chemotherapy
on the outcomes in patients with refractory lung cancer, ESMO Open,2021,   6(2):100094
2021 6.5
2 SIRT3-Mediated   SOD2 and PGC-1α Contribute to Chemoresistance in Colorectal Cancer Cells   ,Annals of Surgical Oncology,2021, 28(8):4720-4732 2021 5.3
3 An Fc-muted bispecific antibody targeting PD-L1 and 4-1BB induces antitumor immune activity in colorectal cancer without systemic toxicity,Cellular & Molecular Biology Letters, 2023,doi.org/10.1186/s11658-023-00461-w 2023 8.3

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同仁化学Biotin-PEAC5-maleimide试剂货号:B299 CAS号:374592-98-0| 日本DOJINDO

上海金畔社生物科技有限公司日本同仁化学dojindo全线产品代理 中国代理商

Biotin-PEAC5-maleimide试剂货号:B299
N-6-(Biotinylamino)hexanoyl-N’-[2-(N-maleimido)ethyl]piperazine, hydrochloride
CAS号:374592-98-0
商品信息
储存条件:-20度保存
运输条件:室温
分子式:

C26H41ClN6O5S

分子量:

585.16

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10mg

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蛋白抗体标记检测方案

Biotin-PEAC5-maleimide试剂货号:B299 CAS号:374592-98-0

Biotin-PEAC5-maleimide试剂货号:B299 CAS号:374592-98-0

试剂盒内含
规格性状
产品概述
原理
操作步骤
参考文献

试剂盒内含

Biotin-PEAC5-maleimide试剂货号:B299 CAS号:374592-98-0

规格性状

性状:该产品为白色至微黄色粉末,溶于二甲基亚砜。

纯度(HPLC):90.0%以上

二甲基亚砜可溶:测试合格

产品概述

已知生物素与抗生物素蛋白牢固结合,其特性已广泛用于高灵敏度分析。由于生物素与抗生物素蛋白之间的结合稳定性常数为1015,比抗原-抗体反应高3至4个数量级,因此一旦结合至抗生物素蛋白的生物素在生理条件下不会脱落。另外,生物素是具有羧基的小分子,可以容易地化学修饰,并且可以在不损害蛋白质等的活性的情况下进行标记。因此,已经开发出许多生物素化合物作为使用抗体进行免疫测定的标记剂。具有活性酯基的生物素通常用于与蛋白质的氨基(NH2基)结合,具有马来酰亚胺基的生物素用于巯基(SH基)。

根据目的,有必要选择在抗生物素蛋白识别的生物素头和反应性基团之间的间隔物的长度,但是通常,间隔物越长,当抗生物素蛋白结合时,对抗体的抗原识别活性越强。可以认为,间隔物的影响可能引起非特异性吸附,并且在测量期间的背景可能很高。因此,为了提高测量灵敏度,请查看S/N(信噪比)。必须选择适当长度的垫片。

间隔基通常使用氨基己酸,并且存在一种化合物,其中一个分子的氨基己酸通过酰胺键被引入生物素中,并且该化合物中的两个分子被引入。由于己酸间隔物变长,水溶性变差,因此通常将生物素标记试剂溶解在DMSO中并添加到含有蛋白质的缓冲液中的方法是普遍的。

当在用氨基标记蛋白质时不能使用有机溶剂时,可以使用具有磺酸基的活性酯化合物。此外,在与巯基的反应中,以相同的方式使用由DMSO制备的溶液,但是由于其在间隔部分具有哌嗪结构,因此通过质子化在中性区域显示水溶性。

用于还原糖的生物素酰肼化合物的水溶性低,需要在DMSO溶液中进行调节。

在ELISA(酶联免疫吸附测定)中,将酶标记的链霉亲和素与生物素标记的抗体结合的方法是常见的。与抗生蛋白链菌素相比,抗生物素蛋白便宜,但很少用于ELISA中。原因是背景极高,并且认为高PI是原因。抗生物素蛋白通常用于通过柱分离生物素结合蛋白等的目的。

