ScreenFect ™ 通信 向HeLa细胞导入siRNA数据
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高性能基因导入试剂
下面为大家介绍使用 ScreenFect ™ siRNA 向 HeLa 细胞导入 siRNA 数据的实验成果及逆转染(1-STEP)Protocol。
◆向 HeLa 细胞的逆转染例子(24孔培养板)
细胞的前期培养
1. 用适当的培养容器(T-75 烧瓶),将 HeLa 细胞培养至半融合状态。
配制转染试剂
1. 准备两支 1.5 mL 灭菌试管。
2. 在其中一支试管里加入 24.5 μL ScreenFect ™ Dilution buffer。
3. 再往步骤2的试管里加入 0.5 μL 的 ScreenFect ™ siRNA reagent,使全部容量达到 25 μL。…溶液(A)
(ScreenFect ™ siRNA reagent在使用前进行涡旋处理。)
4. 在另一支试管里加入 24 μL ScreenFect ™ Dilution buffer。
5. 再向步骤4的试管里加入 1 μL 的 5 μmol/L PIK3CB siRNA 溶液(5 pmol)…溶液(B)
6. 将溶液(B)全部添加至溶液(A)的试管中。
7. 轻敲试管,使溶液混合均匀。再用台式离心机降速处理。
8. 在室温下孵浴 5~20 分钟。
配制配制细胞悬浮液
1. 从恒温箱里取出【细胞的前期培养】的烧瓶。
2. 去除培养基,用 PBS 清洗一次。
3. 向烧瓶里添加 2 mL 胰蛋白酶溶液后,放入室温、5% CO2 的恒温箱里培养,直到细胞从培养容器中脱落。
4. 加入约 5 mL FBS 添加培养基使反应停止。
5. 利用移液器使细胞分散,将全部培养液转移到离心管中。
6. 150×g 离心,5 分钟。
7. 去除上清时不要去掉颗粒物。
8. 添加 5~10 mL 新的培养基,利用移液器使细胞分散。
9. 用血细胞计数板等的细胞计算器检测细胞数。
10. 检测出细胞悬浮液的浓度后经过计算,以此配制 2.0×105 cells/mL 的细胞悬浮液。(配制的细胞悬浮液量可根据实验规模进行适当地调节。)
转染
1. 将 500 μL 在【配制细胞悬浮液】时配制好的细胞悬浮液添加至细胞培养板里。
2. 将 50 μL 在【配制转染试剂】步骤8中孵浴的 DNA-lipid complex 添加至细胞培养板里,轻摇培养板使溶液混合(也可以先往细胞培养板
里加入 50 μL DNA-lipid complex,再加入 500 μL 细胞悬浮液)。
3. 放入 CO2 的恒温箱里培养 24~48 小时后即可进行后续实验。
◆实验数据
用逆向转染法和正向转染法向 HeLa 细胞进行 PIK3CB siRNA 的导入实验,通过实时定量 PCR 检测出 PIK3CB mRNA 的表达量。将定量结果得出的敲减效率,与原来用其他公司的产品进行实验得出的敲减效率进行比较,结果显示,ScreenFect ™ siRNA 拥有高于其他公司产品抑制目的基因表达的效率。
【逆向转染(1-STEP)】
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【正向转染(2-STEP)】
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◆产品列表
产品编号
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产品名称
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规格
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包装
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299-75001
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ScreenFect ™ siRNA转染试剂
ScreenFect ™ siRNA
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基因研究用
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0.2 mL
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295-75003
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1 mL
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293-75004
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1 mL×5
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