月度归档：2024年01月

Y2HGold Chemically Competent Cell 酵母菌化学感受态细胞

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Y2HGold Chemically Competent Cell 酵母菌化学感受态细胞

货号： MF2352-1000UL 品牌： Jinpan 标签： 分子生物学

描述

Y2HGold Chemically Competent Cell 酵母菌化学感受态细胞

温馨提示

见我司（金畔生物）整理的酵母双杂交（Yeast two-hybrid assay）产品专题。

产品标签

Matchmarker GAL4双杂交系统；Y2HGold；pGBKT7；Y187；pGADT7；AUR1-C；Aureobasidin A（AbA）；金担子素；

产品信息

产品名称 产品编号 规格 价格（元）      
Y2HGold Chemically Competent Cell 酵母菌化学感受态细胞 MF2352-1000UL          10×100μl           290
MF2352-5000UL 50×100μl 1320

产品包装

组分编号           组分名 保存                 

货号（规格）
MF2352-1000UL       MF2352-5000UL      
MF2352-A Y2HGold Competent Cell -80℃ 10×100μl 50×100μl
MF2352-B pGADT7 Control Vector (10ng/μl)          -80℃ 10μl   10μl  
MF2352-C Carrier DNA (5μg/μl) -20℃ 100μl  500μl 
MF2352-D PEG/LiAC Solution +4℃ 5ml 25ml

保存与运输方法

保存：其中感受态细胞按标签注明置于-80℃保存，三个月有效。其他组分按照标签注明保存，一年有效。

运输：干冰运输。

产品描述

酵母双杂交系统是用于体内研究蛋白相互作用的一种非常便利的工具，常用的如GAL4为基础的双杂交系统，使用酵母转录因子GAL4来检测转录激活后的蛋白相互作用。工作原理为：一个完整的酵母转录因子GAL4由两个可以分开，功能上相互独立的结构域组成，N端有一个147个氨基酸组成的DNA结合域（DNA- BD），C端有一个由113个氨基酸组成的转录激活域（AD）。DB可以识别并结合上游激活序列（UAS），而AD能激活UAS下游基因进行转录，单独的BD或AD不能激活基因转录。正常情况，BD和AD不会结合，将待检测的蛋白质分别与BD和AD融合，形成诱饵融合蛋白（bait-DNA）和诱捕融合蛋白（prey-DNA），只有当诱饵和诱捕蛋白发生相互作用，促使BD和AD的相互接近，形成完整的GAL4，从而激活报告基因的转录。

Y2HGold是GAL4系统酵母双杂交用实验菌株，能直接转化质粒或与MATα型酵母菌株Y187通过接合（mating）操作进行蛋白相互作用验证或双杂交文库筛选和构建。Y2HGold-GAL4酵母双杂交系统需要两种质粒配套使用，分别为pGBKT7和pGADT7。前者筛选标志为Trp1，用于表达DNA-BD与诱饵蛋白（bait）的融合蛋白；后者筛选标志为Leu，用于表达AD与诱捕蛋白（prey）的融合蛋白。Y2HGold有四个报告基因：AUR1-C，HIS3, ADE2, MEL1，分别由三个完全异源的Gal4反应启动元件-G1，G2，M1操控，这三种启动子只有GAL4识别的17bp核心区相同，其余部分都不同，因此大大降低了酵母双杂交假阳性发生的概率。此外，新报告基因AUR1-C与以往的营养缺陷报告基因相比，具有更低背景，这一优势也可降低酵母双杂交假阳性发生的概率。

本品为经特殊工艺制备的Y2HGold酵母菌化学感受态细胞，用pGADT7质粒检测转化效率＞104cfu/μg DNA。且在-80℃能稳定保存三个月。

基因型

MATa, trp1-901, leu2-3, 112, ura3-52, his3-200, gal4Δ, gal80Δ, LYS2::GAL1UAS-Gal1TATA-His3, GAL2UAS-Gal2TATA-Ade2 URA3::MEL1UAS-Mel1TATAAUR1-C MEL1