原理

Biotin-PEAC5-maleimide试剂货号:B299 CAS号:374592-98-0

操作步骤

产品使用步骤:

1. 制备含巯基的抗体

1) 用PBS溶解DTT (浓度为200mmol/l),制成DTT溶液。

2) 精确称量1.0-5.0mg抗体并记录,加入500ul 10mmol/l HEPES Buffer (pH8.0) 溶解蛋白质,制成抗体溶液。

3) 在抗体溶液加入2ul DTT溶液,充分混合。

2. 凝胶过滤纯化

1) 打开NAP-5层析柱上的盖子,弃去填充液。

2) 打开层析柱出口的盖子,用PBS分数次洗脱,每根层析柱收集大约10ml的洗脱液,使凝胶平衡。

3) 用移液器吸取500μl标记好的抗体溶液加入到层析柱中,弃去此时的流出液。

4) 在层析柱的出口处放置一根管子,在层析柱中加入1mlPBS,收集流出的抗体。

3. 生物素标记

1) 用DMSO溶解Biotin-PE-maleimide (浓度为50mmol/l,4.7mg/200ul或10mg/424ul)。

*用Biotin-PEAC5-maleimide时浓度为5.9mg/200ul或10mg/342ul。

2) 在纯化好的抗体溶液中加入配制好的生物素标记试剂溶液,抗体:生物素标记试剂的混合摩尔比为1:10左右。

3) 充分混合后,在水浴恒温摇床 (25℃)中过夜培养。

4. 标记抗体的凝胶过滤纯化

1) 打开NAP-10层析柱上的盖子,弃去填充液。

2) 打开层析柱出口的盖子,用PBS分数次洗脱,每根层析柱收集大约15ml的洗脱液,使凝胶平衡。

3) 用移液器吸取1ml标记好的抗体溶液加入到层析柱中,弃去此时的流出液。

4) 在层析柱的出口处放置一根管子,在层析柱中加入1.5ml PBS,收集流出的生物素标记抗体。

参考文献

1) S. Hashida, M. Imagawa, S. Inoue, K. H. Ruan and E. Ishikawa , “Mor Useful Maleimide Compounds for the Conjugation of Fab’ to Horseradish Peroxidase throuth Thiol Groups in the Hinge”, J. Appl. Biochem., 1984, 6, 56.

2) E. Ishikawa, M. Imagawa, S. Hashida, S. Toshitake, Y. Hamaguchi and T. Ueno, “Enzyme-labeling of Antibodies and their Fragments for Enzyme Immunoassay and Immunohistochemical Staining”, J. Immunoassay, 1983, 4, 209.

3) H. -J. Friesen, P. Hermentin and P. Gronski, “Novel Maleimido-Biotins for the Selective Biotinylation of Sulfhydrils”, Protides Biol. Fluids, 1987, 34, 43.

4) E. Ishikawa, S. Hashida, T. Kohno, T. Kotani and S. Ohtani, “Modification of Monoclonal Antibodies with Enzymes, Biotin, and Fluorochromes and Their Applications”, Immunol. Ser., 1987, 33, 113.

5) R. B. del Rosalio and R. L. Wahl, “Disulfide Bond-targeted Radiolabeling : Tumor Specificity of a Streptavidine-biotinylated Monoclonal Antibody Complex”, Cancer Res. (Suppl.), 1990, 50, 804S.

