如何促进外泌体释放?


如何促进外泌体释放?

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莫能菌素钠(Monensin . sodium salt)是一种抗生素,行驶Na离子载体的功能。莫能菌素钠的功能包括能阻止糖蛋白的分泌,通过细胞周期停滞和凋亡抑制几种淋巴瘤细胞系的增殖,以及阻止神经酰胺通过高尔基体转运等。


如何促进外泌体释放?


图1  莫能菌素钠结构式



细胞内的多泡体(MVBs)是一种由细胞内吞形成的结构,其中包含着许多通过将内体膜发芽到隔室腔中而形成的小囊泡。MVBs与质膜的融合后向细胞外分泌外泌体。

莫能菌素作为Na离子载体,每往细胞外运出一个H的同时往细胞内转运一个Na,细胞内不断升高的Na会激活细胞的钠钙交换体,使得胞浆中Ca2+ 浓度升高。早在2003年,Savina等研究表明,在K562细胞中,对MVBs用荧光脂质N-Rh-PE进行标记,将K562细胞与莫能菌素(MON)和BAPTA-AM在37°C下孵育3小时。Fluo3-AM荧光表明通过莫能菌素处理诱导的巨大MVB中有Ca2+ 的积累,而钙离子螯合剂BAPTA-AM的存在会消耗MVBs的钙库,导致MVBs显著变小(图2)。实验表明莫能菌素处理下巨大MVB的形成与发展,涉及到一种钙依赖机制。在细胞培养基在加入钠钙交换体抑制剂阿米洛利(Amiloride),莫能菌素介导的作用被完全消除了(图3)。


如何促进外泌体释放?


图2  莫能菌素处理产生的巨大MBV会积聚腔内Ca2+ ,钙螯合剂会抑制其产生。



如何促进外泌体释放?


图3  阿米洛利(Amil)抑制外泌体释放和巨大MBV的形成。



外泌体被证实与一些神经疾病相关,包括朊病毒病和阿尔茨海默病。2016年,墨尔本大学的Guo等通过莫能菌素处理诱导MoRK13以及小鼠下丘脑神经元GT1-7细胞外泌体释放,同时使细胞间朊病毒感染性在细胞间转移的相应增加(图4)。


如何促进外泌体释放?


图4  莫能菌素刺激外泌体释放,并增加了细胞间病毒传递。



英国圣安德鲁斯大学的Powis等还在人淋巴母细胞T细胞系Jurkat和CEM中,比较了莫能菌素A23187的释放效果(图5)。


如何促进外泌体释放?


图5  通过纳米粒子跟踪分析(NTA)定量测定外泌体的释放。

(c)将Jurkat细胞在含有50 μm NH4Cl,100 μm氯喹,4 μm莫能菌素或0.5 μm A23187(钙-镁混合盐)的无血清培养基中孵育过夜。 NTA分析10000 g后的上清液。 检测到的平均粒径为114 nm。 

(d)Jurkat细胞与所示浓度的莫能菌素和A23187一起孵育过夜。 NTA分析10000 g后的上清液。检测到的平均粒径为126 nm。


◆参考文献


1.  Savina, A., Furlán, M., Vidal, M., & Colombo, M. I. (2003). Exosome release is regulated by a calcium-dependent mechanism in K562 cells. Journal of Biological Chemistry, 278(22), 20083-20090. 【被引次数553】

2.  Guo, B. B., Bellingham, S. A., & Hill, A. F. (2016). Stimulating the release of exosomes increases the intercellular transfer of prions. Journal of Biological Chemistry, 291(10), 5128-5137.【被引次数72】

3.  Soo, C. Y., Song, Y., Zheng, Y., Campbell, E. C., Riches, A. C., Gunn‐Moore, F., & Powis, S. J. (2012). Nanoparticle tracking analysis monitors microvesicle and exosome secretion from immune cells. Immunology, 136(2), 192-197. 【被引次数172】



◆产品列表


品牌

产品编号

产品名称

规格

CAS No.

外泌体释放促进剂

Enzo

ALX-380-026-G001

Monensin . sodium salt
莫能菌素钠

1 g

22373-78-0

Enzo

ALX-380-026-M100

100 mg

22373-78-0

Enzo

ALX-450-002-M010

A23187 (Mixed Calcium-Magnesium Salt)
A23187(混合钙-镁盐)

10 mg

Enzo

ALX-450-002-M005

A23187 (Mixed Calcium-Magnesium Salt)
A23187(混合钙-镁盐)

5 mg

外泌体释放抑制剂

Enzo

ALX-550-261-M005

Amiloride, 5-(N,N-Dimethyl)-, . Hydrochloride
阿米洛利, 5-(N,N-二甲基)-, . 盐酸盐

5 mg

1214-79-5

(free base)

Enzo

ALX-550-266-M005

Amiloride, 5-(N,N-Dimethyl)-, . Hydrochloride
阿米洛利, 5-(N,N-二甲基)-, . 盐酸盐

5 mg

1154-25-2

SECADOR Autodesiccator Vertical Clear71227-15


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Details

25/box

Additional Information

Particle Shape Irregular
Array Silica
Family / Formats SiliaPlate™ (TLC Plates)
Plate Size 20 x 20 cm
Quantity 25/box
Storage Condition Keep dry
Plate Thickness 1000 µm
F254 indicator Yes

CellDrop™ 自动细胞计数器

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  无需载玻片即可计数细胞!