注意事项

1. 最好在冰上融化感受态细胞。

2. 转化高浓度质粒可相应减少用于涂板的菌量。同时转化2-3种质粒可适当增加质粒的用量。

3. Y2HGold对高温敏感，最适生长温度为27-30℃，一旦高于31℃，生长速度和转化率都呈指数下降。

4. 菌落变粉红色并不是污染，而是酵母细胞生长中的一种常见现象。当酵母细胞在平板上培养几天，将平板内的腺嘌呤消耗殆尽，那时酵母试图通过自身代谢途径合成腺嘌呤以供利用。然而，某些菌株ADE2基因被破坏，腺嘌呤合成受阻。且ADE4，5，6，7基因均正常。由此，造成中间产物P-ribosylamino imidazole（AIR）在细胞的积累使得菌落变为粉红色。

5. 酵母菌在缺陷培养基上生长速度比YPDA培养基慢，营养缺陷成分越多，生长越慢，以转化涂板为例：涂YPDA平板于29℃，48h培养可见直径1mm克隆；涂SD单缺平板于29℃，48-60h培养可见直径1mm克隆；涂SD双缺平板于29℃，60-80h培养可见直径1mm克隆；涂SD三缺或四缺平板于29℃，80-90h培养可见直径1mm克隆；

6. 为了您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作。

使用方法

1. 取100 µl冰上融化的Y2HGold化学感受态细胞，依次加入预冷的目的质粒2-5 µg，Carrier DNA（95-100℃孵育5 min，快速冰浴。重复一次。）10 µl，PEG/LiAc 500µl，用枪吹打几次充分混匀，30℃水浴30 min（在15min时翻转6-8次混匀）。

2. 之后将管子放42℃水浴15 min（在7.5min时翻转6-8次混匀）。

3. 5000 rpm离心40s弃上清，用400 µl ddH2O重悬沉淀，离心30s弃上清。

4. 用50 µl ddH2O重悬，涂板，放入29℃培养48-96 h。

相关产品

货号 名称 规格
MF2351-300UL              Y2HGold Yeast Strain酵母双杂交用甘油菌 300μl
MF2352-1000UL Y2HGold Chemically Competent Cell 酵母菌化学感受态细胞         10×100μl      
MF2353-300UL Y187 Yeast Strain 酵母双杂交用甘油菌 300μl
MF2354-1000UL Y187 Chemically Competent Cell 酵母菌化学感受态细胞 10×100μl
MF2501-200T Yeast Transformation Kit酵母转化试剂盒 200T

 

 

 

 

规格信息

品牌：

Jinpan
CAS:

N/A
规格：

10×100μl
货期：

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进口1.5ml冻存管（自立）螺旋盖保存管S-2061

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进口1.5ml冻存管（自立）螺旋盖保存管

  • 产品型号：S-2061
  • 简要描述：进口1.5ml冻存管（自立）螺旋盖保存管金畔生物公司供应：ELISA试剂盒,动物血清,荧光定量PCR耗材,移液器吸嘴,微量离心管,进口冻存管,细胞培养皿,培养板,培养瓶,进口吸头,仪器及手套,色谱耗材,针头过滤器,分光光度计。
产品咨询在线客服
  • 产品简介

进口1.5ml冻存管（自立）螺旋盖保存管 2ml/5ml/10ml病毒采样管/冻存管/保存管无菌 带螺旋盖微量样品管/离心

金畔生物公司供应：elisa试剂盒,动物血清,荧光定量PCR耗材,移液器吸嘴,微量离心管,进口冻存管,细胞培养皿,培养板,培养瓶,进口吸头,仪器及手套,色谱耗材,针头过滤器,分光光度计。