Ponalkit®-F Refilling Reagent 氟检测简易套装补充用试剂 品牌:Dojindo Lab CAS No.:


品牌:Dojindo Lab
CAS No.:
储存条件:室温
纯度:
产品编号

(生产商编号)

等级 规格 运输包装 零售价(RMB) 库存情况 参考值

343-03061

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Anti Iba1, Monoclonal Antibody(NCNP24) 抗Iba1,单克隆抗体(NCNP24)(鼠源) 品牌:Wako CAS No.:


品牌:Wako
CAS No.:
储存条件:-20℃
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(生产商编号)

等级 规格 运输包装 零售价(RMB) 库存情况 参考值

012-26723

for Immunochemistry 10 ul 1,680.00


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同仁化学Biotin-Osu试剂货号:B304 Biotin N-Succinimidyl D-biotin CAS号:35013-72-0| 日本DOJINDO

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Biotin-Osu试剂货号:B304
Biotin N-Succinimidyl D-biotin
CAS号:35013-72-0
商品信息
储存条件:-20度保存
运输条件:室温
分子式:

C14H19N3O5S

分子量:

341.38

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选择规格:
10mg

 期货

 
蛋白抗体标记检测方案

Biotin-Osu试剂货号:B304 Biotin N-Succinimidyl D-biotin CAS号:35013-72-0

Biotin-Osu试剂货号:B304 Biotin N-Succinimidyl D-biotin CAS号:35013-72-0

试剂盒内含
规格性状
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原理
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常见问题Q&A
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试剂盒内含

Biotin-Osu试剂货号:B304 Biotin N-Succinimidyl D-biotin CAS号:35013-72-0

规格性状

性状:该产品为白色至微黄色粉末,溶于二甲基亚砜。

纯度(HPLC):95.0%以上

二甲基亚砜可溶:测试合格

产品概述

已知生物素与抗生物素蛋白牢固结合,其特性已广泛用于高灵敏度分析。由于生物素与抗生物素蛋白之间的结合稳定性常数为1015,比抗原-抗体反应高3至4个数量级,因此一旦结合至抗生物素蛋白的生物素在生理条件下不会脱落。另外,生物素是具有羧基的小分子,可以容易地化学修饰,并且可以在不损害蛋白质等的活性的情况下进行标记。因此,已经开发出许多生物素化合物作为使用抗体进行免疫测定的标记剂。具有活性酯基的生物素通常用于与蛋白质的氨基(NH2)结合,具有马来酰亚胺基的生物素用于巯基(SH)。

根据目的,有必要选择在抗生物素蛋白识别的生物素头和反应性基团之间的间隔物的长度,但是通常,间隔物越长,当抗生物素蛋白结合时,对抗体的抗原识别活性越强。可以认为,间隔物的影响可能引起非特异性吸附,并且在测量期间的背景可能很高。因此,为了提高测量灵敏度,请查看S/N(信噪比)。必须选择适当长度的垫片。

间隔基通常使用氨基己酸,并且存在一种化合物,其中一个分子的氨基己酸通过酰胺键被引入生物素中,并且该化合物中的两个分子被引入。由于己酸间隔物变长,水溶性变差,因此通常将生物素标记试剂溶解在DMSO中并添加到含有蛋白质的缓冲液中的方法是普遍的。

如果有机溶剂不能用于蛋白质的氨基标记,则可以使用带有磺酸基的活性酯化合物。此外,在与巯基的反应中,以相同的方式使用由DMSO制备的溶液,但是由于其在间隔部分具有哌嗪结构,因此通过质子化在中性区域显示水溶性。

用于还原糖的生物素酰肼化合物的水溶性低,需要在DMSO溶液中进行调节。

在ELISA(酶联免疫吸附测定)中,将酶标记的抗生蛋白链菌素与生物素标记的抗体结合的方法是常见的。与抗生蛋白链菌素相比,抗生物素蛋白便宜,但很少用于ELISA中。原因是背景极高,并且认为高PI是原因。抗生物素蛋白通常用于通过柱分离生物素结合蛋白等的目的。

原理

Biotin-Osu试剂货号:B304 Biotin N-Succinimidyl D-biotin CAS号:35013-72-0

操作步骤

产品使用步骤:

