EPI400 Chemically Competent Cell 大肠杆菌化学感受态细胞

货号： MF2350-5000UL 品牌： Jinpan 标签： 分子生物学

描述

EPI400 Chemically Competent Cell  

大肠杆菌化学感受态细胞

搜索关键词：

EPI400；EC100；CopyCutter Induction Solution；toxic or unstable DNA毒性或不稳定DNA；Epicentre；

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产品组分：

菌株描述

EPI400菌株，来源于T1抗噬菌体-EC100菌株，通过对含ColE1或pMB1复制起始点的载体（比如，pUC和pET型载体）上控制载体拷贝数的某一基因进行改造而来。EC100菌株上的组成性表达基因-pcnB（plasmidcopynumber）被删除，用连接到一诱导启动子的改良pcnB基因来替换，即得到EPI400菌株。

EPI400菌株能够明显降低各种常用载体的拷贝数，从而特别适用于各种不稳定DNA或毒性基因的克隆。另外，只需用CopyCutter诱导液（CopyCutter Induction Solution）短时孵育，又可提高拷贝数，改善质粒产量，同时不会降低稳定性。

【更多特征】：

[mcrA,Δ(mrr-hsdRJP-mcrBC)]基因型，使EPI400适合于甲基化DNA的有效克隆；

endA1的突变确保质粒克隆的高产量；recA1的突变确保大分子DNA插入的稳定性；

lacZΔM15标记的存在，使EPI400适用于蓝白斑筛选；

tonA赋予EPI400具抗噬菌体T1和T5的能力；rpsL赋予EPI400链霉素抗性。

EPI400菌株基因型：F- mcrA Δ(mrr-hsdRJP-mcrBC) Φ80dlacZΔM15 ΔlacX74 recA1 endA1 araD139 Δ(ara, leu)7697 galU galK λ- rpsL (StrR) nupG trfA tonA pcnB4 dhfr

产品描述：

本品是大肠杆菌EPI400菌株经特殊工艺制作所得的感受态细胞，可用于DNA的热击转化。经pUC19质粒检测转化效率可达5×107 cfu/μg DNA。且在-80℃能稳定保存几个月转化效率不发生改变。

保存与运输条件：

保存：-80℃保存，6个月有效。

运输：干冰运输。

注意事项

1） 感受态细胞必须用干冰运输，感受态细胞应在-80℃保存。

2） 感受态细胞最好在冰上融化，不可在冰上放置时间过长，长时间存放会降低转化效率。

3） 进行转化操作时，需在相应温度及无菌条件下进行。

4） 为防止转化实验不成功，可保留部分连接反应液以重新转化，将损失降到最低。

5） 产品包装内含质粒pUC19 DNA(10pg/μl)，供对照实验用。

6） 转化高浓度的质粒可相应减少最终用于涂板的菌量。

7） 为了您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作。

使用方法【所有操作均在无菌条件的标准下进行】

1） 从-80℃冰箱取出取感受态细胞，迅速置于冰浴中，5min后待菌块融化，加入目的DNA（质粒或连接产物），用手轻弹管底轻轻混匀（避免用枪吸打），冰浴静置25min。

2） 42℃水浴热激45s，迅速将离心管转移到冰浴中，冰上静置2min。此过程不要摇动离心管。

3） 向每个离心管中加700 μl无菌的LB培养基（不含抗生素），混匀后置于37℃摇床，200 rpm振荡培养60min，目的使质粒上相关的抗性标记基因表达，使菌体复苏。

4） 低速离心收菌（比如5000rpm，1min），留取100μl左右上清，用枪轻轻吹打重悬菌块，之后加到含所选质粒筛选抗生素的LB固体琼脂培养基上，用无菌的涂布棒将细胞均匀涂开，将平板置于室温（或37℃）直至液体被吸收，倒置培养，37℃培养过夜。如果进行蓝白斑筛选，37℃培养至少15h。

【注意】：

a）涂布用量可根据具体实验调整。若转化的DNA总量较多，可不用离心，直接取少量转化产物涂布平板；反之，若转化的DNA总量较少，则通过离心（5000 rpm，1min）后吸除部分培养液，悬浮菌体后将其涂布于一个平板中。

b）新制备的固体培养基不易涂干，可将平板正置于37℃直至液体被吸收后再倒置培养。

c）涂布剩余的菌液可置于4℃保存，如果次日的转化菌落数过少，可以将剩下的菌液再涂布新培养基进行培养。

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规格信息