一说起支原体，估计细胞培养的人员就开始手心冒汗了。细胞培养中的急性污染很容易察觉，而支原体则像慢性毒药一般，杀细胞于无形中。除了非常有经验的老手，很多实验人员都察觉不到支原体的污染，据统计，超过25%的细胞系中感染了支原体，而研究者大多并不知晓。早期，血清可能是最主要的污染源；之后，通过实验室的仪器、培养基或其他试剂慢慢蔓延开来，细胞无不中招。怎样才能根除讨厌的支原体污染呢？让我们先来认识这个小东西。

狡猾的支原体

支原体是一种没有细胞壁的原核生物，大多呈不规则球状或丝状。由于它的直径小，而且形状灵活，所以能逃过实验室常用的滤膜。

检测、检测、再检测

对培养物进行常规的支原体检测非常重要。尽管各个实验室的检测频率不同，从几个星期到几个月不等，不过这主要取决于你们实验室有多少人接触细胞，以及你们引进新细胞的频率。比如美国国立细胞培养中心，它经常从其他实验室获得细胞培养物，就会对每个样品进行检测，并将它们隔离，直至最后证明没有支原体污染。一般来说，每两三个月进行一次定期检测是必要的。如果有新细胞进入实验室，或准备将细胞进行液氮保存，都应该进行检测。当然，如果细胞不大对劲，应立马检测。

支原体检测：

检测频率是一方面，选择合适的检测方法也很重要。到底是PCR、生化分析，ELISA还是免疫荧光呢？PCR应该是检测支原体的理想方法，他综合了几个优势，灵敏、特异、快速、廉价等。细胞培养上清可以直接用来检测，非常方便。Applichem公司提供的高灵敏度PCR Mycoplasma Test Kit（A3744）,该试剂盒引物源于支原体基因的保守序列，而且即用型的PCRmix使您的使用更加方便，同时更是提供了阳性对照。当然为了避免假阳性和假阴性，试验中必须设立多种对照：除了阳性对照外，还有阴性对照和内对照。

用Hoechst33258染料检测支原体是很多教科书上推荐的方法。由于支原体含有DNA，能与Hoechest33258染料结合，在500倍数放大情况下，表现为细胞颗粒或纤毛染色。但操作过程较为繁琐，且需要一定的经验辨别支原体，新手可能大不容易掌握。

支原体污染和清除：

如果很不幸，你的细胞已经感染了支原体，怎么办？大部分人的想法可能都是把感染的细胞扔掉，重新开始。一旦感染了支原体，细胞复原的机会很小。所以在液氮中多储存一些备份还是比较明智的选择。

如果你的细胞非常稀有且珍贵，那只能去奋力抢救了。拿什么拯救你，我的细胞？由于支原体没有细胞壁，且代谢慢，故大部分传统的抗生素都不奏效。但是上海金畔公司提供了一些Applichem的支原体清除试剂。Myco-3（A5240），Myco-1（A5222）Myco-2(A5233)。这三类支原体清除试剂是有多种支原体敏感的抗生素研制而成，无细胞毒性。100倍浓缩液直接加入培养基，使用方便。具体的使用方法如下：

Myco-3加入培养基中，每2-3天换液一次，连续处理14天，可有效清除绝大多数支原体污染。

顽固支原体需Myco-1和Myco-2联合使用：Myco-1处理4天后换Myco-2处理3天，如此重复2-3次。

支原体预防：

虽然说支原体可以铲除，但这种劳心劳力的事情估计没有人愿意做，那么平时的预防更重要。上海金畔公司还提供了几样好东西，能预防支原体的污染。具体介绍如下Incubator-Clean（A5230）

用于CO2培养箱的消毒，喷一喷，彻底预防支原体、细菌和病毒等的污染。

Incuwarter-Clean（A5219）

用于CO2培养箱内保持空气湿度的水源消毒，100*即用型浓缩液。

Aquabator-Clean（A5225）

用于水浴的消毒，有效防止各类污染。

需要特别提及的是，液氮罐中也可能有支原体。支原体能耐受液氮的低温，虽然不会增殖，但会污染你的细胞。因此，细胞冻存管还是不要放在液氮内，以免液氮渗进入细胞，而是储藏在液氮的气相中。

不过，预防支原体污染的最佳方法还是良好的细胞培养技巧和正确的态度。虽然这些都是老生常谈，但一旦熟悉了细胞培养，就很容易麻痹大意，时常敲敲警钟还是相当必要的。下面我将上海金畔公司提供的有关支原体预防，检测和清除的产品做一个总结：

支原体预防：

支原体检测：

支原体清除：

除了支原体预防，检测和清除方面的试剂外，上海金畔公司还提供了Applichem细胞培养相关方面的其他试剂，包括各种细胞培养基，氨基酸，抗生素以及糖和盐类。同时也包含了常用的其他生化试剂，如有需要可随时拨打我们的电话：021-50837765.