  1. 参照下表配制50mmol/l的生物素标记试剂溶液:

    Biotin-Osu试剂货号:B304 Biotin N-Succinimidyl D-biotin CAS号:35013-72-0

由于生物素标记试剂遇水易分解,所以需要现配现用。

2. 蛋白质的生物素标记操作方法

1) 用10mmol/l Bicine Buffer (pH8.5) 溶解蛋白质,制成蛋白质溶液。

2) 在蛋白质溶液中加入配制好的生物素标记试剂溶液,蛋白质:生物素标记试剂的混合摩尔比为1:2-1:10。

3) 充分混合后,在水浴恒温摇床 (25 ℃) 中培养2-4 h。

3. 标记蛋白质的凝胶过滤及纯化。

1) 打开层析柱上的盖子,弃去填充液。

2) 打开层析柱出口的盖子,用PBS分数次洗脱,每根层析柱收集大约10ml的洗脱液,使凝胶平衡。

3) 用移液器吸取500μl标记好的蛋白质溶液加入到层析柱中,弃去此时的流出液。

4) 在层析柱的出口处放置一个2ml的样品管,在层析柱中加入1ml PBS,收集流出的生物素标记蛋白质。

常见问题Q&A

 

Q1:氨基标记有两种类型,OSu和Sulfo-OSu。 它们有何不同?

 

A:反应性几乎相同。由于磺基-OSu型具有磺酸基,因此它在水中的溶解度很高,并且可以在高浓度下反应。当您不想向系统中添加有机溶剂(例如DMSO)时,它也很有效。另一方面,在储存过程中它容易吸收水分并容易水解。

Q2:标记蛋白之前是否必须使用过滤管?
A:如果蛋白溶液中不含有带有活性氨基的小分子且蛋白浓度在10 mg/ml或者70 μM左右时,可以不使用过滤管来过滤,只需要将10 μl 样品溶液和90 μl Reaction Buffer以及8 μl NH2-reactive Fluorescein(由步骤3所得)混合并按照操作说明上的方法做从步骤4开始的后续试验。

参考文献

1) P. Kongtawelert and P. Ghosh, ” A New Sandwich-ELISA Method for the Determination of Keratan Sulphate Peptides in Biological Fluids Employing a Monoclonal Antibody and Labelled Avidin Biotin Technique.”, Clin. Chem. Acta,, 1990, 195, 17.

2) G. Paganelli, S. Pervez, A. G. Siccardi, G. Rowlinson, G. Deleide, F. Chiolerio, M. Malcovati, G. A. Scassllati and A. A. Epenetos, “Intraperitoneal Radio-localization of Tumors Pre-targeted by Biotinylated Monoclonal Antibodies”, Int. J. Cancer, 1990, 45, 1184.

3) C. Wagener, U. Kruger and J. E. Shively, “Selective Precipitation of Biotin-labeled Antigens or Monoclonal Antibodies by Avidin for Determining Epitope Specificities and Affinities in Solution-phase Assays”, Methods Enzymol., 1990, 184, 518.

4) D. M. Boorsma, J. Van Bommel and E. M. Vander Raaij-Helmer, “Simultaneous Immunoenzyme Double Labelling Using Two Different Enzymes Linked Directly to Monoclonal Antibodies or with Biotin-avidin”, J. Microscopy, 1986, 143, 197.

5) A. Komura, T. Tokuhisa, T. Nakagawa, A. Sasase, M. Ichihashi, S. Ferrone and Y. Mishima, “Specific Killing of Human Melanoma Cells with an Efficient 10B-compound on Monoclonal Antibodies”, Pigment Cell Res., 1989, 2, 259.

6) R. Rappuoli, P. Leoncini, P. Tarli and P. Neri, “Competitive Enzyme Immunoassay for Human Chorionic Somatomammotropin Using the Avidin-biotin System”, Anal. Biochem., 1981, 118, 168.