CellDrop 自动细胞计数仪采用获得的 DirectPipette™ 技术,可消除常规细胞计数中的塑料载玻片和笨重的血细胞计数器。CellDrop 细胞计数器具有双荧光和明场光学器件、可变高度样品室以及功能强大且易于使用的分析软件。该仪器可在广泛的细胞密度、细胞类型和应用范围内实现最快的细胞计数、活力评估和 GFP 转染效率测量。


优势:

1.提高了细胞计数的的效率和可持续性;

2.减少细胞计数中的塑料废物;

3.在细胞尺寸和密度范围内保持准确性。


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EasyApps Secure 提供了一套可选的软件控件,允许受监管的 GxP 设施轻松地将 CellDrop 添加到其细胞计数工作流程中该软件集成在机载操作系统中,包括一系列确保合规性所必需的功能,包括:

  1.受密码保护的系统访问;

  2.集成电子签名控制;

  3.全面的用户帐户管理;

  4.安全审计跟踪记录;

  5.先进的数据处理和导出工具。


DeNovix CellDrop 系列仪器是独立系统,配备直观、易于使用的应用程序,用于自动细胞计数和活力分析。

明场:

1.细胞图像的快速计数

2.使用台盼蓝检测评估活/死

3.报告的细胞/mL、细胞大小和活力百分比

4.细胞核浓度 和使用台盼蓝测定的提取效率

荧光:

1.使用吖啶橙 (AO) 和碘化丙啶 (PI) 进行细胞活力分析;

2.在存在碎片的情况下分析原代细胞:AO 用于鉴定有核细胞、PI 检测细胞活力、AO/PI(活/死);

3.酵母活力;

4.GFP转染效率;

5.细胞核浓度 以及使用 AO/PI 测定的提取效率;

6.六种直观的结果分析格式。C

ellDrop 提供双荧光和明场 (CellDrop FL) 或明场 (CellDrop BF) 型号


CellDrop提供荧光和明场(CellDrop FL)和明场(CellDrop BF)型号!

1.CellDrop FL-UNLTD 无计数的2通道荧光细胞计数器;

2.CellDrop FL-PAYG  2通道荧光细胞计数器;

3.CellDrop BF-UNLTD 无限计数的明场细胞计数仪;

4.CellDrop BF-PAYG  明场细胞计数器 。



CellDrop 如何处理不规则形状的细胞核?

CellDrop 和许多其他自动细胞计数器旨在对圆圈进行计数。大多数组织培养细胞和 PBMC 都是圆形的,但我们对算法进行了修改,称为“不规则细胞模式”,您可以打开它以更好地处理不同的形状。在我们网站上有一个关于其工作原理的技术说明,但简而言之,如果您的样品包含非圆形细胞,您可以将其打开。选中该框以打开不规则细胞模式后,我们的算法可以更好地处理椭圆形或长方形的细胞核,这些细胞核在某些样本中很常见,例如含有平滑肌的样本。平滑肌细胞核的外观几乎呈杆状。心脏就是一个很好的例子,我们可以看到很多这样的例子。



计数后,我们在显微镜上对细胞核进行成像。是否可以将载玻片与 CellDrop 一起使用以避免使用额外的样品?

CellDrop 可以设置可变的腔室深度,以允许使用更大或更小的样品体积(5 至 40 µL 总测定体积)。就像我们可以降低手臂并使用更少的体积一样,我们实际上可以抬起手臂并容纳塑料幻灯片。CellDrop 臂可以使用 DirectPipette 从其定位位置大幅向上移动,并且为塑料载玻片留下足够的空间。将样品装入塑料载玻片后,整个过程与正常使用 CellDrop 相同。只需将载玻片放入仪器顶部的凹槽中并按计数即可。完成后,您可以将该载玻片放在高倍显微镜(可能是 40 或 60 倍物镜)上进行核膜完整性分析,而无需使用额外的样品。



使用CellDrop的结果与使用血细胞计数器或流式细胞仪相比如何?

血细胞计数器的计数存在很多主观性。如果您进行了一项大型研究,例如重复 10 次,CellDrop 往往会与平均答案紧密一致。但 CellDrop 的精度比血细胞计数器严格得多。通过手工计数,您会发现计数与计数以及用户与用户之间存在很大差异,并且用户必须对图像进行大量解释。CellDrop 标准化了计数设置,消除了主观性。使用荧光时尤其如此,其中红色或绿色荧光团的存在消除了与台盼蓝相关的主观性。

就流式细胞仪而言,我们有一些数据表明我们与我们使用过的流式细胞仪非常接近。我们正在开发一份技术说明来显示数据比较,但 CellDrop 上的计数与我们使用的流式细胞仪上的计数之间没有统计差异。因此,我们确实对这两种技术进行了比较,只是略有不同。

Anti Glutathione S-transferase, Monoclonal Antibody, Peroxidase Conjugated 抗谷胱甘肽S-转移酶,单克隆抗体,过氧化物酶偶联 品牌:Wako CAS No.:


品牌:Wako
CAS No.:
储存条件:-20℃
纯度:
产品编号

(生产商编号)

等级 规格 运输包装 零售价(RMB) 库存情况 参考值

011-21891

for Immunochemistry 100 ul 3,960.00


* 干冰运输、大包装及大批量的产品需酌情添加运输费用


* 零售价、促销产品折扣、运输费用、库存情况、产品及包装规格可能因各种原因有所变动,恕不另行通知,确切详情请联系上海金畔生物科技有限公司客服。

产品描述相关资料下载相关产品浏览记录 抗原:GST
免疫动物:小鼠
应用实验及效价:免疫印迹(WB)(1:250~1:1000)

谷胱甘肽-S转移酶(GST)作为标签用来检测或纯化重组蛋白