EGY48 Chemically Competent Cell 酵母菌化学感受态细胞

货号： MF2358-1000UL 品牌： Jinpan 标签： 分子生物学

描述

EGY48 Chemically Competent Cell 酵母菌化学感受态细胞

产品标签

LexA双杂交系统；EGY48；Y2HGold；pGBKT7；pLexA；Aureobasidin A （AbA）；金担子素；

产品信息

产品包装

保存与运输方法

保存：其中感受态细胞按标签注明置于-80℃保存，三个月有效。其他组分按照标签注明保存，一年有效。

运输：干冰运输。

产品描述

酵母双杂交系统是用于体内研究蛋白相互作用的一种非常便利的工具，目前采用的有LexA系统和GAL4系统。在LexA系统中，DNA结合域（DNA- BD）由一个完整的原核蛋白LexA构成，转录激活域（AD）由一个大肠杆菌来源的含88个氨基酸残基的酸性肽B42构成），在酵母中能活化基因的转录。正常情况，BD和AD不会结合，将待检测的蛋白质分别与BD和AD融合，形成诱饵融合蛋白（bait-DNA）和诱捕融合蛋白（prey-DNA），只有当诱饵和诱捕蛋白发生相互作用，促使BD和AD的相互接近，才能激活报告基因的转录。

EGY48是LexA系统酵母双杂交用实验菌株，MATα型，能直接转化质粒进行蛋白相互作用验证或双杂交文库筛选和构建。转化标记为ura3，his3，trp1。报告基因为LEU2。EGY48-LexA酵母双杂交系统需要三种质粒配套使用，分别为pLexA、pB42AD和p8op-LacZ。质粒pLexA的筛选标志为HIS3，用于表达诱饵融合蛋白。pB42AD的筛选标志为TRP1，用于表达诱捕融合蛋白。报告质粒p8op-LacZ的筛选标志为URA3，报告基因为LacZ，报告基因UAS来源于LexA op (x6)，只有当诱饵（Bait）和诱捕（Prey）相互作用才能启动LacZ表达。

本品为经特殊工艺制备的EGY48酵母菌化学感受态细胞，用pGBKT7质粒检测转化效率＞104cfu/μg DNA。且在-80℃能稳定保存三个月。

基因型

MATα, ura3, his3, trp1, LexAop (x6)-LEU2

注意事项

1）   最好在冰上融化感受态细胞。

2）   转化高浓度质粒可相应减少用于涂板的菌量。同时转化2-3种质粒可适当增加质粒的用量。

3）   EGY48对高温敏感，最适生长温度为27-30℃，一旦高于31℃，生长速度和转化率都呈指数下降。

4）   菌落变粉红色并不是污染，而是酵母细胞生长中的一种常见现象。当酵母细胞在平板上培养几天，将平板内的腺嘌呤消耗殆尽，那时酵母试图通过自身代谢途径合成腺嘌呤以供利用。然而，某些菌株ADE2基因被破坏，腺嘌呤合成受阻。且ADE4，5，6，7，8基因均正常。由此，造成中间产物P-ribosylamino imidazole（AIR）在细胞的积累使得菌落变为粉红色。

5）   酵母菌在缺陷培养基上生长速度比YPDA培养基慢，营养缺陷成分越多，生长越慢，以转化涂板为例：涂YPDA平板于29℃，48h培养可见直径1mm克隆；涂SD单缺平板于29℃，48-60h培养可见直径1mm克隆；涂SD双缺平板于29℃，60-80h培养可见直径1mm克隆；涂SD三缺或四缺平板于29℃，80-90h培养可见直径1mm克隆；

6）   为了您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作。

使用方法

1）   取100 µl冰上融化的EGY48化学感受态细胞，依次加入预冷的目的质粒2-5 µg，Carrier DNA （95-100℃ 孵育5 min，快速冰浴。重复一次。）10 µl，PEG/LiAc 500µl，用枪吹打几次充分混匀，30℃水浴30 min（在15min时翻转6-8次混匀）。

2）   之后将管子放42℃水浴15 min（在7.5min时翻转6-8次混匀）。

3）   5000 rpm离心40s弃上清，用400 µl ddH2O重悬沉淀，离心30s弃上清。

4）   用50 µl ddH2O重悬，涂板，放入29℃培养48-96 h。

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规格信息