AAV核酸滴度定量检测知多少

随着基因治疗技术日趋完善和临床经验不断积累，监管机构对基因治疗产品的质量控制也愈发严谨慎微。准确的滴度检测是AAV基因治疗药物质控的重要组成部分，也是开展临床研究的前提条件，AAV基因治疗临床试验检测方法汇总如下表。

其中核酸滴度检测是以AAV衣壳中所含基因组作为定量依据，测定的是含有目标基因组的AAV浓度。AAV中包含的基因组是其表达蛋白或RNA的前提，是AAV药物发挥药效的核心和基础。目前AAV核酸滴度检测方法有点杂交法、分光光度计法和qPCR法，qPCR作为第二代PCR方法，是各大研究机构和药企最广泛采用的定量方法。然而qPCR技术存在较大局限性，如检测结果只是相对标准曲线的“相对”定量，且反应容易受qPCR体系中酶或蛋白等成分的干扰，定量结果不够精准等。

ddPCR方法 vs qPCR方法

• 数字PCR（ddPCR）被称为第三代PCR技术，与qPCR技术相比具有以下显著优势：
• ddPCR无需标准曲线即可对目标分子进行绝对定量；
• ddPCR有更高的准确度，定量CV值通常小于10%；
• dPCR抗干扰能力更优，有实验显示，ddPCR检测AAV样本的稳定性高于qPCR技术^[1]。

qPCR方法与数字PCR方法优劣势比较

另一组测试数据也显示^[2]，优化后的qPCR方法中位CV分别为5.35%和4.37%，较大值分别为33.2%和8.7%，而数字PCR用三个独立引物探针组的中位CV值为2%或更低，且分布更密集，可见数字PCR方法定量更加准确，重复性更高。

从监管趋势来看，美国药典在细胞和基因治疗标准品章节中明确写道，AAV标准品定量将会使用数字PCR进行定量，可见数字PCR方法在细胞和基因治疗领域中绝对定量的突出优势。

达普生物AAV核酸滴度数字PCR定量试剂盒邀请广大客户进行内部测试

综上所述，在以AAV为递送载体的基因治疗产品的定量检测中，ddPCR技术已受到越来越多业内人士的青睐，为了满足广大客户的需求，达普生物即将推出其自主研发的AAV基因组ddPCR精准定量试剂盒。上海金畔生物科技有限公司作为达普生物中国一级代理商，现携手达普生物开展“AAV核酸滴度数字PCR定量试剂盒免费测试活动”。

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参考文献：

1. Dobnik, David, et al.2019:1570.，Dobnik, David, et al. “Accurate quantification and characterization of adeno-associated viral vectors.” Frontiers in microbiology (2019): 1570.
2. Martin Lock, Mauricio R. Alvira, Shu-Jen Chen, and James M. Wilson. Absolute Determination of Single-Stranded and Self-Complementary Adeno-Associated Viral Vector Genome Titers by Droplet Digital PCR.HUMAN GENE THERAPY METHODS 25:115–125 (April 2014)