货号      产品名称

进口螺旋盖管

S-2062-0.5 进口0.5ml 螺旋盖管带o型圈,外旋，自立，模刻印刷区，非灭菌，18℃到-20℃

S-2060 进口1.5ml 螺旋盖管带o型圈,外旋，U型，模刻印刷区，非灭菌 ，18℃到-20℃

S-2061 进口1.5ml 螺旋盖管带o型圈, 外旋，自立,模刻印刷区，非灭菌，18℃到-20℃

S-2062 进口2.0ml 螺旋盖管带o型圈, 自立,外旋，模刻印刷区，非灭菌，18℃到-20℃

S-2063 进口2.0ml 螺旋盖管带o型圈, 彩色盖, U型，模刻印刷区，非灭菌，18℃到-20℃

S-2060STM 1.5ml 螺旋盖管带o型圈,外旋，U型，无印刷区，非灭菌 ，18℃到-20℃

S-2062STM 2.0ml 螺旋盖管带o型圈, 自立,外旋，无印刷区，非灭菌，18℃到-20℃

产品规格：

500支/包， 2包/箱（1000支/箱）

样品管/离心管

耐用、耐化学腐蚀的聚丙烯材质，自然色

可自立，1.5ml提供可自立和不可立两种

可煮沸和高温高压灭菌，无 RNase/DNase，无热原

大可承受 20,000×g 离心力

提供标准盖与系盖两种款式;颜色可供选择：红色，蓝色，绿色，黄色，橙色，紫色和琥珀色

进口1.5ml冻存管（自立）螺旋盖保存管

进口1.5ml冻存管（自立）螺旋盖保存管S-2061

 

AC05-10 冻存管;1.0ml，平底可立

AC05-20冻存管;外旋盖，1.8ml/2.0ml，平底可立

AC05-50 冻存管;外旋盖，5.0ml，平底可立

WC05-10 冻存管;内旋盖，1.0ml，星型可立

WC05-20冻存管;内旋盖，1.8ml/2.0ml，星型可立

WC05-50冻存管;内旋盖，5.0ml，星型可立

AC05-50L-N冻存管;5ml;无密封圈螺旋盖;无刻度

AC05-50L 冻存管;5ml;带密封圈螺旋盖;带刻度

AC05-50L-S 冻存管;5ml;带密封圈螺旋盖;带刻度;适用HPV

FB07-25 冻存管盒;5X5;25孔;网格型

FB07-81冻存管盒;9X9;81孔;网格型

FB07-100 冻存管盒;10X10;100孔;插槽型

CB07-020 冻存程序降温盒;适用于1.5ml、2.0ml冻存管

CB07-050 冻存程序降温盒;适用于5.0ml冻存管

适应客户：医院检验科PCR实验室，中心实验室，肝病中心；第三方检测机构，科研院所，大专院校，制药厂，试剂生产厂家，疾控中心，检验检疫。

植物高尔基体提取试剂盒（酶法）BS-11087

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植物高尔基体提取试剂盒（酶法）

  • 产品型号：BS-11087
  • 简要描述：植物高尔基体提取试剂盒（酶法）金畔生物公司供应：ELISA试剂盒,荧光定量PCR耗材，移液器吸嘴，微量离心管，进口冻存管，细胞培养皿，培养板，培养瓶，吸头，仪器及手套，色谱耗材，针头过滤器。
产品咨询在线客服
  • 产品简介

植物高尔基体提取试剂盒（酶法）

植物高尔基体提取试剂盒

试剂盒储存条件：

【注】：2-8℃ 保存。

试剂瓶开盖后各组份按要求条件保存。

拆封后请尽快使用完!

试剂盒组成：

产品组成 组份编号 有效期：

规格 50T 100T

试剂

A：高尔基体提取液A 50ml 100ml 36042A

试剂

B：高尔基体提取液B 25ml 50ml 36042B

试剂

C：试剂WT 1ml 1ml 36042C

试剂

D：高尔基体保存液D 10ml 20ml 36042D

使用说明书一年。

植物高尔基体提取试剂盒-非酶法

【注】：

有效期为试剂盒未拆封前按要求条件保存的有效期。

试剂拆封后请尽快使用完!

注意事项：

1.正式实验前请选取几个样本做预实验，以优化实验条件，取得最佳实验效果。

2.螺旋盖微量试剂管装的试剂在开盖前请短暂离心，将盖和管内壁上的液体离心至管底，避免开盖时试剂损失。

3.禁止与其他品牌的试剂混用，否则会影响使用效果。

4.样品或试剂被细菌或真菌污染或试剂交叉污染可能会导致错误的结果。

5.最好使用一次性吸头、管、瓶或玻璃器皿，可重复使用的玻璃器皿必须在使用前清洗并彻底清除残留清洁剂。

6.实验后完成后所有样品及接触过的器皿应按照规定程序处理。

产品简介：

试剂盒以外自备仪器和试剂耗材：

植物高尔基体提取试剂盒提供全套试剂，适用于从各种新鲜植物组织样本中提取高尔基体。

本试剂盒提取的高尔基体具有完整的活性和功能，可以用于各种下游应用。

除了高尔基体提取试剂盒，还有细胞核提取、线粒体提取等各种亚细胞结构的提取试剂盒以及相关的蛋白质提取试剂盒。

试剂盒以外自备仪器和试剂耗材：

植物高尔基体提取试剂盒提供全套试剂，适用于从各种新鲜植物组织样本中提取高尔基

体。

本试剂盒提取的高尔基体具有完整的活性和功能，可以用于各种下游应用。

除了高尔基体提取试剂盒，还有细胞核提取、线粒体提取等各种亚细胞结构的提取试剂

盒以及相关的蛋白质提取试剂盒。

仪器：

离心机

振荡器

涡旋混匀器

Dounce匀浆器

移液器

冰箱

冰盒

试剂：PBS (pH7.4，实验室常用的10mM磷酸缓冲盐溶液(1X)) (phosphate buffer saline/Dulbecco’s PBS：约含8mM Na2HPO4、2mM KH2PO4、137mMNaCl和3mM KCl)

耗材：

离心管 

吸头

手套

植物高尔基体提取试剂盒（酶法）

使用方法：

使用注意事项：

旋帽离心管装的试剂在开盖前请短暂离心，将盖内壁上的液体甩至管底，避免开盖时液体洒落。

实验过程中的所有试剂须预冷;所有器具须放-20℃冰箱预冷。整个过程须保持样品处于低温。

最好使用 Dounce 匀浆器匀浆，如果没有 Dounce 匀浆器，用普通玻璃匀浆器匀浆也可，但是高 尔基体回收率会下降。 离心机转速有相对离心力(RCF，×g)和每分钟转速(RPM，r/min)两种表示方式，有些离心机 设置有RPM 和×g 显示切换，但部分离心机没有自动切换功能。需要用下面的公式进行换算： g=r×1.118×10-5×rpm2 (r 为有效离心半径，即从离心机轴心到离心收集管底部中心位置的长度，单 位为厘米) 例如: 转速为 3000rpm，有效离心半径为 10 cm，则相对离心力(RCF，×g)为 =10×1.118×10-5×30002=1006.2(×g)。

1. 取 200-500 mg 新鲜植物叶片组织样本，用 PBS 洗涤干净。

2. 用剪刀尽可能剪碎，用冷 PBS 洗涤两次。

植物高尔基体提取试剂盒-酶法

【注】：

也可用刀片将叶片样本切成小块。

3. 加入 500μl 冷的试剂 A，置冰上 10 分钟。

4. 用 Dounce 匀浆器充分匀浆 30-40 次。

【注】：

每上下一个来回为一次。

也可以用电动匀浆机充分匀浆。

5. 将匀浆液在 4℃，1000g 力条件下离心 10 分钟。弃沉淀，收集上清。

6. 将上清在 4℃，3000g 力条件下离心 10 分钟。弃沉淀，收集上清。

7. 将上清在 4℃，6000g 力条件下离心 10 分钟。弃沉淀，收集上清。

8. 在上清中加入 10ul 试剂WT，在 4℃，50000g 力条件下离心 20 分钟。

【注】：

没有 50000g 离心条件，可以降低离心力。

至少要保证 20000g 以上离心力。

降低离心力后高尔基体回收率会下降。

9. 弃上清，在沉淀中加入 500μl 冷的试剂 B，混匀。

10. 在 4℃，50000g 力条件下离心 30 分钟。弃上清，收集沉淀。

【注】：

没有 50000g 离心条件，可以降低离心力。

至少要保证 20000g 以上离心力。

降低离心力后高尔基体回收率会下降。

11. 沉淀用高尔基体保存液重悬保存或直接用于下游实验应用。

【注】：

可以不用试剂盒中提供的保存液。

根据实验需要用自己的其他缓冲液保存或直接用于下游实验